egfp在肿瘤细胞中表达研究分析

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1、个人收集整理仅供参考学习EGFP在肿瘤细胞中地表达分析黄娟西南大学生命科学学院，重庆400715目录摘要IAbstractIII第一章文献综述11.1HTERT基因在肿瘤治疗中地研究进展11.1.1HTERT基因地发现11.1.2HTERT基因地结构和特征11.2HTERT基因在肿瘤治疗中地生物学意义101.2.1端粒与端粒酶101.2.2端粒酶与肿瘤地关系101.2.3针对端粒酶地抗肿瘤治疗101.3HTERT基因肿瘤在治疗中地研究进展111.3.1HTERT基因肿瘤治疗中地发展前景131.3.2H

2、TERT基因在肿瘤在治疗中地存在地问题131.3.3HTERT基因在肿瘤治疗中地展望13第二章引言15第三章材料与方法173.1实验材料173.1.1实验动物173.1.2主要仪器与设备173.1.3主要试剂、培养基和试剂盒183.1.4常用试剂及其配制193.1.5常用生物信息学网站和分析软件203.2实验方法203.2.1猪基因组DNA地提取213.2.2总RNA地提取及cDNA地制备213.2.3EST拼接和引物设计223.2.4PCR及PCR-RFLP分析223.2.5PCR产物地纯化、克隆和

3、测序243.2.6印记分析253.2.7基因组织表达半定量分析263.2.8基因定位分析26第四章结果与分析294.1基因组DNA地提取294.2总RNA地提取与cDNA地制备294.2.1总RNA地提取2910/10个人收集整理仅供参考学习4.2.2cDNA地制备与检测304.3四个候选基因地克隆、印记鉴定与基因定位304.304.3.2猪GTL2基因344.3.3猪RTL1基因384.3.4猪DIO3基因38第五章讨论385.1印记基因地分离385.2印记基因表达地研究方法385.2.1基于“表达

4、地SNP”地分析方法385.2.2应用品种间正反交模型分析印记基因地可行性385.3四个候选印记基因地表达状况385.3.1DLK1基因385.3.2GTL2基因385.3.3RTL1基因385.3.4DIO3基因385.4RTL1和DIO3基因地遗传定位385.5印记基因与动物遗传育种38参考文献38致谢38发表论文及参加课题一览表38摘要：【目地】构建携带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP)质粒载体，通过将启动子置换成端粒酶（HTERT）启动子，使其能在肿瘤细胞中特异性地表达，观察EGFP地表达情况以

5、及对靶细胞生物活性地特异性地影响.【方法】以质粒pEGFP-N3为模板进行PCR反应获得完整保留pEGFP-N3地多克隆酶切位点地EGFP基因片段，定向插入更换启动子地pLenti6V5DTop质粒中，其启动子由原来地PCMV置换为HTERT启动子，筛选出正确地重组绿色荧光蛋白基因地重组载体pLenti6V5DTop-EGFP，在阳离子脂质体地作用下导入肿瘤细胞后，获得具有绿色荧光蛋白颗粒地表达产物，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白作为目地基因在体外地表达情况，以及对肿瘤细胞生物活性地影响.【结果】成功

6、克隆携带有EGFP基因地载体，该载体经导入人地肿瘤细胞后产生稳定地表达产物.b5E2RGbCAP关键词：EGFP基因；pLenti6V5DTop质粒载体；HTERT启动子；pLenti6V5DTop-EGFP；导入；人体肿瘤细胞p1EanqFDPwEGFPgene'sexpressionandanalysisincancercellofhumanDXDiTa9E3djuanhuangSchoolofLifeScience,SouthwestChinaUniversity,Chongqing400715

7、,ChinaRTCrpUDGiTAbstract:【objective】toconstructtheplasmidcarryingenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)geneandtoobservetheexpressionofgreenfluorescentproteinininhumancancercells.【methods】【results】【conclusion】5PCzVD7HxA10/10个人收集整理仅供参考学习Keywords:greenfluor

8、escentprotein(EGFP)gene;pLenti6V5DTopplasmidjLBHrnAILg;HTERTpromoter;translate;humancancercells;第一部分文献综述1.1HTERT基因在肿瘤治疗中地研究进展1.1.1、HTERT基因地发现1985年Blackburn研究小组首先在四膜虫中发现了催化合成端粒重复序列地端粒酶(Telomerase)［5］.之后耶鲁大学Morin(1989)在人宫颈癌细胞中也发现了人