丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响

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Results：(1)TheDNmodelgroupratscomparewithnonllalcontr01grouprats，the24hourS嘶na巧proteinq眦l时，alkalimphosphataseandtheexpressionofAdipoRlinbonetissuesi驴i6cantlyincreaSed(Jp300mg／24h)。大量白蛋白尿的患者血浆脂联素水平是最高的24．22±10．37№／m1，而且非常显著。正常尿糖尿病患者的血浆脂联素是最低的12．16±5．3№／mL，提示脂联素水平是AER和(Bodymassindex，BMI)的独立预测因子。脂联素作为糖尿病肾病尿蛋白量的独立预测因子。因为，随着糖尿病的进展，尿蛋白量排泄增多，脂联素水平逐渐升高。脂联素是近年来发现的由脂肪细胞分泌的小分子多肽，脂联素通过其受体结合发挥生物学效应，脂联素受体有两个不同的亚型(adiponectinreceptorl，AdipoRl)和(adiponectinreceptor2，AdipoR2)，脂联素受体分布广泛，脂联素通过与AdipoRl和AdipoR2结合，参与肌肉、肝脏、骨骼和脂肪等组织相关的物质代谢和功能调节尤其在调节葡萄糖的转运，胰岛素的敏感性，抗炎，抗动脉粥样硬化中具有重要作用∞1。 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响尽管D0的患病率很高，但是其发病机制目前尚不清楚，但大多数研究认为，多种综合因素均可以造成DO的发生。总之在胰岛素绝对或相对缺乏的基础上，造成机体糖、蛋白质、脂肪代谢紊乱及钙、磷、镁等微量元素代谢障碍与氧化应激、微循环障碍、血流动力学的改变，等多种因素共同参与导致D0的发生。近年来研究认为脂联素在骨代谢中起了十分重要的作用，逐渐引起人们的关注，多数研究认为血清脂联素与BMD之间负相关盯。81，在慢性心力衰竭男性患者研究中认为血浆APN水平与髋部骨密度(Bonemineraldensity，BMD)成负相关∞1。在绝经后女性的研究中同样发现，血浆APN可以减低BMDn0|。对于脂联素在骨代谢过程中的作用机制，可能是通过与其受体结合从而抑制成骨细胞护骨素(osteoprotegerin，OPG)的表达，诱导破骨细胞核因子KB受体活化素配体(ReceptoractivatorofNFkappaB1igand，RANKL)的表达，从而诱导破骨细胞的生成，减低骨密度。有研究于1997年发现OPG为肿瘤坏死因子受体家族成员之一，并对其结构进行分析，表明0PG是一种含有401个氨基酸的分泌型糖蛋白。当RANKL与RANK的结合时，促进破骨细胞的分化和激活，0PG与RANKL的结合能力更强，0PG与RANKL的结合后，可以竞争性的抑制破骨细胞的活化、表达，从而发挥抗骨质疏松的作用n¨。丙戊酸钠(Valproicacid，VPA)为一种不含氮的广谱抗癫痫药物，是目前临床应用较广泛的抗癫痫药物，较多文献报道丙戊酸钠可以引起体质量的改变导致肥胖。有研究利用VPA治疗癫痫患儿，6个月后检测患儿血浆瘦素，脂联素水平，发现患儿血浆瘦素水平较治疗前显著升高，而脂联素水平较治疗前显著下降n2|。同时有研究认为VPA可以从基因水平降低脂联素，其机制可能是VPA抑制了脂转录因子(C／EBP)的作用，从而使脂联素mRNA的表达减少，血浆脂联素水平减低n3|。既然VPA可以减少脂联素的形成，猜想在DN中VPA同样可以抑制脂联素的形成，从而间接减少脂联素升高对骨密度的影响。而在DN中APN与BMD的关系尚未见报道，本课题通过链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射造成糖尿病肾病大鼠模型，通过观察糖尿病肾病大鼠血浆APN，骨组织AdipoRl，OPG的表达，对BMD进行分析，同时观察24小时尿量，24小时尿蛋白定量，血钙，血磷，血肌酐，血尿素氮，碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，ALP)的变化，进一步了解脂联素在DN骨代谢中的作用，探讨脂联素在DO发生，发展中的作用机制。并观察脂联素、VPA分别干预后骨组织AdipoRl，0PG表达情况，BMD的变化和骨组织病理改变状况。为寻找DO的发病因素及预防，提供新思路和理论基础。2 1实验材料、实验试剂和实验仪器1．1实验动物选择健康雄性wistar大鼠36只，体重在320一3409范围内，3～4个月大小，全部购自郑州大学动物实验中心。1．2实验试剂和药物1．2．1实验试剂(1)OPG多克隆抗体美国Abcom生物技术有限公司(2)AdipoRl多克隆抗体美国Abcom生物技术有限公司(3)山羊抗兔IgG—HRP二抗北京博奥森生物技术有限公司(4)小胎牛血清蛋白(BSA)美国Sigma公司(5)二步法免疫组织化学检测试剂美国Abcom生物技术有限公司(6)3％双氧水南京建成生物技术有限公司(7)测定磷试剂盒南京建成生物技术有限公司(8)测定钙试剂盒南京建成生物技术有限公司(9)碱性磷酸酶(ALP)试剂盒南京建成生物技术有限公司(10)无水乙醇北京市义翔化学试剂有限公司(11)氢氧化钠北京市化学试剂二厂1．1．3主要药物(12)枸橼酸盐高压抗原修复液北京中杉金桥生物技术有限公司(13)多聚赖氨酸南京中杉金桥生物技术有限公司(14)磷酸二氢钠北京市义翔化学试剂有限公司(15)DAB显色剂北京中杉金桥生物技术开发有限公司(16)二甲苯北京市义翔化学试剂有限公司(17)磷酸氢二钠北京市义翔化学试剂有限公司(18)苏木素一伊红染料北京市义翔化学试剂有限公司(19)多聚甲醛北京市化学试剂二厂3 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响(20)乙二胺四乙酸北京市化学试剂二厂1．2．2试验药物(1)脂联素武汉智奇生物技术有限公司(2)10％水合氯醛河南开封市妇幼保健院配制(3)O．9％生理盐水江苏恒瑞医药股份有限公司(4)丙戊酸钠江苏恒瑞医药股份有限公司1．3主要药物及试剂的配制(1)脂联素：将2mg脂联素溶于80ml生理盐水中，充分摇匀后，放入冰箱避光保存。(2)丙戊酸钠：丙戊酸钠200mg溶于4ml生理盐水中，充分摇匀后配置成所需的混悬液备用。(3)10％中性福尔马林：用烧杯量取40％福尔马林200ml，天平秤取磷酸氢二钠(Na2HP04)139、磷酸二氢钠(NaH2P04)89，加入到1800ml双蒸水中，摇匀、溶解备用。(4)柠檬酸缓冲液：用天平秤取2．19柠檬酸溶解于盛有100mL双蒸水的烧杯中，再将2．949柠檬酸钠溶解于盛有l00mL双蒸水另一烧杯中。使用前将两配好的溶液按相等比例混合，混合均匀后再测量PH值，尽量使PH值保持保持在4．2—4．5，即是所需的溶液。配好混均后在高压锅中高压灭菌，然后放置于冰箱备用。(5)10％水合氯醛：用天平秤取水合氯醛49，用烧杯量取40ml双蒸水，将水合氯醛加入到双蒸水中，用力摇匀充分溶解后，即为所需的水合氯醛溶液。(6)4％的多聚甲醛的配制：用天平分别秤取磷酸氢二钠48．6949、多聚甲醛409、磷酸二氢钠5．0249加至烧杯中，然后将500ml双蒸水加入烧杯中，将烧杯放入60℃水浴锅中加温，至其充分溶解后，再加双蒸水直至1000m1定容。(7)PBS液，分别用天平秤取KCl0．29、NaCl89、KH2P040．249和Na2HP041．449，加入800ml双蒸水中充分溶解，然后再加双蒸水至1000m1为止，调整PH值至7．4，室温保存。(8)20％EDTA溶液：在500ml双蒸水中加入130．279EDTA，边加入边强烈搅拌，用NaOH调整溶液调整PH值，直到溶液澄清为止，然后再加双蒸水至700ml，保持PH4 l实验材料、实验试剂和实验仪器值在7—8之间为宜。(9)1％链脲佐菌素(STZ)：分别用烧杯量取100mgSTZ，10ml柠檬酸缓冲液，然后将STZ加入到缓冲液中，充分搅拌使其混合均匀。即配成造模所需的1％STZ溶液。因为了防止STZ遇光后失活，应该在造模前30分钟内配制SZT，以免放置时遇光导致STZ失活。1．4实验仪器及实验设备(1)石蜡切片机Siemens公司，德国(2)台式离心机天津医用仪器厂(3)一20℃冰箱，美的公司(4)4℃冰箱美的公司(5)恒温水浴箱天津医用仪器厂(6)一80℃冰箱MDF一382E(N)型Siemens公司，德国(7)TP—C型摊片机上海医疗电子仪器有限公司(8)注射器及针头上海医用制品公司(9)紫外光栅分光光度计上海医疗电子仪器有限公司(10)免疫荧光显微镜数码相机Siemens德国(11)智能型数字干燥和培养两用箱北京成顺仪器仪表有限公司(12)HP—C型烘片机上海医疗电子仪器有限公司(13)普通光学显微镜Siemens，德国(14)电子天平北京医用仪器厂(15)微量移液器Finnpipette上海医疗电子仪器有限公司(16)多功能电子计重秤Mc．2型天津仪表厂 2实验方法与步骤2．1糖尿病肾病动物模型建立与分组3—4月龄健康雄性wista大鼠36只(郑州大学医学院动物研究中心提供)，体重320～3409左右。所有大鼠相同条件下普通饲料喂养1周后，随机选取9只为正常对照组，余下27只大鼠用高糖高脂饲料喂养3周后，于前一天晚上8点取出大鼠笼子里的食物和水，第二天早上8点用天平称取大鼠空腹体重，使用STZ一次性腹腔内注射n41建立DN大鼠模型。根据大鼠空腹体重的多少，按STZ35mg／kg的剂量腹腔注射，用5ml注射器抽取提前配备好的STZ液，一次性腹腔内注射。正常组，糖肾组腹腔注射等剂量的生理盐水。腹腔注射后，全部大鼠放回笼子里，普通饲料喂养，随意饮食饮水。造模一周后采用断尾法采集血液，使用血糖仪和血糖试纸3天连续检测3次血糖，每一次血糖均大于16．7唧ol几者，认为糖尿病动物模型造模成功，血糖小于16．7咖ol几者未成模，重新注射STz，以10mg／kg体重的剂量腹腔注射，72小时后重新测量血糖，大于16．7mol／L者，认为造模成功，血糖仍小于16．7哪ol／L者，放弃大鼠；7天后连续3次测定24小时尿蛋白定量，尿蛋白定量大于35mg／24小时者，认为糖尿病肾病大鼠模型成功。27只大鼠，1只死于肝脏并发症、1只腹腔注射时，误刺伤其他组织，导致死亡，一只死于脑部占位。造成糖尿病肾病成功模型24只，随机为3组：DN模型组(n=8只)和脂联素组(n=8只)丙戊酸钠组(n=8只)。大鼠喂养于河南大学分子生物学实验动物中心，环境符合饲养大鼠规定的要求，有变频空调调节环境温度，加湿器保湿，每2只大鼠一笼，昼夜自然光线照明，排风扇通风，隔天打扫垫料，定期清理打扫鼠笼。2．2给药脂联素组在大鼠造成糖尿病肾病型后即刻腹腔注射脂联素，每kg体重每天10ug脂联素腹腔注射n5|，连续注射10d；丙戊酸钠组给予腹腔注射4ml／kg，每天3次，连续7天腹腔注射n3J。正常组，糖尿病肾病组给予同体积的生理盐水腹腔注射，连续腹腔注射7d。7 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响2-3测定股骨近端1／3处骨密度测定先用5％乌拉坦腹腔注射大鼠，当大鼠麻醉后，出现昏睡状态，稳定5分钟以上时，使用Norland双能X线骨密度仪(河南大学医学院动物分析软件)测定大鼠股骨近端的骨密度值。2．4标本采集实验第11周时，每1只大鼠置于一个金属代谢笼中，自由饮水，饮食，第二天收集24小时尿液。记录尿每只尿量后，保存于一4℃冰箱中。用Siemens，2700型全自动生化分析仪测定24h尿蛋白定量。提前配置好5％乌拉坦备用，按5ml／kg的剂量注射大鼠腹腔内；数分钟后大鼠出现完全麻醉，等麻醉稳定后，用剪刀剪去皮毛，暴露皮下组织，然后迅速打开胸腔，心脏穿刺采血，分离血清，用注射器吸PBS液，注射器刺入心脏，推入PBS灌流固定组织，取出所需组织，置于福尔马林液中。将血液置于一4℃冰箱中保存，用于测定血钙，磷、ALP、肌酐、尿素氮、脂联素；取双测股骨干近端1／3处，去除肌肉，用PBS冲洗残存血迹，然后浸泡于10％中性福尔马林液中固定，福尔马林固定24小时，用20％EDTA脱钙5周，每周更换脱钙液一次，用注射器针头尝试是否能插进去，如能轻松的插进去，证明脱钙完毕，用刀片沿正中最大截面剖开，用不同浓度的酒精脱水，利用二甲苯透明切片，石蜡包埋组织，用切片机沿骨干长轴5lIm厚度连续切片，使用多聚赖氨酸处理过的切片，把切片放入62℃烤箱烘烤大约4h。留作苏木素一伊红染色和免疫组化备用。2．5各项生化指标测定采用德国Siemens血糖仪和血糖试纸测定血糖。用德国Siemens2700型全自动生化分析仪测定血钙，血磷，ALP，血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白定量。2．6骨组织病理检查及免疫组织化学2．6．1HE染色步骤实验利用碱酸性反应显色原理，因为组织切片细胞核内主要是呈酸性的DNA，苏木素为碱性染料，两者反应后显蓝色。而组织切片细胞浆内富含呈碱性的蛋白质，与伊红染8 2实验方法与步骤色后切片被染成红色；根据蛋白质性质的不同，其与伊红反应后，可以呈现不同程度的红色。假如组织切片与两种染料都无法结合，则为中性物质。脱蜡，脱水：(1)切片第一次置于二甲苯脱蜡10min：(2)切片第二次置于二甲苯脱蜡10min：(3)切片第三次置于二甲苯脱蜡10min：(4)切片第一次置于100％乙醇浸泡2min：(5)切片第二次置于100％乙醇浸泡2min：(6)95％乙醇浸泡2min：(7)75％乙醇浸泡2min。染色：(1)苏木素染色5—10min：(2)2％盐酸酒精分化10s：(3)氨水10s：(4)0．5％伊红30s：(5)75％乙醇脱水1min：(6)90％乙醇脱水lmin：(7)100％乙醇脱水10min：(8)切片第一次置于二甲苯透明10min：(9)切片第二次置于二甲苯透明10min。，最后使用中性树胶封片。封片完毕后在0LYMPUS免疫荧光显微镜，在(×400倍)光镜下随机选择切片中5个不同视野，观察骨组织病理形态学的变化。2．6．2ARodRl和oPG免疫组织化学染色步骤2．6．2．1玻片处理(1)在95％的硫酸液中浸泡切片2天；(2)用双蒸水将切片上的硫酸冲洗干净并晾干；(3)把切片放在5％盐酸酒精中4h；(4)用热水冲洗切片直至干净为止；(5)再用双蒸水反复冲洗切片；O 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响(6)切片置入丙酮溶液后赶快取出；(7)再将切片放入盛有2％APES的液体内5min；(8)双蒸水把切片冲洗干净；(9)然后把切片放入37℃的水浴锅内过夜。2．6．2．2烤片：处理过的切片，为了防脱落，提前放在62℃烤箱，烘烤3—6h。2．6．2．3石蜡切片脱蜡脱水：(1)切片第一次二甲苯脱蜡10min：(2)切片第二次二甲苯脱蜡10min：(3)切片第三次二甲苯脱蜡10min：(4)切片第一次无水乙醇脱水2min：(5)切片第二次无水乙醇脱水2min：(6)使用90％乙醇对切片脱水2min：(7)使用75％乙醇对切片脱水2min：(8)切片放入双氧水中孵育8—10min，可以消除内源性过氧化物酶的活性：(9)双蒸水冲洗切片，然后在PBS液中浸泡三次，每次5min：(10)抗原高压修复：将PH=6．0的枸橼酸钠溶液放入烧杯中，用微波炉加热，溶液沸腾后将切片放入持续20分钟；(11)等待修复液恢复至室温，PBS冲洗切片，2分钟×3次：(12)滴加1：80稀释的一抗，平行放置在湿盒内，4℃冰箱过夜：(13)取出放置室温后，PBS冲洗切片，2分钟×3次：(14)稀释山羊抗兔IgG—HRP二抗1：loo，滴加二抗在切片上，尽量覆盖全部组织，置湿盒内，把湿盒放在37℃水浴锅里30min：(15)PBS冲洗切片上多余的二抗、一抗，每次2min，共3次：(16)DAB显色剂显色：A液B液C液等比例混合后，滴加在切片上，大概5—10min后，在显微镜下观察染色情况，出现棕黄色染色后，自来水冲洗掉多余的染色剂：(17)苏木精染细胞核2—5分钟，自来水冲洗：(18)脱水：分别用70％乙醇，90％乙醇，100％乙醇脱水，每次5min；(19)透明：二甲苯透明切片每次10min，共3次：(20)最后使用中性树胶封片。10 2实验方法与步骤然后用OLYMPUS免疫荧光显微镜下观察组织切片，镜下控制染色，直至切片出现棕黄色的阳性颗粒，终止染色。对照组以PBS代替一抗。2．6．3ARodRl和oPG免疫组化染色后对图像进行分析免疫组化阳性积分光密度值的计算，首先光镜下观察免疫组织化学切片，细胞核正常情况下染成蓝色，细胞浆有棕黄色染色则为阳性着色。半定量分析股骨头骨组织中ARodRl和OPG的表达情况，利用ipp8．0图像分析软件分析。把切片上所有棕黄色部分的累积光密度进行测量计算，这个值能反应单位视野下ARodRl与OPG总的表达强度。利用同样的显微镜条件与拍摄条件来拍摄本实验所有的免疫组化切片，在拍摄切片的时候，尽量保持室内光源充足，光源亮度的稳定，采用相同的曝光时间来拍摄切片。图像分析方法具体步骤：(1)调整图片的光密度：carliberationintensity—new—stdopticaldensity—options—incidentlevel—240—230一system。然后把这个校正后的系统光密度值可以应用于所有的切片。(2)选择色彩：调整HSI—H：0—35，S：O一300，I：0—240，之后，点击file—save，然后保存此项选色设置。(3)对分析环境进行设置：Count／Size—selectmeasurement—IOD。(4)对分析环境进行保存：count／size—filesavesettings一然后保存分析环境设置文件。(5)测量阳性着色：count—viewstatistics—IODSUM数值一作为这张切片的累积光密度值。(6)测量所有的切片：挑选一张染色比较好的切片按上述步骤测量，同样使用以上这些测量条件，测量剩余的所有切片。(7)最后记录数据statistics—DDEtoexcel。采用图像分析仪对图像进行分析，每张切片上，随意选取不相重叠的5个视野，计算AdipoRl和OPG蛋白阳性表达的积分光密度值(IOD)，平均光密度和阳性着色面积的乘积等于积分光密度值，能够全面反映AdipoRl和0PG蛋白阳性表达量。2．7统计学方法使用SPSS19．0统计软件对数据进行分析，实验数据以方差分析，均数±标准差表 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响示，四组数据间的比较均采用两样本资料的t检验，当Jp<0．05为差别有统计学意义。12 3动物实验结果3．1一般情况实验过程中脂联素组与实验第3天时死亡1只，是在腹腔注射后死亡，考虑可能为腹腔注射时，没有刺入腹腔内，而是刺伤其他组织所致；丙戊酸钠组大鼠在实验4周时死亡一只，死前大鼠颈部向一侧偏斜，并不自主的转圈，不受自己大脑控制，尸体解剖见脑实质内不规则类圆形结节，推测死因可能为大鼠脑内肿瘤可能性大，糖尿病肾病组大鼠于第5周时死亡一只，尸体解剖见肝脏颜色灰暗，边界不光滑，呈结节状，考虑大鼠可能死于肝脏的并发症。DN模型组和脂联素组，丙戊酸钠组大鼠均出现糖尿病的症状，出现饮食，饮水增多，垫料更换次数增多，并且精神不好，毛色晦暗，不喜活动，大鼠体重下降或体重不增长比较正常组；正常组大鼠饮食饮水正常，二便正常，精神可，活动正常，体重符合正常生长规律，实验过程中无死亡。3．2各组大鼠体重(4周)、体重(8周)以及体重(16周)情况自大鼠购回之日起，4周时糖肾模型组、脂联素组、丙戊酸钠组大鼠的体重与正常对照组比较无明显差异(尸>O．05)。8周时，经脂联素和丙戊酸钠分别腹腔注射后，糖肾组大鼠比较正常对照组体重减轻(P<0．05)，脂联素组比较糖肾组体重无明显差别(P>0．05)，而脂联素组比较正常组体重减轻(JP<0．05)，丙戊酸钠组比较脂联素组、糖肾组体重无明显差别(JD>0．05)，而丙戊酸钠组比较正常组体重减轻(K0．05)，糖肾组、脂联素组、丙戊酸钠组三组体重无明显差别(P>0．05)。16周时，糖肾组大鼠比较正常组体重明显减轻(尸0．05)，而脂联素组比较正常组体重明显减轻(P<0．05)，丙戊酸钠组比较脂联素组、糖肾组体重无明显差别(P>0．05)，而丙戊酸钠组比较正常组体重明显减轻(尸<0．05)。见表l及图】．】～】．3。 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响14∞栅蝗匾寸432430428426424422420418416注：与正常对照组比较，+P<0．05与糖尿病肾病组比较，#P>0．05与脂联素组比较，△尸>O．05与正常对照组比较，※尸>0．05正常组糖肾组脂联素组丙戊酸钠组注：与正常对照组比较※JP>0．05 3动物实验结果∞蚓捡匣∞唧长匿∞f_．正常组糖肾组脂联素组丙戊酸钠组图1-2各组大鼠8周时体重情况600，500≤400一300_200。100一注：与正常对照组比较，’P<0．01与糖肾组比较，#P>0．05与脂联素组比较，△P>0．05★六#★#△正常组糖肾组脂联素组丙戊酸钠组注：与正常对照组比较，’P<0．01与糖肾组比较，舯>0．05与脂联素组比较，△尸>O．053-3四组大鼠24小时尿量和24小时尿蛋白定量变化DN模型组，脂联素组，丙戊酸钠组大鼠24小时尿量和24小时尿蛋白定量均明显150O0O0驵躬舵舡∞鹑鹅"弘站 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响组别只数24h尿量24h尿蛋白定量oE咖{噻工葛16注：与正常对照组比较，+P<0．01与糖肾组比较，#Jp>0．05与脂联素组比较，△P>0．05||I?||★“”“什厶l 3动物实验结果／_、工寸垡∞E＼／皿趟隧￡莴160王40120i00806040200★■■●●■●●●■_糖肾组823．53±2．82。76．46±11．75。15．50±2．49+脂联素组组824．84±3．67‘#77．19±10．35“13．16±2．71“丙戊酸钠组822．25±3．03+#△73．46±15．11+”△13舢±2．24★#△注：与正常对照组比较，。P<0．01与糖肾组比较，4尸>0．05与脂联素组比较，△P>0．0517 丙戊酸钠与脂联素对糖尿病肾病大鼠骨密度的影响18＼oE鞑鲁SoE蛊妄鲁正常组糖肾组脂联素组丙戊酸钠组图3．1各组大鼠血糖的比较注：与正常对照组比较，+JP<0．01与糖肾组比较，#尸>0．05与脂联素组比较，△P>0．05正常组糖肾组脂联素组丙戊酸钠组图3-2四组大鼠血肌酐的比较注：与对照组比较，’尸<0．01与模型组比较，#尸>o．05与脂联素组比较，△尸>0．05的巧∞巧∞so∞加∞的∞的加。 3动物实验结果SoE腻懒送鲁★★#★#△正常组糖肾组腊联素组丙戊酸钠组图3．3四组大鼠血屠藏的比较注：与正常对照组比较，+P<0．01与糖肾组比较，4尸>0．05与脂联素组比较，△P>o．053．5四组大鼠血钙、血磷、血ALP变化与正常对照组大鼠相比，DN模型组血钙、血磷均减低(P<0．05)，血ALP升高(P<0．01)；与DN模型组相比，脂联素组、丙戊酸钠组大鼠血钙、血磷水平升高(P<0．05)，脂联素组血ALP水平比较糖肾组明显升高(P<0．01)，丙戊酸钠组血ALP水平比较糖肾组明显减低(JP<0．01)；丙戊酸钠组较脂联素组血钙、血磷，血ALP水平有所下降(Jp<0．05)。见表4，图4．1～4—3。表4各组大鼠血钙、血磷、A咿的比较(x士s)注：与正常对照组比较，+Po．05)。四组oPG的平均光密度值见表7及图7．2。表7各组大鼠骨组织MipoRl、oPG平均光密度情况比较(i±s)划稍米彝*一叱o．垒勺《24注：与正常组比较，+P<0．05与糖肾组比较，#P<0．05与脂联素组比较，△P