pbac 3xp3 egfp和pbac a3 egfp载体在转基因斜纹夜蛾中表达研究

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1、华南师范大学本科学位论文华南师范大学本科学士学位毕业论文题目：pBac3xP3EGFP和pBacA3EGFP载体在转基因斜纹夜蛾中的表达研究指导教师：李雪峰研究员学生姓名：陈凤丛学号：20072501226院（系）：生命科学学院专业：生物科学毕业时间：2011月6月17华南师范大学本科学位论文目录摘要IIABSTRACTIII1.绪论11.1本课题现国内外的研究概况11.2本实验研究目的与意义12.材料与方法22.1材料22.1.1实验材料22.1.2主要试剂22.1.3主要溶液配制22.1.4主要仪器22.2斜纹夜蛾的人工饲养22.3基因的显微注射32.3.1斜纹夜蛾卵的收集32.3.2卵的

2、排列与固定32.3.3显微注射32.3.4显微注射后的处理32.3.5荧光筛选42.4常用分子技术42.4.1质粒DNA和基因组DNA的提取42.4.2目的基因的PCR扩增42.4.3琼脂糖凝胶电泳43.结果与分析53.1pBac3xP3EGFP在斜纹夜蛾卵中的表达53.2pBac3xP3EGFP在幼虫期的表达53.3pBac3xP3EGFP在成虫中的表达63.4pBac3xP3EGFP和pBacA3EGFP转座体系的效率比较73.5pA3EGFP斜纹夜蛾的分子检测73.6pBac3xP3EGFP阳性幼虫的cDNA检测84.讨论114.1EGFP在斜纹夜蛾中可以正常表达114.2两种不同启动子

3、的比较114.3难于获得阳性个体的原因124.4转座体系的选择1217华南师范大学本科学位论文4.5转基因斜纹夜蛾和家蚕的比较134.6外源基因的表达134.7转基因斜纹夜蛾的遗传嵌合性14参考文献15致谢1717华南师范大学本科学位论文摘要本研究以肌动蛋白A3启动子与眼部和神经特异性3xP3启动子、增强性绿色荧光蛋白（EGFP）基因及SV40多聚腺苷酸识别序列为元件，插入到piggyBac中构建成pBacA3EGFP和pBac3xP3EGFP转座载体，将其显微注射入斜纹夜蛾早期受精卵中，检测其是否表达。结果表明两种载体均能在蛾卵中表达，得到阳性个体。统计分析表明pBacA3EGFP载体在注射

4、卵的荧光表达率和荧光卵孵化率上显著高于pBac3xP3EGFP，其孵化幼虫中表达EGFP的比例也较后者高，表明pBacA3EGFP更适合用于斜纹夜蛾的转座载体。斜纹夜蛾转基因载体的体外瞬时表达不但是成功进行斜纹夜蛾转基因所必需的第一步，而且其自身也可以应用于基因的功能研究，为斜纹夜蛾后基因组研究奠定了基础。关键字：斜纹夜蛾，显微注射，pBacA3EGFP，pBac3xP3EGFP，荧光表达.17华南师范大学本科学位论文ABSTRACTInthisstudy,actinA3promoterandeyeandnerve-specific3xP3promoter,enhancedgreenfluor

5、escentprotein(EGFP)geneandtheSV40polyadenylationrecognitionsequenceforthedevice,insertedintothepiggyBacthenconstructpBacA3EGFPandthepBac3xP3EGFPtransposonvector.TheyhavebeenmicroinjectedintotheearlyfertilizedeggsofS.lituratodetectwhethertheexpression.Theresultsshowedthatthetwocarriersinthemotheggsca

6、nbeexpressedbypositiveindividuals.StatisticalanalysisshowedthatthepBacA3EGFPfluorescenceofvectorexpressionintheinjectedeggshatchingrateandfluorescenceissignificantlyhigherthanpBac3xP3EGFP,thehatchedlarvaeintheproportionofEGFPexpressionthanthelatterhigh,thatismoresuitableforpBacA3EGFPSpodopteralitura

7、transpositionvector.Liturainvitrogenetransfervectorisnotonlyasuccessfultransientexpressionoftransfectedgeneslituranecessaryfirststep,anditsowncanalsobeappliedtostudygenefunction,forthepost-genomeresea