载顺铂联合氯喹聚乳酸静电纺丝膜对口腔癌CAL-27细胞的杀伤作用研究

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1、载顺铂联合氯喹聚乳酸静电纺丝膜对口腔癌CAL-27细胞的杀伤作用研究Thecytotoxicitystudyofpoly(lacticacid)electrospunmembranesloadedwithcisplatinandchloroquineagainstoralsquamouscellcarcinomaCAL-27cellline作者姓名：周丽佳专业名称：口腔基础医学指导教师：张泽兵副教授学位类别：口腔医学硕士答辩日期：2015年5月25日内容提要口腔鳞状细胞癌（oralsquamouscellcarcinom

2、a，简称口腔癌），是口腔黏膜最常见的恶性肿瘤。由于口腔癌病变位置表浅，容易早期发现和诊断，利于局部治疗、观察，是很好的肿瘤治疗模型。化疗是口腔癌的有效治疗方法之一，但存在有耐药、靶向性差、毒副作用大等问题。因此，解决化疗耐药、降低毒副作用是口腔癌化疗治疗中亟待解决的问题。静电纺丝超细纤维药物缓释体系是将电纺丝技术、高分子聚合物以及药物释放三者有机的结合在一起。不同的药物可以很容易的载入材料中，利用静电纺丝具有大的表面积和孔隙度，并通过纤维中的形态，孔隙度和组成的变化控制释放。其大的表面积，有利于逐步释放和特定区域的药物局

3、部传递并减少毒副作用，提高治疗效果，对解决药物控制释放领域中经常出现的载药量低等问题有很大的帮助。并且静电纺丝的制备技术生产过程简单而又经济，因而在其发展过程中显示出了强大的潜力。本研究组的前期工作以及其他研究表明，下调自噬，可以增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，提高化疗药物对肿瘤的杀伤作用。因此，本研究利用静电纺丝技术制成载有化疗药顺铂和自噬抑制剂氯喹的静电纺丝膜，体外作用于口腔癌CAL-27细胞，观察该载药系统对口腔癌CAL-27细胞的作用效果，为口腔癌的治疗提供一个新靶点、新思路和新方法。结果表明：①SEM观察到的载

4、顺铂聚乳酸静电纺丝膜、载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝膜及载氯喹/顺铂聚乳酸静电纺丝膜纳米纤维连续，纤维直径较均匀，表面光滑；②载药静电纺丝膜降解速率在21天左右；③初期载顺铂聚乳酸静电纺丝膜组、载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝膜组及载氯喹/顺铂聚乳酸静电纺丝膜组对CAL-27细胞杀伤作用不明显，随着时间的延长，载顺铂聚乳酸静电纺丝膜组、载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝膜组、载氯喹/顺铂聚乳酸静电纺丝膜组对CAL-27细胞杀伤作用逐渐增强(P＜0.05)。④与载顺铂聚乳酸静电纺丝膜组相比，载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝

5、膜组及载氯喹/顺铂聚乳酸静电纺丝膜组自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ表达减弱。结论：1、获得了具有缓释效果的载顺铂联合氯喹聚乳酸纳米静电纺丝膜。2、载顺铂聚乳酸静电纺丝膜、载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝膜及载氯喹/顺铂聚I乳酸静电纺丝膜具有缓释作用，可以在较长时间内使化疗药物浓度得到维持，延长化疗药物对口腔癌CAL-27细胞的作用时间。3、证明了载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝膜及载氯喹/顺铂聚乳酸静电纺丝膜内的自噬抑制剂氯喹能够下调自噬，提高了CAL-27细胞对顺铂的敏感性，增强了顺铂对口腔癌CAL-27细胞的杀伤作用。因此

6、，载顺铂联合氯喹的静电纺丝膜具有缓释、控释作用、可以局部使用，较长时间内维持药物浓度，降低毒副作用；同时，增加了口腔癌细胞对顺铂的敏感性，提高顺铂对口腔癌细胞的杀伤作用，为口腔癌的治疗提供了实验基础，具有很好的临床应用前景。II载顺铂联合氯喹聚乳酸静电纺丝膜对口腔癌CAL-27细胞的杀伤作用研究目的：探讨载顺铂联合氯喹的聚乳酸静电纺丝膜对口腔癌CAL-27细胞的体外杀伤作用。方法：利用静电纺丝技术制备载顺铂聚乳酸静电纺丝膜（DDP/PLA膜）、载氯喹/顺铂/氯喹聚乳酸静电纺丝膜（CQ/DDP/CQ/PLA膜，复合膜）、载

7、氯喹/顺铂聚乳酸静电纺丝膜（CQ/DDP/PLA膜，共混膜）。通过扫描电镜（SEM）观察三种载药聚乳酸静电纺丝膜的表观形态；紫外分光光度分析法测定聚乳酸静电纺丝膜的降解速率；MTT法比较三种聚乳酸静电纺丝膜对CAL-27细胞的生长抑制作用；激光共聚焦显微镜观察自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ在CAL-27细胞中的表达情况。结果：1、SEM观察到的DDP/PLA膜、CQ/DDP/CQ/PLA膜、CQ/DDP/PLA膜纳米纤维连续，纤维表面光滑，直径较均匀。2、载药聚乳酸静电纺丝膜降解速率在21天左右。3、初期DDP/PLA膜、CQ

8、/DDP/CQ/PLA膜及CQ/DDP/PLA膜对CAL-27细胞杀伤作用不明显，随着时间的延长，DDP/PLA膜、CQ/DDP/CQ/PLA膜组及CQ/DDP/PLA膜组对细胞的杀伤作用增强(P＜0.05)。4、CQ/DDP/CQ/PLA膜组、CQ/DDP/PLA膜组LC3-Ⅱ荧光亮度均低于DDP膜组。结论：1、获