《左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
学号：201520041左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究罗斌斌导师姓名:陈彪专业名称:转化医学申请学位类型:学术型答辩委员会主席:冯忻答辩委员会委员:岳峰张健罗小玲黄仁彬谭国鹤邹春林二〇一八年六月 原创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含获得广西医科大学或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：在校期间论文的知识产权属广西医科大学。学校有权保存论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本论文的部分或全部内容，可以采用影印、复印或其它手段保存、汇编本论文，学校可以向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。同意广西医科大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密论文在解密后遵守此规定。学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月 个人简历基本情况姓名：罗斌斌性别：男民族：汉族出生年月：1992年11月籍贯：江西省乐安县政治面貌：群众学习工作经历起止时间所在院校或单位学历学位职称2011.09—2015.07内蒙古科技大学学士学位无2015.09—2018.07广西医科大学硕士学位无研究生期间科研经历项目起止时间项目名称项目来源本人担任任务2015年-2018年基于自发性糖尿病老年国家自然基金科研助理食蟹猴阿尔兹海默症模项目型的建立和评估2015年-2017年构建和开发具有可识别广西壮族自治科研助理认知功能障碍行为学改区科技厅项目变和近似病理改变的老年痴呆动物模型2016年-2018年非人灵长类动物模型标广西壮族自治科研助理准化操作程序和技术指区科技厅项目标评价体系平台建设 目录英文缩写一览表....................................................................................................1摘要.......................................................................................................................2ABSTRACT.................................................................................................................5前言.......................................................................................................................10第一部分非人灵长类动物行为学分析方法的构建与应用...........................121.1食蟹猴工作记忆DMTS行为装置的构建..................................................121.2食蟹猴工作记忆DMTS行为装置的应用..................................................161.3非人灵长类动物运动行为学的研究分析-EthoVisionXT13...............22第二部分左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究..................................................................................................26一实验材料.....................................................................................................27二实验方法.....................................................................................................28三实验结果.....................................................................................................47四讨论.............................................................................................................69参考文献...............................................................................................................73综述.......................................................................................................................80参考文献...............................................................................................................88致谢.....................................................................................................................93攻读硕士学位期间发表的论文..........................................................................95 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文英文缩写一览表英文缩写英文全称中文全称PDParkinson’sdisease帕金森病DMTSDelayMatching-to-Sample延迟样品匹配任务AAALACAssociationforAssessment国际实验动物管理评估andAccreditationof及认证协会LaboratoryAnimalCommitteeIACUCInstitutionalAnimalCareand实验动物伦理委员会UseCommitteeMPTP1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetr1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四ahydropyridine氢吡啶DADopamine多巴胺MAPMovementassessmentpanel运动测试仪PAMPersonalactivitymonitor身体活动监测仪PUTPick-UpTest拾物测试EEPTExtensorExercise执行伸肌运动时间PerformanceTimeFMPTFineMotorPerformanceTime执行手部精细运动时间FEPTFlexorExercisePerformance执行屈肌运动时间TimeLBLewybody路易小体1 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究摘要研究背景帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）是一种多见于中老年的神经系统退行性疾病，临床上以运动症状：静止性震颤、运动徐缓、肌强直、姿势障碍为主要特征，还伴有嗅觉障碍、睡眠障碍、精神情感障碍、自主神经功能障碍和认知功能障碍等非运动症状。PD的发病源于多种致病因子所引起的氧化应激反应、线粒体功能障碍、炎症反应、免疫功能异常等，从而导致黑质多巴胺神经元大量变性丢失。尽管在过去几十年中不断有治疗方案出台和新药上市，但仅仅对症下药，始终没有针对发病机制进行根本性解决，时至今日，帕金森病仍然是一种无法治愈的疾病。非人灵长类动物具有许多与人类高度相似的生理学特征，MPTP诱导建立的猴帕金森病模型具有典型代表性，无论是临床症状的变化，还是病理和生化的改变都与人类原发PD十分相似，是进行PD新药研发的最佳模型。目的本研究对认知行为学DMTS方法进行构建，评价MPTP造模7年后的慢性偏侧PD模型食蟹猴的运动和非运动学变化，以及通过左旋多巴和多奈哌齐干预后评价其运动与非运动行为的改变。方法1.构建认知行为学DMTS评价方法并应用于食蟹猴认知行为学训练，探讨不同食蟹猴的学习差异。2.通过临床评分、全身运动活动总量监测、精细运动PUT取食测试和MAP取食测试、20min移动距离和活动量、转圈计数等方法对偏侧PD食蟹猴造2 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文模7年后的运动行为进行评价。3.通过DMTS认知评价、夜间睡眠活动的方法对偏侧PD食蟹猴造模7年后的非运动行为进行评价。4.分别对造模7年后PD组与对照组进行左旋多巴与多奈哌齐药物干预后在运动行为学与非运动行为学的影响的比较。结果1.食蟹猴训练总体的训练成功率为52.00%，其中雄性训练成功率（82.00%）高于雌性（34.00%）；T2DM与肥胖模型食蟹猴训练成功率（67.00%）相同且高于糖尿病前期（56.00%）和正常食蟹猴（33.00%）；年龄≥20岁的食蟹猴训练成功率为63.00%，高于11岁至19岁食蟹猴（40.90%）。食蟹猴训练雌性所需时长略高于雄性食蟹猴，正常食蟹猴所需时长显著高于训练总体、糖尿病模型、糖尿病前期模型、肥胖模型的时长（P<0.05）。2.MPTP造模7年后食蟹猴临床评分为（3.86±0.56），精细运动测试中PUT取食PD组左上肢取食所需时间（23.14±3.56s）显著高于对照组（P=0.003），而PD组右上肢始终无法进行取食测试操作；粗大运动监测中PD组全天24h与白天12h全身运动活动总量均低于对照组，但没有显著差异；PD组夜间12h全身运动活动总量低于对照组，但没有显著性；PD组20min录像中移动的距离和对应活动量都高于对照组，但都没有统计学意义；PD组旋转圈数为（30.50±7.33），对照组未发现有旋转现象。PD组DMTS认知评价中5s、10s、15s、30s延迟下的正确率都显著低于对照组（P＜0.01）。3.左旋多巴干预后PD组临床评分（2.43±0.23）较基线显著降低（P=0.022），其中右上肢运动技巧评分较基线明显下降（P=0.010）；给药后PD组精细运动PUT测试左上肢所需时间较基线显著下降（P=0.020），MAP测试中FMPT（0.28±0.04s）较基线显著减少（P=0.049），PD组右上肢依然无法进行取食操作；粗大运动监测中给药后PD组全天24h和白天12h的全身运动活动总量较基线都明显升高（P<0.01）。给药后PD组转圈次数（19.25±7.77）显3 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文著低于给药前基线（P=0.001），对照组给药前后都没有旋转行为。DMTS认知评价中，给药后PD组5s、10s、15s、30s延迟下正确率较基线都没有显著性差异。4.多奈哌齐干预后PD组临床评分较基线无明显差异。精细测试中，给药后PD组左上肢所需时间与基线差异较小，不具统计学意义，右上肢依然无法进行精细运动测试。给药后PD组全天24h和白天12h运动活动总量都高于基线值，但并不显著。给药后PD组旋转次数（9.50±3.91）较出现显著减少（P=0.042）。DMTS认知评价中，给药后PD组5s、10s、15s和30s延迟下正确率较基线都有所变化，但都没有统计学意义。结论基于WGTA构建的DMTS认知行为装置和随意运动评价方法是行为学评价研究的重要手段。食蟹猴MPTP造模后7年临床症状有所改善但依旧未能完全恢复，运动障碍和认知障碍依然存在，证明仍然是慢性PD状态，经左旋多巴给药可以改善其临床症状，以及运动障碍的缓解，验证了动物的PD模型。多奈哌齐并未改善认知能力，表明长期PD与认知相关的神经环路发生了改变，不单单局限于乙酰胆碱能神经元。关键词帕金森病，食蟹猴，行为学，左旋多巴，多奈哌齐4 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文EFFECTSOFLEVODOPAANDDONEPEZILONMOTORANDNON-MOTORBEHAVIORINCYNOMOLGUSMONKEYSWITHCHRONICPARKINSON'SDISEASEABSTRACTBackgroundParkinson'sdisease(PD)isadegenerativediseaseofthenervoussystemmorecommoninmiddle-agedandelderlypeople.Itismainlycharacterizedbyrestingtremor,bradykinesia,myotonia,andposturedisorders,andolfactorydisorders,sleepdisorders,mentalandemotionaldisorders,autonomicdysfunctionandcognitivedysfunctionandothernon-motorsymptoms.ThepathogenesisofPDiscausedbyoxidativestress,mitochondrialdysfunction,inflammatoryresponse,andabnormalimmunefunctionduetoavarietyofpathogenicfactors,resultinginmassivedegenerationofdopamine(DA)neuronsinthesubstantianigra.Inspiteofthecontinuousintroductionoftreatmentprogramsandthelaunchofnewdrugsinthepastdecades,sofarthereisstillnotherapycancureorslowthediseaseprogression.Untilnow,Parkinson'sdiseaseremainsanincurabledisease.Non-humanprimateshavemanyphysiologicalcharacteristicsthataresimilartohumans.ThemonkeyParkinson'sdisease5 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文modelinducedbyMPTPisatypicallyrepresentative,includingclinicalsymptoms，pathologicalandbiochemicalchanges..ItbecomesawidelyacceptedexperimentalmodelforPDstudy.ObjectiveInthisstudy,weestablishedthecognitivebehavioralDMTSmethod,evaluatedthemovementandnon-kinematicalchangesofchroniclateralcynomolgusmonkeyPDmodel7yearsaftertheMPTPinduction,andassessedthemovementandnon-motoractivityofcynomolgusmonkeysafterinterventionwithlevodopaanddonepezil.Method1.ToestablishacognitivebehavioralDMTSassessmentmethodandapplyittothetrainingofcognitionandbehaviorofmacaquemonkeystoexplorethelearningdifferencesofdifferentgroupsofcynomolgusmonkeys.2.Behavioralchangesafter7yearsofmodelingoflateralPDcynomolgusmonkeyswereexaminedthroughclinicalscores,totalbodymovementmonitoring,finearmmovementwithPUTfeedingtestandMAPfeedingtest,20-minutemovingdistanceandactivityamount,andcirclingcountingBehavior.3.Non-motorbehaviorchangesafter7yearsofmodelingofhemilateralPDcynomolgusmonkeyswereexaminedbymeansofDMTScognitiveevaluationandnighttimesleepactivity.4.EffectsoflevodopaanddonepezilonPDandnon-kinesisbehaviorsafter7yearsofmodelinginPDandcontrolgroupswereinvestigated.Result1.TheoveralltrainingsuccessrateofcynomolgusmonkeyforDMTStestwas52.0%,ofwhichmaletrainingsuccessrate(82.0%)washigherthanfemale(34.0%).Thesuccessrateofcynomolgusmonkeysaged≥20yearsoldwas6 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文63.0%,higherthanthatofyoungercynomolgusmonkeys(11to19yearsold,40.9%).ThetrainingsuccessrateofT2DManimals(67.0%)wasthesameasthatofobesemonkeys,higherthanthatofthepre-diabetes(56.0%)andnormalcynomolgusmonkeys(33.0%).Thelengthoftimerequiredfortrainingfemalesofcynomolgusmonkeyswasslightlyhigherthanthatofmalecynomolgusmonkeys.Thelengthoftimerequiredfornormalcynomolgusmonkeyswassignificantlyhigherthanthatofgeneraltraining,diabetesmodels,pre-diabetesmodels,andobesitymodels(P<0.05).2.ThePDclinicalscoreofcynomolgusmonkeyswas(3.86±0.56)after7yearsofMPTPmodeling,andthetimerequiredforPUTofnon-lesionedlefthandofthePDgroupwashigher(23.14±3.56s)thanofthecontrolgroup(P=0.003),butthelesionedrightupperlimbofthePDgroupcouldnotperformthefeedingtest.ThetotaldailyactivitycountsofthePDgroupwaslowerthanthatofthecontrolgroupduring24hoursand12hoursbutwasnotstatisticallysignificantly,sowasthe12hournightactivity.Thetotaldailytraveldistanceandcorrespondingactivitycountsinthe20minutesvideorecordingwasslighthigherinthePDgroupthanthoseinthecontrolgroup,buttherewasnostatisticalsignificance.TherotationnumberofthePDgroupwas(30.50±7.33),andnorotationwasfoundinthecontrolanimals.Thecorrectrateof5s,10s,15s,30sdelayforDMTScognitiveevaluationwassignificantlylowerthanthatofcontrolgroup(P<0.01).3.TheclinicalscoreofthePDgroupwassignificantlylowerthanthatofthebaselineafterLevodopainterventionsignificantlydecreasedthetotalPDclinicalscore(2.43±0.23)(P=0.022),andtheimprovementofthelesionedrightupperlimbmovementwasmuchmoresignificantly(P=0.011).ThetimerequiredtopickupthefoodinthePUTtestwassignificantlyshortenintheleft7 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文non-lesionedupperextremityafterlevodopatreatment(P=0.020),sowastheFMPT(0.28±0.04s)intheMAPtest(P=0.049),butthelesionedrightupperlimbwasstillunabletoperformthefeedingoperations.Thetotaldailyactivitycountswassignificantlyhigher(improved)thanthatofthebaselinebothat24hcycleandthe12hcycleafterlevodopatreatment(P<0.01).ThenumberofrotationinthePDgroupanimalsafterlevodopaadministration(19.25±7.77)wassignificantlylowerthanbeforetheadministration(P=0.001).IntheDMTScognitionevaluation,therewasnosignificantdifferenceintheaccuracyafter5s,10s,15s,30sdelayforthePDgroupascomparedwithbaseline.4.TherewasnosignificantimprovementforthePDclinicalscoresbeforeandafterdonepezilintervention.Inthefinearmmovementtest,thetimerequiredforthenon-lesionedleftupperlimbwasalsonotstatisticallysignificantdifferentbeforeandafterdrugtreatment.Thelesionedrightupperlimbwasstillunabletoperformfinemotortesting.Thetotaldailyactivitycountswasslightlyhigherbutnotsignificantlydifferentafterdrugtreatmentbothat24hand12hperiod.Thenumberofrotationsafterdrugadministration(9.50±3.91)wassignificantlylowerthanbeforethetreatment(P=0.042).FortheDMTScognitionevaluation,thecorrectrateafter5s,10s,15s,and30sdelaywasnotsignificantlydifferentbeforeandafterdrugadministration.ConclusionTheDMTScognitivebehavioraldeviceandvoluntarymovementevaluationmethodsconstructedbasedonWGTAarevalidedforbehavioralevaluationofMPTP-inducedPDmodel.ThechronicclinicalsymptomsofMPTPincynomolgusmonkeyswereimprovedafter7yearsbutstillfailedtofullyrecover.Bradykinesiaandcognitiveimpairmentsstillexist,whichprovesanimalsarestillinthechronicPDstate.Administrationoflevodopacan8 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文improvetheirclinicalsymptoms,includingbradykinesia.DonepezildidnotimprovecognitiveperformanceoftheMPTP-inducedPDanimals,suggestingthatchangesinthelong-termPD-cognitive-relatedneuralcircuitsarenotlimitedtoacetylcholineneurons.KEYWORDSParkinson'sdisease，Cynomolgusmonkey，Behavior，Levodopa，Donepezil9 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文前言帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）是一种隐匿性起病、呈慢性发展、多发病于中老年的神经系统退行性疾病。1817年詹姆斯对帕金森病的临床特征进行了最早的报道，其临床上以运动症状：静止性震颤、肌强直、运动徐缓、姿势异常为主要特征，还伴有嗅觉功能障碍、睡眠功能障碍、自主神经功能障碍、精神情感障碍和认知功能障碍等非运动症状[1]。研究认为PD的发病源于多种致病因子所引起的氧化应激反应、线粒体功能异常、炎症反应、免疫功能异常等，从而导致黑质多巴胺神经元大量变性丢失[2]。帕金森病在老年人群中的患病率呈指数式增长，大于65岁的人群中PD患病率约为1%～2%，超过85岁则高达3%～5%[3]。而在PD临床症状被诊断出之前，已经有长达20年[4]的PD前驱表现，主要存在非运动症状：睡眠障碍、抑郁表现、焦虑、嗅觉异常、白天嗜睡等[5]，这些都是难以预测和诊断。目前治疗最为有效的办法就是采用左旋多巴（L-Dopa）替代治疗[6]，但仍然无法有效阻止或延缓疾病的恶化，L-Dopa所带来的负面症状是严峻的：5年左右的疗效稳定期，5年后超半数的患者出现并发症-疗效减退及运动障碍等，10后可高达80%[7]，年轻的PD患者的运动并发症高达100%[8]，即所谓的“左旋多巴衰竭综合征[7]。尽管在过去的几十年中不断有治疗方案出台和新药上市，但仅仅是对症下药，始终没有针对致病机理进行根本性解决，最终造成严重的运动障碍和痴呆，多数PD患者在15年后死亡[9]。时至今日，帕金森病的治疗只是单纯改善了症状，却始终无法遏制病情发展，仍然是一种无法治愈的疾病。灵长类动物是自然界最高等的种群，世界上已知的现存的包括人类在内的灵长类动物共有509种[10]。它们是动物界唯一拥有最发达的大脑以及可以进行精细而灵活的抓握技能，这种运动特性是其他种属所没有的。对非人灵长类动物进行神经相关疾病的研究中具有特有的优势，不仅仅在于10 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文其是研究人类大脑高级功能的关键动物，它们还是最佳的研究脑相关疾病机制和治疗手段的的模型动物。非人灵长类动物的拥有类似人类一般的发达中枢神经系统，具有复杂的认知能力和社交行为、精细运动的掌控，能够进行类似人类的记忆任务，这对于客观评价情感和认知行为、社交能力、记忆功能和运动行为等神经疾病相关的典型行为指标尤为重要[11]。在基于脑基础上的神经科学研究中，利用非人灵长类动物开展的相关科学研究极大利于对PD[12,13]和阿尔茨海默症等神经疾病的病理学的了解和临床上的治疗。在中枢神经系统退行性疾病的相关研究中，非人灵长类动物模型相比于啮齿类动物可以更好地模拟人类的神经病理性变化，其神经生物学特征与人类高度相似，而且最关键的是，灵长类动物经过人为的行为学训练，完成特定的行为学测试的相关操作，用于认知行为学评价与情感障碍评估以及社交状态等，这是啮齿类动物永远都无法替代的[13]。由于非人灵长类动物具有许多与人类高度相似的生理学特征，MPTP诱导建立的猴帕金森病模型具有典型代表性[14]，无论是临床症状的变化，还是神经病理性变化和生化的改变都与人类的原发PD十分相似，是进行PD模型研究中的代表[15]。在MPTP诱导灵长类动物PD模型的长期研究中，除EdwardF等[16]（1998）和MarinaE等[17]（1998）进行了长期的PD相关的影像学研究，鲜有进行长期的较全面的综合性的行为学评价研究。相比影像学研究[18,19]和病理学研究[20,21]，我们首次运用运动与非运动行为学评价手段研究PD模型7年后的行为发展变化，可为PD的长久跟踪和治疗提供有效的参考价值，对研究神经修复和细胞移植等具有重要价值。11 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文第一部分非人灵长类动物行为学分析方法的构建与应用在人类正常老化过程中，与大脑额叶相关的工作记忆会受到影响，如阿尔兹海默症病人的认知功能存在障碍，包括视-空间记忆、注意力和工作记忆功能，这些往往影响到了额叶记忆系统以及颞叶海马记忆系统[22]。把对己经历过的路径的记忆称作工作记忆，工作记忆一般是指为指导进行性的行为而储存下来的信息[23]。非人灵长类动物具有发达中枢神经系统，它们有复杂的认知和社会行为、细微动作行为的控制，可以完成与人相似的记忆任务，这对于客观评价认知、记忆能力和精细运动等脑疾病相关核心行为指标尤为重要[11]。非人灵长类动物行为学测试与评价是研究疾病模型临床行为的重要手段，被广泛应用于神经生物、神经疾病及相关药物的评价。为全面评价灵长类动物运动与非运动行为学，我们对用于评价工作记忆能力和评估随意运动活动进行了方法的构建并进行应用。1.1食蟹猴工作记忆DMTS行为装置的构建可以用威斯康星通用测试装置以及剑桥神经心理自动化装置，对动物模型的视-空间学习等认知功能变化进行评价。威斯康星通用测试装置(WisconsinGeneralTestApparatus，WGTA)是灵长类动物行为学的常用经典装置，1938年由Harlow设计[24]（图1-1）。基于WGTA，一般会选择空间延迟应答(delayedresponse，DR)来评价猕猴的工作记忆能力，包括延迟样本匹配任务（DelayMatching-to-Sample,DMTS）被认为是评价猕猴学习记忆能力的典型方法，并且沿用至今[25,26]。在认知行为实验过程中，在测试平台内设立多个食物孔，并在其中一个食物孔中放有动物喜欢的小零食作为奖励刺激，在一定时间内限制动物对食物孔的观察后，记录动物获取奖励的正确次数，从而评价动物的学习记忆能力。认知行为评价实验主要包括行为训练和记忆评价两个阶段，其12 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文中，行为训练阶段主要是实验员通过反复的进行动作引导动物学习以及熟悉测试规则，降低动物个体存在的学习记忆能力的差异对实验结果的影响，一般行为训练阶段设立2个食物孔，进行一定延迟时间阻断动物观察食物孔，然后让动物进行思考与选择，如果选择了具有食物奖励的食物孔，则记为正确，否则反之，通过计算动物在该延迟时间下的选择的正确率，从而评价其学习能力[27]。而记忆评价阶段则通过设定不同的合理的随机出现的延迟时间或者增加食物孔数量，实现对动物认知能力的全面评价[28]。图1-1Harlow设计的威斯康辛通用测试装置[24]Fig1-1WisconsinuniversaltestdevicedesignedbyHarlow根据WGTA的装置原理，我们进行了装置的设计，基本设计情况如下所示：图1-2认知行为装置DMTS整体图Fig1-2DMTSoverallviewofcognitivebehaviordevice13 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文整体图（图1-2）：人在A面，动物在B面。位于A面的单透挡板与位于B面的不透明挡板通过绳索相连，上方介入一个定滑轮，绳索长度固定，单透挡板往上走（人可以操作），不透明挡板即下走（挡住猴的视线），不透明挡板重量大于单透挡板，所以可以将单透挡板下方的拉绳挂在挂钩来实现整个过程。这个过程可以实现整个实验过程动物看不到人，但是人始终可以看到动物。为了保证单透挡板的单透性能（内外光线强弱决定）以及吸引猴的注意，我们在F处安装一个便携的灯泡，为了保证最佳角度的视频录像，我们可以在C处焊接一个相机底座，用于安放录像机。图1-3认知行为装置DMTS内部图Fig1-3DMTSinternalviewofcognitivebehaviordevice内部结构中（图1-3），在靠近动物一面的两个取食孔处设立单独的小挡板（与前面所讲的大挡板不重复），通过压式弹簧和脚踏板来随时控制左右取食孔的开放与关闭，这个设计可以满足一些需要动物单手操作的实验。将弹簧和踏板装置设置在下方，避免动物对其进行破坏，也不会遮挡动物视野。我们通过此装置进行食蟹猴的延迟样本匹配任务认知行为学训练。通过设置三个平行食物井，左右两个为动物可触碰可操作，中间为只可观察不可触摸的食物井。首先将黑色挡板将动物视野挡住，然后在中间食物井放置一块目标推板（Object），拉开黑色挡板，让动物观察目标推板后，再14 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文闭上挡板，然后将目标推板随机放置于两侧的任意一侧食物井上，并在食物井内放置小零食，另一侧食物井（未放置任何食物）则放上另外一块动物未曾观察过的推板，延迟一定时间后，拉开黑色挡板，让动物选择刚才它观察过的目标推板，选择正确可以获得食物井中食物奖励，选择错误则没有任何奖励。为避免动物对目标推板进行记忆，我们总共设置了8块不同的推板。考虑到动物的耐性以及实验的可操作性，我们将单只动物每次训练次数设置为25trails，这样可以保证动物配合度。整个行为训练过程主要分为两个阶段，第一阶段为认知行为训练阶段，第二阶段为认知行为评价阶段（图1-4）。在第一阶段：为保证行为实验的时间控制，我们会对动物进行最开始的初步的行为性情筛查，包括以下四个方面：1.无人为干扰安静状态下动物的行为表现；2.食物刺激下动物的行为表现；3.威胁刺激下动物的行为表现；4.陌生坏境下动物的行为表现。通过初步筛查后挑选合适的动物纳入认知行为训练实验中。训练开始，动物需要进行环境的适应，包括先对陌生笼具以及行为装置的适应，然后是对行为训练人员的适应，在人员适应的过程中，训练员同时会对动物进行简单的食物喜好测试，记录每只动物对不同食物的喜好情况，以保证动物的配合度。之后，不断地通过正向的食物奖励，训练动物，让动物学习正确操作行为装置，以获取食物奖励，并通过不断重复的训练，保证动物可以完整的配合操作次数的完成。接下来需要进行的就是让动物理解实验规则，懂得如何选择正确的推板以获取食物，在此过程中，如若动物选择错误则没有任何奖励。当动物理解实验规则，并且连续四次训练（25trials*4=100trials）正确率不低于80%，我们即认为该实验动物已经达到行为训练的标准。在第二阶段：每次认知行为评价，每只动物需要连续四天进行四次完全随机的延迟样本匹配任务实验（共设置4个延迟间隔：5s，10s，15s，30s）。15 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图1-4DMTS认知行为评价实验流程Fig1-4ExperimentalprocessofDMTScognitivebehaviorevaluation1.2食蟹猴工作记忆DMTS行为装置的应用1.2.1实验目的我们对装置进行了设计，并通过实际动物行为训练来对装置进行检验，并进行应用。为评价食蟹猴认知行为的水平，必须先通过DMTS行为装置对食蟹猴进行第一阶段的认知行为学训练，以保证第二阶段的认知行为评价得准确性与客观性。同时为了了解不同性别和不同身体状况，以及不同年龄对行为训练这种方式的行为反馈，我们也进行了相关的统计和分析。以下操作程序即为行为训练第一阶段。1.2.2实验操作适用范围灵康实验室（认知行为学实验室）。1.2.3所需物品DMTS行为学装置，高清录像机，表格（非人灵长类动物DMTS行为学前期训练情况记录表，DelayMatching-to-Sample无延迟随机版），零食等。1.2.4环境适应16 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文所有动物进行行为训练前必须先经过不少于2周的环境预适应。首先让动物对陌生的行为实验笼以及出现在它面前的行为装置适应，然后是对行为训练员的熟悉。预适应过程将对动物进行福利优化，包括观看动画片，听轻音乐，以期尽可能减少动物焦虑和紧张的心态。同时，将对动物进行简单的食物喜好判断，每次给予它最喜欢的食物作为配合操作的奖励。1.2.5学习行为操作1.2.6实验开始前准备工作，包括对DMTS行为学装置及CUE推板的消毒（每只动物实验结束后均需重新用酒精消毒），若干小食品，秒表，非人灵长类动物DMTS行为学前期训练情况记录表，DMTS表无延迟随机版及签字笔等；检查个人防护如口罩、帽子、面罩等；检查笼具闸门安全性、有无伤害到动物的尖利物；两名或两名以上人员完成动物转运工作。1.2.7将当天测试的动物于隔天晚上进食后清料，并于测试当天早上禁食直至测试结束；通过转运笼及推车将食蟹猴从饲养笼转移至行为房行为笼后，于测试开始前10分钟左右，对实验动物通过提供小食品及娱乐项目等措施消除其紧张、消极或焦躁的情绪，并注意观察动物有无异常的行为举动，如表现的紧张情绪、异常的运动方式、身体不适等，并做好记录。1.2.8测试人员将DMTS认知测试装置装于行为笼，用三脚架将高清录像机摆放置猴椅前方对准实验动物，并于写字板上填写好动物ID、实验内容、日期和时间等信息，在测试前放于高清录像机前2秒并确保被拍摄下来。1.2.9将装置中间取食卡槽前透明小滑门关闭，并把不透明的滑动挡板插入DMTS装置主板左右两侧卡槽中，同样使其处于关闭状态。1.2.10首先根据DMTS记录表格的“Q”列，选择对应推板作为目标推板，将其放置在中间的取食卡槽上（卡槽下不放食物），同时将左右两侧的滑动挡板缓缓打开，确保目标推被实验动物看见（观看时间不定），然后将挡板再次滑动关闭，并开始计时。1.2.11然后根据表格中的“Q-LOC”列位置标示（L/R），将目标推板放在左侧17 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文或者右侧取食装置上，并在目标推板下放置小块食品（注意此处以实验动物为参照物确定左右）。1.2.12再根据表格中的“CAF”列，选择对应推板作为干扰推板，将其放在目标推板另一侧的取食卡槽（如目标推板在左边，则干扰推板在右边），干扰推板下面不放食品。1.2.13本次为第一阶段的行为训练期，Delay时间为0s，Delay时间结束后，缓慢将两侧滑动挡板同时打开（切勿速度过快，以免使动物不经思考即推板），待动物判断并完成推板（正确选择出目标推板即可获取下面放置的食物，反之无）后，重新将两侧挡板滑动关闭。给予动物20秒时间休息再进行下一次推板操作。1.2.14最后在DMTS记录表格中“RSP”列记录下动物的表现，如选择目标推板则为正确，记录为“1”，如选择干扰推板则为错误，记录为“0”，如果60秒内实验动物没有做出任何的应答反应，则记录为“-2”。1.2.15按照DMTS记录表的预设随机顺序，重复执行上述推板操作直至完成表格预设的推板次数，同时记录下食蟹猴推板实验过程中出现的意外情况。测试完毕后将动物转移回房饲养笼并给予食品奖励，并对测试装置进行清洗、消毒及行为学测试房的清扫。图1-5a：食蟹猴做出正确推板并从取食槽抓取食物图1-5b：工作记忆-认知功能测试不同Fig1-5a:Cynomolgusmonkeyweremadethe的玩具推板accuratejudgmentchooseandgrabbingfoodFig1-5b:DifferentobjecttoysofpushfromfoodwellplateforCognitive-workingmemorytest18 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文1.2.16实验结果我们将动物开始进行“学习行为操作”至“达到行为训练标准”这段过程所需要经历行为训练累积时间作为动物行为训练成功的所需总时长，每只动物进行行为训练的频率保持在每周3次，每次训练时间约30min。我们对经过认知行为DMTS训练的46只食蟹猴（雌性29只，雄性17只）进行训练成功率和训练成功所需总时长进行统计分析：46只食蟹猴总体训练成功率为52.00%（训练成功：24只，未能训练成功22只），针对性别不同进行分析，雄性食蟹猴训练成功率为82.00%，远高于雌性食蟹猴（训练成功率34.00%）（图1-6a）；其中对于不同身体状况统计分析中，二型糖尿病模型和肥胖模型的食蟹猴训练成功率皆为67.00%，高于糖尿病前期模型（训练成功率56.00%）与正常食蟹猴（33.00%）（图1-6b）；对不同年龄段进行分析，发现≥20岁的食蟹猴训练成功率为63.00%，高于11至19岁食蟹猴的训练成功率（40.90%）（图1-6c）。图1-6a雌性、雄性食蟹猴与训练总体的训练成功图1-6b不同身体状态食蟹猴与训练总体的训练成功率率的比较的比较（二型糖尿病、二型糖尿病前期、肥胖、正常）Fig1-6aComparisonofTrainingSuccessRateFig1-6bComparisonoftrainingsuccessratesbetweenbetweenFemaleandMaleCynomolgusMonkeysandcynomolgusmonkeysandtrainingpopulationsindifferentTrainingOverallsphysicalstates(type2diabetes,prediabetes,obesity,normal)19 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图1-6c11-19岁、大于等于20岁食蟹猴与训练总体的训练成功率的比较Fig1-6cComparingthetrainingsuccessrateof11-to18-year-oldcynomolgusmonkeys,cynomolgusmonkeysolderthan20yearsoldandtrainingOveralls动物训练总体训练成功所花的平均总时长为（700.83±101.16min），针对不同性别进行统计分析，发现雌性食蟹猴所需时长（799.00±191.83min）高于雄性食蟹猴(630.71±109.22min)，但没有统计学意义（图1-7b）；对不同身体状况进行统计分析，发现正常食蟹猴所需时长(1240.00±292.52min)远高于训练总体、二型糖尿病模型（550.00±40.33min）、糖尿病前期模型(586.00±148.19min)、肥胖模型(675.00±172.39min)的时长，且具有显著差异（P=0.027，P=0.022，P=0.016，P=0.044）（图1-7a）；从年龄段分布来看，11至19岁食蟹猴所需时长(762.86±219.48min)高于≥20岁食蟹猴训练所花的时间(675.29±114.84min)（图1-7c）。20 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图1-7a不同身体状态食蟹猴与训练总体的训练成图1-7b雌性、雄性食蟹猴与训练总体训功所需时长的比较（二型糖尿病、二型糖尿病前期、练成功所需时长的比较肥胖、正常）Fig1-10aComparisonofthelengthoftimeFig1-7aComparisonofthelengthoftimerequiredforrequiredforthetrainingsuccessofFemale,thetrainingsuccessofcynomolgusmonkeyswithmalecynomolgusmonkeysandtrainingdifferentphysicalstates(type2diabetes,pre-diabetesOverallstype2,obesity,normal)图1-7c11-19岁、大于等于20岁食蟹猴与训练总体训练成功所需时长Fig1-7cComparisonofthelengthoftimerequiredforthetrainingsuccessof11-to18-year-oldcynomolgusmonkeys,cynomolgusmonkeysolderthan20yearsoldandtrainingOveralls同时，基于动物福利保障和考虑实验时间的因素，我们将每只动物的最初进行行为训练开始一直到2个月，如果这两个月内动物的行为操作学习几乎没有任何进展或者进展过于微小，我们将对动物进行淘汰，以便节省时间，挑选其他动物替换。我们对淘汰的22只动物进行了主要淘汰原因的简单记录和分析，结果所示：21 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文表1-1食蟹猴行为训练淘汰的主要原因和雌雄数量序号淘汰原因雄性（只）雌性（只）1始终拒绝进食022对食物刺激的反应较低063身体外伤104始终拒绝配合行为操作155自残026撕咬装置017摇晃行为笼018反应过于迟钝或者动作过于缓慢119长时间未能理解实验规则1010一直尖叫0312配合行为操作的程度越来越低021.2.17实验结论通过对46只食蟹猴进行认知行为训练，我们发现整体训练结果良好，DMTS行为装置是具有较好的可操作性和动物适应性，动物基于该装置的训练成功最饥饿的反馈就是训练总时长的多少，而本装置进行行为训练平均时长是在实验进度接受以内的，实验原理是完全参考基于WGTA的延迟样本匹配任务所设计并严格实施的。从动物各分组来看，雄性食蟹猴训练成功率远高于雌性，训练成功所需要时间也低于雌性食蟹猴，但是年龄组之间的差异性并不明显，而从疾病模型来看，健康食蟹猴比其他疾病模型需要花更多的时间来训练。1.3非人灵长类动物运动行为学的研究分析-EthoVisionXT13EthoVisionXT13是一套动物行为影像运动轨迹跟踪软件（荷兰Noldus公司），其具有自动侦探功能，实现自动跟踪轨迹，同时可以进行手动行为事件记录功能，允许手动记录特定行为，主要用于记录无法全自动可靠探测的行为以及核实和调整自动探测的行为。基于此方法，我们可以对随意22 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文运动进行量化分析，多参数探讨，快速评价相关运动能力。我们通过对食蟹猴进行行为录像，录像方式设置为两种形式：一种无人为干扰录像；另一种是食物刺激录像。无人为干扰录像即将动物转移至行为录像房中的单个行为录像笼，无任何人为干扰的情况下进行录像，主要观察动物在无干扰下的自然活动情况。食物刺激录像则是在录像过程中加入食物刺激因素，即在录像笼正中顶部放置一个有机玻璃食物架，动物在食物的吸引下，需要通过攀爬两侧的笼壁，或者悬空挂在顶部，或者无任何扶持的情况下下肢站立并伸出上肢拿取食物架中的食物，这种特定的行为运动可以更加详细的观察到动物各方面的运动技能。录像完毕后，通过EthoVisionXT13对录像进行离线分析，根据热图（Heatmap）的颜色深浅（颜色越深，停留时间越长，反之同理）以及轨迹可视图（TrackVisualization）的轨迹线路（红色线条所示），直观的观察到运动轨迹线路以及各位置停留时间的长短，同时可以将动物移动的距离（Distance）以及活动量（Activity）等进行定量分析。从基于食物刺激因素下动物的运动直观表（图1-8a）中可以直观看出动物运动的轨迹和停留时间的差别：PD模型动物尝试过多次攀爬运动，轨迹较为杂乱无章，这是由于其躯体运动异常而造成的多次取食失败后又不断尝试去攀爬取食的结果；而正常食蟹猴运动行为方式较为简单，行动能力正常从而进行攀爬取食的尝试次数较少。攀爬次数越多，间接代表着攀爬取食失败的次数越多。在无人为干扰下动物的运动直观表现（图1-8b）中可以直观看出动物运动的轨迹和停留时间的差别：PD模型动物轨迹较为杂乱，而正常动物运动形式较为单一。总之，本研究方法，对日常的随意运动都可快速、直接而无创又经济地对运动行为提供多参数评价研究。23 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图1-8a在食物刺激因素下食蟹猴的行为直观表现（运动轨迹图和热图）Fig1-8aBehaviorofCynomolgusmonkeysunderfoodstimuli（TrackVisualizationmapandHeatmap）图A、B分别为一只正常食蟹猴的热图、轨迹可视图；图C、D分别为另一只正常食蟹猴的热图、轨迹可视图；图E、F分别为一只PD模型食蟹猴的热图、轨迹可视图；图E、F分别为另一只PD模型食蟹猴的热图、轨迹可视图。24 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图1-8b在无人为干扰下食蟹猴的行为直观表现（运动轨迹图和热图）Fig1-8bBehaviorofCynomolgusmonkeyswithouthumanintervention（TrackVisualizationmapandHeatmap）图M、N分别为一只正常食蟹猴的热图、轨迹可视图；图I、J分别为另一只正常食蟹猴的热图、轨迹可视图；图O、P分别为一只PD模型食蟹猴的热图、轨迹可视图；图K、L分别为另一只PD模型食蟹猴的热图、轨迹可视图。25 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文第二部分左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）是一种隐匿性起病、呈慢性发展、多发病于中老年的神经系统退行性疾病。1817年詹姆斯对帕金森病的临床特征最早的报道，其临床上以运动症状：静止性震颤、肌强直、运动徐缓、姿势异常为主要特征，还伴有嗅觉功能障碍、睡眠功能障碍、自主神经功能障碍、精神情感障碍和认知功能障碍等非运动症状[1]。研究认为PD的发病源于多种致病因子所引起的氧化应激反应、线粒体功能异常、炎症反应、免疫功能异常等，从而导致黑质多巴胺神经元大量变性丢失[2]。帕金森病在老年人群中的患病率呈指数式增长，大于65岁的人群中PD患病率约为1%～2%，超过85岁则高达3%～5%[3]。2007年研究报告显示，我国PD患者人数约占全球50%，2005年我国PD病例数约为2.0×106例，全球约4.0×106例；到2030年我国PD病例数约为4.9×106例，全球约8.7×106例[29]。其中诱发认知障碍的概率高达25%~67%，PD患者出现的认知功能损害可能成为继AD之后诱发痴呆的第二大病因，并且PD患者的认知功能障碍是正常人发展为痴呆的双倍，PD发病8年后诱发痴呆的概率接近80%[30]。有研究显示，轻度认知障碍患者中有接近15％在1年内、40％在2年内、20％～53％在3年内、过半数在4～5年内发展为痴呆。迄今为止，PD的治疗手段虽能改善症状，却不能遏制病情发展，仍然是一种无法治愈的疾病。非人灵长类动物在自然进化上与人类的亲缘关系非常接近，它们与人类在神经生理、行为学、情感和生物遗传学等方面有很多共性，因此被广泛的用作人类疾病、运动行为和认知行为的研究模型[31]。MPTP能选择性损伤黑质部DA神经元从而模拟帕金森病的临床症状[32,33]，同低等的啮齿类动物相比，非人灵长类动物在病理基础上与PD病人更加类似，因此，26 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文MPTP诱导的猕猴模型是研究PD的最佳动物模型[34]。一实验材料1实验动物本实验所用的12只雄性食蟹猴（13~16岁）由广西南宁灵康赛诺科生物科技有限公司提供，该公司灵长类动物实验室（以下简称灵康实验室）已通过国际实验动物管理评估及认证协会(AssociationforAssessmentandAccreditationofLaboratoryAnimalCommittee，AAALAC)认证。PD组为7只偏侧PD模型雄性食蟹猴，体重（7.941.11）kg，Control组5只正常雄性食蟹猴体重（7.741.04）kg。其中PD组食蟹猴于7年前进行MPTP左侧颈内动脉注射：7只雄性食蟹猴体重（5.90±0.86）kg，术前禁食12h，盐酸氯胺酮(0.1mL/kg)肌注，术中异氟烷（1.0%~3.0%）持续吸入维持麻醉；将60ml5.0%MPTP溶液以4.0ml/min的速度开始于食蟹猴左侧颈总动脉末段注射MPTP（按照2.0mg/kg体重）。动物饲养护理和实验操作以及行为学测试实验在灵康实验室进行，动物饲养生活区环境温度24.0~28.0℃，湿度50.0~75.0%，12h/12h光线亮暗交替（每天早上7点开灯，晚上19点关灯）。动物每日早餐晚餐饲喂灵长类专用动物饲料（国家标准GB14924.82001），每餐固定投食量控制在80g左右，午餐提供新鲜水果和蔬菜，动物自动饮水系统24小时提供不限量的反渗透过滤安全饮用水，日常福利优化包括：每天下午进行2小时轻音乐播放全覆盖、每只动物饲养笼内至少一个玩具、每半个月定期动画片视频观看等。本研究实验方案均通过实验动物伦理委员会（IACUC）的审核及批准。2主要试剂和耗材多巴丝肼片（左旋多巴）：上海罗氏制药有限公司安理申（盐酸多奈哌齐）：卫材（中国）药业有限公司27 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文人员防护设备及耗材：广西欧文医疗科技公司3主要设备和软件全身运动活动总量PAM监测器：美国MiniMitter公司PUT取食装置：参照Jeffrey（1995）的PUT（Pick-UpTest）取食实验制作MAP装置：参照Gash(1999)（monkeyMovementAssessmentPanel,mMAP）改良制作DMTS认知行为学装置：基于威斯康辛通用测试装置（Wisconsingeneraltestingapparatus）改良制作EthoVisionXT13：荷兰Noldus公司高清录像机：日本Sony公司个人计算机：中国联想公司猴椅、美式动物饲养笼、欧式动物饲养笼、行为录像笼：苏州猴皇动物实验设备科技有限公司转移笼、转移车、行为笼：广西南宁灵康赛诺科生物科技有限公司二实验方法1药物干预实验方案1.1多巴丝肼片（左旋多巴）28 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文实验流程图中：单纯给药：多巴丝肼片，每只动物单次给药250mg，一天两次，分别于早餐前和晚餐前进行正向给药或者强饲法给药；数据采集A：①临床评分录像；②运动行为学PUT取食测试；③运动行为学MAP行为测试；④PAM芯片昼夜运动量监测；⑤认知行为学DMTS行为评价。数据采集B：①临床评分录像；②运动行为学PUT取食测试；③运动行为学MAP行为测试；④PAM芯片昼夜运动量监测；⑤认知行为学DMTS行为评价。1.2安理申（盐酸多奈哌齐片）29 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文实验流程图中：单纯给药：安理申，每只动物单次给药5mg，一天一次，于晚餐后进行正向给药或者强饲法给药；数据采集C：①临床评分录像；②运动行为学PUT取食测试；③运动行为学MAP行为测试；④PAM芯片昼夜运动量监测，⑤认知行为学DMTS行为评价。2动物给药实验操作2.1实验目的对动物进行药物干预，分别给予多巴丝肼片和安理申片剂口服。由于灵长类动物不同于其他啮齿类等低等动物，我们更加关注动物正向训练之下的行为诱导和更多的福利保障，我们积极并鼓励实施正向给药法，大部分动物可以进行此实验操作，不过少部分动物无法尽快适应该方法，为了保证实验的进行，我们也会在必要时进行强饲法。2.2实验操作和适用范围：灵康实验室（动物实验操作房）灵康实验室（动物饲养房）2.3物品清单：多巴丝肼片，安理申，研钵，胃管，20ml注射器，50ml注射器，动物专用碗具，纯净水，猴椅等。2.4正向给药法：诱导给药2.4.1目的：为保证动物福利以及良好的药效实验效果，倾向于进行正向给药法，通过将药片磨成粉末，并分次藏于小块香蕉（其他水果亦可，依照动物食物喜好而定）内，让动物自行通过进食水果的同时将药物服下。2.4.2准备的物品：药片，研钵，水果刀，香蕉等水果，将研钵，水果刀进行消毒备用。2.4.3准备好药片，用研钵将药片碾碎成粉末，用水果刀将单个香蕉截面切成四等份，用水果刀刃部在每一小段香蕉中间划开一道切口，用纯净水沾湿切口内部，将药粉倒入切口中并将切口合上，每只动物每次的药片用量30 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文限于两小段香蕉。2.4.4核对每只动物的用药量和小段香蕉数量。2.4.5把每只动物的含有药粉的香蕉块投放到对应动物的饲养房的料槽，然后稍远离动物，待动物完全将香蕉全部吃下（不包括储藏在动物食馕内）再行离开。2.4.6如若动物有部分含有药粉的香蕉未能吃完，则进行以下的强饲法给药。2.5强饲法：灌胃给药2.5.1将胃管、注射器及磨药得研钵和食物的用具等用煮沸法消毒备用。2.5.2将药片按照给药剂量进行研钵碾碎成粉末，按量用纯净水将所有药粉和溶解混均，视容积装入20ml或50ml的注射器内待用（灵长类动物一般允许的最大灌胃量为15ml/kg）。2.5.3用动物专用碗或其他消毒过的容器装一碗纯净水用于胃管润滑和冲洗。2.5.4将实验动物用牵引杆从笼具中牵出上猴椅。2.5.4灌胃：插好胃管后将注射器连于胃管慢慢将药液推入胃中。以下均为灌胃成功的表现：灌入的流食不从动物嘴角流出，推注注射器时感觉顺畅，灌胃过程中动物没有出现呛咳、呼吸困难及呼吸窘迫等不适反应。2.5.5拔管：药液灌注完成后，用注射器抽取5-10ml纯净水再连于胃管末端，用纯净水将胃管内残留的药液或食物冲洗入胃内（用14#导尿管用做胃管，容量是4ml，所以为了保证用于灌药的药物浓度，用注射器抽取5ml纯净水冲管即可；如果是用于灌食物，可以抽取10ml纯净水冲管）。冲洗完毕后，快速将胃管抽出动物口腔或鼻孔，期间尽量避免刺激动物胃壁造成呕吐反应。如有动物对拔管敏感，动作应尽可能轻柔，速度可适当放缓。3灵长类动物临床评分录像（视频录像与评分）31 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文3.1实验目的为了探究MPTP诱导的偏侧PD食蟹猴造模七年后临床症状的情况，通过与Control组同时进行临床评分录像，并基于Kurlan（1991）非人灵长动物帕金森病模型临床评分量表对录像进行双盲评分，通过对比PD组与Control组间的差异性，分析PD组食蟹猴的临床症状的变化。3.2实验操作适用范围灵康实验室（行为录像房）。3.3所需物品转移笼，转移车，行为录像笼，透明有机玻璃取食架，高清录像机及三脚架，个人计算机，零食等3.4临床评分录像操作流程3.5具体操作3.5.1将动物零食（新鲜水果块（清水冲洗并沥干）、山楂片、花生、葡萄干、地瓜干等，依动物个体食物喜好进行选择）分别透明有机玻璃取食架中，待用。3.5.2在行为录像笼正前方通过三脚架将录像机进行位置与镜头调试，调试完毕后将录像机进行固定，充电，待用。3.5.3将猴子转入行为录像笼中，无任何人为干预情况下，录像5min，并记录时间。3.5.4第5min开始，将食物架悬挂于录像笼正中顶部，悬挂完毕后操作员32 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文立即离开录像房，并记录时间。3.5.5第20min开始，操作员进入录像房，并在录像笼的一侧（避免穿过镜头视线）分别对动物做出以下动作：①恐吓表情；②向前冲击势动作；③猴杆伸入录像笼并靠近动物；可渐进式的反复对动物进行这三项动作。3.5.6第25min开始，将录像机关闭，用转移车将动物转移回对应的动物房笼内，并给与零食奖励，清洗录像笼和食物架，并对食物架进行酒精消毒，打扫录像房。3.5.7将录像机连接电脑，将录像文件进行导出并注明动物编号和拍摄日期等基本信息，删除相机内的该文件。3.5.8对所有录像进行代码编写：将每个录像的信息（动物编号，录像时间等）与随机代码一一对应，并将录像文件命名为对应代码。3.5.9由两名专业人员根据Kurlan（1991）版的临床评分量表[35]（图2-2）对录像中动物所展现的临床症状进行分开独立评分（图2-1）。3.5.10评分完毕后，每只动物的评分取平均值，并记录各单项评分。备注：初次进入行为录像房而异常紧张焦虑的动物可以先给与三至五天的适应期。33 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图2-1视频录像实时采集的部分评价动作Fig2-1PartoftheevaluationactionFigsacquisitionfromthevideoreal-timea:右手震颤情况采集；b:左手震颤情况采集；c,d:总体运动技能采集；e,f:平衡能力采集；g:上肢运动技能情况采集；h:下肢运动技能情况采集34 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图2-2非人灵长类动物帕金森病模型临床评分量表[35]Fig2-2NonhumanprimateParkinson'sdiseasemodelclinicalscorescale35 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文4基于临床评分录像的行为影像运动轨迹跟踪分析4.1实验目的EthoVisionXT13是目前动物行为分析中处于领先技术的行为影像运动轨迹跟踪分析软件，通过对临床评分录像进行离线数据分析，采集动物移动距离和对应的活动量，通过对数据的量化和直观表现，可以更加全面精细评价动物的运动行为学变化。我们通过对临床评分录像（25min）中前20min进行软件分析，具体操作程序如下所述。4.2实验操作和适用范围灵康实验室（实验室）。4.3所需物品个人电脑，EthoVisionXT13（软件）4.4具体操作4.4.1将临床评分录像文件导入个人电脑，并进行备份。4.4.2双击打开EthoVisionXT134.4.3在弹出的对话框右侧选择“Newexperiment”中的“New”并点击打开，弹出对话框中“Name”栏填入动物编号，“Location”栏选择合适文件夹，然后点击“OK”。4.4.4选择左侧界面第一大项“Setup”，单击下属第一列“ExperimentSettings”，在中央界面找到“AnalysisOptions”，并在“Activityanalysis”一栏打钩选中。4.4.5选择左侧界面第一大项“Setup”，单击下属第三列“ArenaSettings(1)”，再单击下属“ArenaSettings1”一栏，在中央界面“GrabBackgroundImage”对话框中的“Videofile”一栏选择所需要分析的录像视频文件，并单击“Grab”；接着右侧出现“ArenasandZones”一栏，单击下属第一列“DrawScaletoCalibrate”，分别对视频中行为笼的长宽进行选取并输入合适尺寸；4.4.6选择左侧界面第一大项“Setup”，单击下属第四列“TrialControl36 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文Settings(1)”，再单击下属“TrialControlSettings1”一栏，在中央界面找到“Condition-Time(1)”，点击“Settings”，在对话框中“Conditionismet”中的“Afterarandomtime”中将时间改为“between0.0secsand20mins”，单击“OK”。4.4.7选择左侧界面第一大项“Setup”，单击下属第五列“DetectionSettings(1)”，再单击下属“DetectionSettings1”一栏，在右侧“DetectionSettings”中选择“Detection”下属的“AutomatedSetup”，然后在弹出的视频框中选中目标（即实验动物），通过调节“Finetune”来控制黄色区域的最佳范围。4.4.8选择左侧界面第三大项“Analysis”，单击下属第二列“AnalysisProfile(1)”，再单击下属|“AnalysisProfile1”一栏，在“DependentVariables”框中分别全选第一列“Movement”，第二列“Location”，第五列“Body”，并分别在各对应的对话框中“TrialStatistics”一栏将“Mean”、“Frequency”、“Total”选中。4.4.9选择左侧界面第二大项“Acquisition”，单击下属“Acquisition(0acquired)”，在中央界面点击“Readyforstart”，并勾选“DDS”，再点击播放键，进行视频自动播放与自动分析。4.4.9分析结束后，选择左侧界面第三大项“Export”，单击下属“RawData”“Statistics”进行数据导出。5运动行为学评价-精细运动PUT（Pick-UpTest）取食测试5.1实验目的帕金森病主要表现在运动方面的强直、震颤和运动徐缓，通过评价手部精细运动能力PUT取食测试，可以充分反映运动行为学的变化。参照Jeffrey（1995）的PUT（Pick-UpTest）取食实验自行制作的PUT取食装置，评价37 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文PD组食蟹猴与正常猴上肢精细运动差异即本实验研究目的。5.2实验操作适用范围灵康实验室（运动行为实验室）。5.3所需物品转移笼，转移车，行为笼，PUT取食装置，高清录像机及三脚架，秒表，若干1cm3苹果块，花生等。5.4环境预适应所有动物均须进行2周运动行为实验及行为笼的环境预适应。一般通过提供多种零食（依动物喜好提供）及娱乐项目（包括：看动画片、听轻音乐）等措施，以消除动物紧张或焦躁的不安情绪，平均每周2至3次，每次半小时于固定时间段进行，以便加速动物对实验环境的适应。5.5取食训练正式实验测试前，所有动物均须进行2周的取食练习，每周5次，每次约半小时，于固定时间段进行，直至熟练完成取食操作。5.6取食测试5.6.1实验开始前准备工作，包括对PUT取食装置的清洗与消毒（每只动物实验结束后需重新消毒），若干1cm3苹果块和花生，秒表，相关表格及签字笔等；检查个人自身防护装备：口罩、手套、头套、面罩、鞋套等；检查笼具的闸门安全性、有无可能伤害到动物的尖利物；由两名实验人员完成实验动物安全转运工作。5.6.2将当天测试的动物于前一天晚上进食后清空料槽，并于测试当天早上禁食直至当天实验测试结束；通过转运笼及转运车将动物从动物房饲养笼转移至运动行为学实验室的行为笼后，于测试开始前10分钟左右，对动物通过提供少量零食及播放轻音乐等措施消除动物不安情绪，并注意观察动物有无异常行为，如表现的紧张情绪、反常的运动方式、明显外伤等，并做好记录，并通知兽医进行检查。38 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文5.6.3研究人员将PUT取食装置固定于行为笼，用三脚架将高清录像机摆放置猴椅前方对准实验动物，并于录像打板上填写好动物ID、操作项目、日期和时间等基本信息，在测试前放于高清录像机前5秒并确保被拍摄下来。5.6.4实验人员按照取食表格实验记录顺序在取食装置的左边的九个凹槽中任意放置6块苹果块，一手持秒表计时、一手打开取食装置的塑料档板，并将实验动物完成取食用时报于另一实验人员记录（注：食蟹猴取食时间以动物将上肢手部自A孔伸出为开始，直至取完取食装置中全部六块苹果上肢手部离开A孔回抽至行为笼中为结束）。5.6.5动物左右上肢间隔交替进行，每次测试每侧上肢完成6次取食操作，同时记录下食蟹猴取食的食物种类和大致的数量以及实验过程中出现的意外情况。5.6.6测试完毕后将动物转移回动物房饲养笼并给予零食奖励，并对测试装置进行清洗、消毒及运动行为实验室的清扫。图2-3食蟹猴从PUT取食槽抓取食物Fig2-3CynomolgusmonkeyweregrabbingfoodfromthefeedingtroughofPUT39 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文6运动行为学评价：精细运动MAP（MovementAssessmentPanel）取食测试6.1实验目的食蟹猴进行MAP取食操作可以分解为三步骤：上肢手臂伸展运动、指部抓取食物运动、上肢手臂屈缩运动。为了解PD组食蟹猴各部分精细运动较Control组之间的差异，本实验通过MAP测试装置，完成食蟹猴取食操作过程中的不同部分进行精细运动用时的分析与比较。6.2实验操作适用范围灵康实验室（运动行为实验室）。6.3所需物品MAP测试装置，个人计算机，MAP应用程序，高清录像机及三脚架，取食记录表，大小合适的水果块及零食等。6.4环境预适应所有动物均须进行2周运动行为实验及行为笼的环境预适应。一般通过提供多种零食（依动物喜好提供）及娱乐项目（包括：看动画片、听轻音乐）等措施，以消除动物紧张或焦躁的不安情绪，平均每周2至3次，每次半小时于固定时间段进行，以便加速动物对实验环境的适应。6.5取食训练：正式实验测试前，所有动物均须进行2周左右的严格取食训练，每周5次，每次约半小时，于固定时间段进行，直至熟练完成取食操作。6.6取食测试：6.6.1实验开始前准备工作，包括对MAP取食装置的清洗与消毒（每只动物实验结束后需重新消毒），若干1cm3苹果块和花生，秒表，相关表格及签字笔等；检查个人自身防护装备：口罩、手套、头套、面罩、鞋套等；检查笼具的闸门安全性、有无可能伤害到动物的尖利物；由两名实验人员40 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文完成实验动物安全转运工作。6.6.2将当天测试的动物于前一天晚上进食后清空料槽，并于测试当天早上禁食直至当天实验测试结束；通过转运笼及转运车将动物从动物房饲养笼转移至运动行为学实验室的行为笼后，于测试开始前10分钟左右，对动物通过提供少量零食及播放轻音乐等措施消除动物不安情绪，并注意观察动物有无异常行为，如表现的紧张情绪、反常的运动方式、明显外伤等，并做好记录，并通知兽医进行检查。6.6.3研究人员将MAP取食测试装置装于行为笼，通过VGA数据线将测试装置与个人计算机连接，电脑运行MAP实验测试程序，输入动物基本信息和日期及时间；用三脚架将高清录像机摆放置猴椅前方对准实验动物，并于录像打板上填写好动物编号、操作项目、日期和时间等基本信息，在测试前放于高清录像机前5秒并确保被拍摄下来。6.6.4待实验动物稳定下来后，将取食孔的挡板拿下撤离。实验动物看见取食台中央位置放置的苹果块，将上肢手臂从A孔伸出进至取食台抓取食物离开、再经A孔退回至行为笼中，放下挡板，使其处于封闭状态即为完成一次取食测试操作，将电脑软件中的各部分用时记录于表（注：实验动物取食操作过程中以手臂从A孔进到B孔的时间记为执行伸肌运动时间，即为第一部分上肢执行手臂伸展的时间；第二部分上肢手指抓取食物即手部执行精细运动时间，以手部自B口进直到取食台抓取食物后退出B口的时间来表示；以手臂从B口运动进入A口过程的用时记为执行屈肌运动时间，即第三部分上肢执行手臂屈缩的时间）（见图2-2）。6.6.5实验动物左右上肢实行间隔交替测试，每次每侧上肢完成6次取食操作，同时记录食蟹猴取食种类和大致数量以及实验过程中出现的意外情况。6.6.6实验完毕后将实验动物转移回动物房饲养笼并给予零食奖励，并对测试装置进行擦拭、消毒及运动行为学实验室的清扫。41 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图2-4食蟹猴从MAP取食台抓取食物Fig2-4CynomolgusmonkeyweregrabbingfoodfromthefeedingplatformofMAP7运动行为学评价-粗大运动：全身运动活动总量分析-PAM活动量监测7.1实验目的：全身运动活动总量PAM（PhysicalActivityMonitoring）监测器是一款针对动物进行中短期全天候24h运动活动量监测的装置。有人认为，在PD病情发展过程中，PD患者除行为运动活动量降低受限于运动障碍之外，伴随可能的日间嗜睡现象、快速动眼睡眠功能障碍以及失眠等睡眠障碍的并发率居于PD非运动行为症状前列。本实验将通过动物佩戴的颈圈并结合身体-行为PAM监测器，对实验动物于动物房饲养笼中每日的24h运动活动总量进行追踪和分析，并将PD组全天24h、白天12h、夜间12h运动量分别与Control组比较，分析两组动物睡眠情况的差异。7.2实验操作适用范围灵康实验室（动物房饲养笼）。7.3所需物品全身运动活动总量PAM（PhysicalActivityMonitoring）监测器，专用读取器ActiReader，ActicalSoftware3.0软件，氯胺酮注射液，阿托品注射液，42 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文颈圈，个人计算机等。7.4具体操作7.4.1实验前将PAM芯片数据读取器连接到个人计算机的串口，将芯片置于读取器特定区，运行Actical3.0软件待其成功读取芯片信息确保芯片可用后，设置预实验动物的相关参数如动物ID、体重、性别、年龄，将芯片装回监测器后备用。7.4.2将当天执行佩戴身体活动监测器的实验动物于当天早上禁食直至装载结束；将动物麻醉后，把大小适合的固定有活动监测器PAM的颈圈套于其颈部，并使监测器朝向动物身体外侧后放回饲养笼，观察被麻醉动物体征直至苏醒（须保证颈圈大小合适，佩戴后不宜再作调整，且在实验前至少佩戴颈圈不少于2周）（图2-3）。7.4.3对当天拆除身体活动监测器的实验动物于当天早上禁食直至结束；于动物微麻状态下解除颈圈后回至饲养笼，观察被麻醉动物体征直至苏醒；取出芯片，于读取器读取数据并用软件进行导出和分析。图2-5食蟹猴于饲养笼中佩戴PAM活动量监测器Fig2-5CynomolgusmonkeywearthePersonalActivityMonitorinrearingcage43 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文8非运动行为学评价：认知行为评价-DMTS认知评价8.1实验目的为评估PD组与Control组在非运动行为中认知能力的差异，采用基于WGTA的DMTS认知行为装置，通过食蟹猴选择正确率对抽象概念的认知行为学能力进行量化评价，从而来完成本实验研究。8.2实验操作适用范围灵康实验室（认知行为学实验室）。8.3所需物品DMTS行为装置，高清录像机及三脚架，DMTS行为测试表格延迟版，零食等8.4环境预适应所有动物均须进行2周运动行为实验及行为笼的环境预适应。一般通过提供多种零食（依动物喜好提供）及娱乐项目（包括：看动画片、听轻音乐）等措施，以消除动物紧张或焦躁的不安情绪，平均每周2至3次，每次半小时于固定时间段进行，以便加速动物对实验环境的适应。8.5行为操作训练在进行前期训练中，实验动物都需要进行2个月的推板训练，每周4次，每次约半小时，于固定时间段进行，直至熟悉行为操作及基本规则。8.6非运动行为学：DMTS认知评价8.6.1实验开始前准备工作，包括对DMTS行为装置的清洗与消毒（每只动物实验结束后需重新消毒），若干1cm3苹果块和花生，秒表，相关表格及签字笔等；检查个人自身防护装备：口罩、手套、头套、面罩、鞋套等；检查笼具的闸门安全性、有无可能伤害到动物的尖利物；由两名实验人员完成实验动物安全转运工作。8.6.2将当天测试的动物于前一天晚上进食后清空料槽，并于测试当天早上44 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文禁食直至当天实验测试结束；通过转运笼及转运车将动物从动物房饲养笼转移至运动行为学实验室的行为笼后，于测试开始前10分钟左右，对动物通过提供少量零食及播放轻音乐等措施消除动物不安情绪，并注意观察动物有无异常行为，如表现的紧张情绪、反常的运动方式、明显外伤等，并做好记录，并通知兽医进行检查。8.6.3测试人员将DMTS认知测试装置装于行为笼，用三脚架将高清录像机摆放置猴椅前方对准实验动物，并于录像打板上填写好动物编号、操作项目、日期和时间等基本信息，在测试前放于高清录像机前5秒并确保被拍摄下来。8.6.4将装置中间取食卡槽前透明小滑门关闭，并把不透明的黑色挡板放下挡住DMTS装置主板视线，使其处于关闭状态。8.6.5首先根据DMTS延迟表格的“Q”列，选择对应CUE推板作为目标推板，将其放置在中间的取食槽上（槽下不放零食），同时将下方的黑色挡板缓缓拉开，确保目标推板被动物看见，然后将黑色挡板再次放下关闭，并开始计时。8.6.6根据表格中的“Q-LOC”列位置所标示（L/R），将目标推板放在对应侧的取食装置上，并在目标推板下放置小块零食。8.6.7再根据表格中的“CAF”列，选择对应CUE推板作为干扰项，将其放在目标推板另一侧的取食卡槽，干扰推板下面不放任何食物。8.6.8再根据DMTS延迟表中的Delay时间计时，Delay时间结束后，立即缓慢将黑色挡板拉开（切勿速度过快，给动物思考的时间），待动物观察后并作出选择来完成推板取食后，重新将黑色挡板下放关闭。给予动物20秒时间休息后再进行下一次trail。8.6.9最后在DMTS延迟表中“RSP”列记录实验动物的表现，选择了目标推板则为正确，记录为“1”，选择干扰推板为错误，记录为“0”，如果60秒内实验动物没有做出任何的应答反应，则记录为“-2”。45 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文8.6.10按照DMTS延迟表的预设顺序，重复执行上述行为操作直至完成表格预设的trails次数，同时记录下动物实验过程中出现的意外情况。实验完毕后将动物转移回动物房饲养笼并给予零食奖励，并对行为装置进行清洗、消毒及认知行为实验室的清扫。9运动行为学评价：食蟹猴旋转转圈计数9.1实验目的为更全面观察动物的临床表现和运动行为特性，我们将对动物在DMTS行为测试的约30min内额外增加一名实验人员，并在不干扰DMTS行为测试的基础上进行动物旋转转圈计数9.2实验操作适用范围灵康实验室（认知行为实验室）。9.3所需物品计数器，签字笔，计数表格，布艺屏风。9.4具体操作9.4.1计数人员对动物有不少于2周的直接接触，以保证动物对他熟悉，减少动物在实验中因额外人员出现而影响行为测试实验的进行。9.4.2在进行DMTS行为测试前，计数人员事先进入认知行为实验室，并躲在屏风帘后，行为测试开始后，通过布艺屏风的观察窗进行全程计数。9.4.3计数完毕后配合行为测试人员执行清洗工作。10统计学方法应用统计学软件SPSS20.0进行数据分析，计量资料以均数±标准误表示，给药前后比较使用配对T检验，组间比较使用Student’sttest方法完成分析，以代表P＜0.05和代表P＜0.01为差异有统计学意义。46 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文三实验结果1MPTP造模7年后食蟹猴运动行为与非运动行为学变化结果1.1食蟹猴临床评分结果为观察7年后慢性偏侧帕金森模型食蟹猴的临床症状，我们通过临床评分录像，结合Kulran（1991）非人灵长类动物帕金森病模型临床评分量表对动物进行临床症状的量化评估，评分方式采取双盲制。结果显示：PD组的临床评分为（3.86±0.56），而Control组为0分（图3-1a）。图3-1a对照组与PD组食蟹猴临床评分的比较Fig3-1aComparisonofclinicalscoresbetweencynomolgusmonkeysincontrolandPDgroups我们通过临床评分录像，对临床评分量表中的10个评分项目分别进行评分，单个评分项目为：面部表情（Facialexpression）（0-3分）；静止性震颤（Tremor）（0-3分）；动作性或意向性震颤（Actionorintentionaltremor）（0-3分）；姿势（Posture）（0-2分）；步态（Gait）（0-3分）；运动徐缓（Bradykinesia）（0-4分）；平衡与协调（Balance）（0-3分）；总体运动技能（上肢）（Rightupperlimbmotorskills）（0-3分）；总体运动技能（下肢）（Rightlowerlimbmotorskills）（0-3分）；防御反应（Defensereaction）（0-2分）。其中，最小分值为0分，总分最小为0分即正常行为，总分最高为29分，即最为严重。临床评分结果（图3-1b）显示，单项评分最高的是右上肢运动技巧（1.21±0.44），其他各项评分均值都低于1分，面部表情（0.57±0.10）；静47 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文止性震颤（0.00）；动作性或意向性震颤（0.39±0.18）；姿势（0.21±0.09）；步态（0.25±0.12）；运动徐缓（0.36±0.17）；平衡与协调（0.32±0.09）；右上肢运动技能（1.2143±0.17）；右下肢运动技能（0.28±0.08）；防御反应（0.25±0.11）。图3-1bPD组食蟹猴10个评分项目的临床评分结果Fig3-1bClinicalscoreresultsof10scoringitemsinthePDgroupofcynomolgusmonkeys1.2运动行为学评价：PUT取食测试结果PD组左上肢（损毁侧）取食所需时间（23.14±3.56s）明显高于Control组左上肢的取食时间（12.52±1.21s），且具有显著性差异（P=0.003）；但是PD组右上肢（损毁对侧），始终无法使用右上肢进行精细运动的操作。Control组右上肢取食时间（13.11±1.45s）较PD组存在显著差异（P=0.005）（图3-2）。48 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-2对照组与PD组食蟹猴左右上肢PUT测试所需时间的比较Fig3-2ComparisonoftimerequiredforPick-UPTestinleftandrightupperlimbsofcynomolgusmonkeysincontrolandPDgroups1.3运动行为学评价：MAP取食测试结果MAP取食测试主要观察取食过程中得三个指标：执行伸肌运动时间(ExtensorExercisePerformanceTime，EEPT)、执行手部精细运动时间(FineMotorPerformanceTime，FMPT)和执行屈肌运动时间(FlexorExercisePerformanceTime，FEPT)。在PD组左上肢MAP取食测试中，EEPT（0.20±0.04s）大于Control所需时间（0.13±0.01s），FMPT（0.42±0.14s）高于Control组（0.35±0.02s），PD组的FEPT（0.37±0.03s）也高于Control组所需时间（0.28±0.01s），但是相比Control组结果没有统计学意义（图3-3a）。PD组右上肢无法进行MAP取食测试，而Control组右上肢执行伸肌运动时间(EEPT)（0.14±0.01s），执行手部精细运动时间(FMPT)（0.38±0.02s），执行屈肌运动时间(FEPT)（0.25±0.01s）（图3-3b）。49 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-3a对照组与PD组食蟹猴左上肢MAP测试中图3-3b对照组与PD组食蟹猴右上肢MAP测试中EEPT、FMPT、FEPT的比较EEPT、FMPT、FEPT的比较Fig3-3aComparisonofEEPT,FMPTandFEPTinFig3-3bComparisonofEEPT,FMPTandFEPTinMAPTestofLeftUpperLimbofCynomolgusMAPTestofRightUpperLimbofCynomolgusMonkeybetweenControlandPDGroupsupperMonkeybetweenControlandPDGroupsupperlimbsofcynomolgusmonkeysincontrolandPDlimbsofcynomolgusmonkeysincontrolandPDgroupsgroups1.4运动行为学评价-粗大运动：全身运动活动总量分析PAM监测结果通过PAM监测，我们收集了的运动总量的数据结果（图3-4c），PD组全天24h全身运动活动总量（32544.76±8850.41）低于Control组（59461.55±14792.46）（图3-4a），PD组白天12h(Day-12h)全身运动活动总量（29126.72±8750.14）低于Control组白天12h(Day-12h)（53858.72±13799.63）（图3-4b），但都不具统计学意义。50 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-4a对照组与PD组食蟹猴全天24h全身图3-4b对照组与PD组食蟹猴白天12h全身运动活动总量的比较运动活动总量的比较Fig3-4aComparisonofPhysicalActivityof24Fig3-4bComparisonofPhysicalActivityof12hHoursofCynomolgusMonkeysinControlduringthedayofCynomolgusMonkeysinandPDGroupsControlandPDGroups图3-4c对照组与PD组食蟹猴全天24h基于PAM监测的全身运动活动总量的结果Fig3-4cPhysicalActivityMonitoredbyPAMat24hAllDayinControlandPDGroupsofCynomolgusMonkeys1.5基于临床评分录像的行为影像运动轨迹跟踪分析结果我们通过对临床评分录像中20min的软件分析，分析了动物移动距离（Distance）及对应的活动量（Activity），结果显示：PD组移动的距离（14864.41±2905.23cm）高于Control组（6602.89±2280.90cm），但是没有显著性（图3-5a）。PD组20min内进行的活动量（20528.50±2340.67）高于Control组（14988.38±3117.79），但是也没有显著性差异（图3-5b）。51 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-5a对照组与PD组食蟹猴基于20min图3-5b对照组与PD组食蟹猴基于20min录像中的移动距离的比较录像中的活动量的比较Fig3-5aComparisonofthemovingdistancesFig3-5bComparisonoftheActivityamountininthecontrolgroupandPDgroupofthecontrolgroupandPDgroupofcynomolgusmonkeysbasedon20minvideocynomolgusmonkeysbasedon20minvideo1.6运动行为学评价：食蟹猴旋转转圈计数结果我们通过动物在平均30min内发生旋转转圈进行计数，结果发现：PD组在笼中旋转次数为（30.50±7.33），但是Control组中并未观察到任何旋转的现象（图3-6）。图3-6对照组与PD组食蟹猴30min内旋转圈数的比较Fig3-6ComparisonofRotationalCirculationNumbersofCynomolgusMonkeysinControlandPDGroupswithin30min1.7非运动行为学评价-睡眠情况：全身运动活动总量分析PAM监测结果我们通过PAM对动物进行全天候数据监测，通过分析夜间12h的全身运动活动总量对动物的夜间睡眠质量进行间接的量化评价。结果显示：PD组夜间12h全身运动活动总量（3418.04±978.72）低于Control组52 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文（5602.83±2610.01），但不具统计学意义（图3-7）。图3-7对照组与PD组食蟹猴夜间12h全身运动活动总量的比较Fig3-7ComparisonofPhysicalActivityof12hduringthenightofCynomolgusMonkeysinControlandPDGroups1.8非运动行为学：DMTS认知评价PD组5s延迟正确率（61.60±4.12%）明显低于Control组5s延迟正确率（96.80±1.50%），并具有统计学意义（P=0.000）；PD组10s延迟正确率（51.20±5.28%）明显低于Control组10s延迟正确率（84.80±3.88%），并具有统计学意义（P=0.000）；PD组15s延迟正确率（49.60±3.71%）明显低于Control组15s延迟正确率（80.80±3.44%），并具有统计学意义（P=0.000）；PD组30s延迟正确率（60.80±1.96%）明显低于Control组30s延迟正确率（74.40±2.04%），并具有统计学意义（P=0.009）（图3-8）。53 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-8DMTS认知行为学评价测试中对照组与PD组在5s、10s、15s、30s延迟下正确率的比较Fig3-8Comparisonofthecorrectrateof5s,10s,15s,and30sdelaybetweencontrolgroupandPDgroupinDMTScognitivebehavioralassessmenttest2多巴丝肼片（左旋多巴）药物干预对实验动物的运动行为和非运动行为的影响2.1食蟹猴临床评分结果两组动物经L-Dopa给药后，PD组给药后临床评分（2.43±0.23）较给药前基线（3.86±0.56）明显减少，并存在显著差异（P=0.022）（图3-9a）。图3-9a对照组与PD组在左旋多巴给药前后的临床评分的比较Fig3-9aComparisonofclinicalscoresbeforeandafteradministrationoflevodopabetweencontrolandPDgroups54 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文其中，单项评分中给药后右上肢运动技巧评分（0.68±0.24）较给药前基线（1.21±0.44）明显降低，并具有统计学意义（P=0.011）；其他单项评分给药后较给药前有下降趋势但是不明显（图3-9b）。图3-9bPD组食蟹猴在左旋多巴给药前后的10个评分项目的临床评分均值变化Fig3-9bChangesinmeanscoreofclinicalscoresin10scoringitemsofPDmonkeysbeforeandafterlevodopaadministrationincynomolgusmonkeys2.2运动行为学评价：PUT取食测试结果给药后PD组左上肢所需时间（15.40±1.85s）远低于PD组基线（23.14±3.56s），且具有统计学意义（P=0.020）；给药后Control组左上肢所需时间（13.49±1.16s）与基线（12.52±1.21s）相比略有升高，不具统计学意义（P=0.286）（图3-10a）。而相对于右上肢而言，无论PD组给药前还是给药后都始终无法使用右上肢进行精细运动的操作。给药后的时间（14.88±0.89s）较给药前右上肢所需时间（13.11±1.45s）略有上升，但不具统计学意义（P=0.180）（图3-10b）。55 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-10a对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药图3-10b对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后左上肢PUT测试所需时间的比较前后右上肢PUT测试所需时间的比较Fig3-10aComparisonoftimerequiredforPUTFig3-10bComparisonoftimerequiredforPUTtestintheupperleftlimbbeforeandaftertestintheupperrightlimbbeforeandafteradministrationoflevodopaincontrolandPDadministrationoflevodopaincontrolandPDgroupsofcynomolgusmonkeysgroupsofcynomolgusmonkeys2.3运动行为学评价：MAP取食测试结果对动物左上肢进行MAP取食测试结果：EEPT结果显示，PD组给药后（0.20±0.02s）较基线（0.20±0.04s）有所降低，给药后Control组（0.13±0.02s）较基线有所下降，但是都没有显著差异；FMPT结果中，PD组给药后（0.28±0.04s）较基线（0.42±0.14s）有明显降低，并存在显著差异（P=0.049）；给药后Control组（0.30±0.03s）较基线有所下降，给药后的PD组与给药后的Control组差异不明显，没有显著差异；FEPT的数据显示，PD组给药后（0.29±0.05s）较基线有所降低，给药后Control组（0.18±0.01s）较基线有所下降，但是都没有显著差异；给药后的PD组与Control组不存在统计学意义（图3-11a）。56 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-11a对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后左上肢MAP测试中EEPT、FMPT、FEPT的比较Fig3-11aComparisonofEEPT,FMPTandFEPTinMAPTestofLeftUpperLimbbeforeandafterAdministeringLevodopainControlandPDGroupsofCynomolgusMonkeys对动物右上肢进行MAP取食测试结果：无论L-dopa给药前后，PD组始终无法进行右上肢的精细运动操作。Control组给药后EEPT（0.12±0.01s）较基线（0.14±0.01s）有所降低，但是无统计学意义；Control组给药后FMPT（0.38±0.06s）较基线Control（0.38±0.02s）差异不明显；Control组给药后FEPT（0.18±0.02s）较基线（0.25±0.01s）有所降低，但是无统计学意义（图3-11b）。图3-11b对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后右上肢MAP测试中EEPT、FMPT、FEPT的比较Fig3-11bComparisonofEEPT,FMPTandFEPTinMAPtestofrightupperlimbbeforeandafter2.4运动行为学评价-粗大运动：全身运动活动总量分析PAM监测结果AdministeringLevodopainControlandPDGroupsofCynomolgusMonkeys57 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文给药后PD组24h全身运动活动总量（48107.67±7156.50）高于基线（32544.76±8850.41），且有显著差异（P=0.010）；L-dopa给药后Control组全身运动活动总量（76293.60±21878.69）较基线（59461.55±14792.46）有所升高，但是没有统计学意义（P=0.095）（图3-12a）。图3-12a对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前图3-12b对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后后全天24h全身运动活动总量的比较白天12h全身运动活动总量的比较Fig3-12aComparisonofphysicalactivityintheFig3-12bComparisonofphysicalactivitybetweenthecontrolgroupandPDgroupcynomolgusmonkeys24controlgroupandPDgroupofcynomolgusmonkeyshoursbeforeandaftertheadministrationoflevodopaduringday-12hbeforeandafterlevodopaadministration图3-12c对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药后基于PAM监测的全天24h身体活动量的结果Fig3-12cTheresultsof24-hourphysicalactivitymonitoredbyPAMafterlevodopaadministrationincontrolandPDgroupsofcynomolgusmonkeys给药后PD组白天12h(Day-12h)全身运动活动总量（41035.60±6445.49）高于基线（29126.72±8750.14），且有显著差异（P=0.020）；L-dopa给药后Control组全身运动活动总量（56326.40±14894.42）较基线（53858.72±13799.63）有所升高，但是没有统计学意义（P=0.798）（图3-12b）。58 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文2.4基于临床评分录像的行为影像运动轨迹跟踪分析结果给药后PD组20min内移动的距离（16619.76±5279.65cm）高于PD组基线（14864.41±2905.23cm），但不具统计学意义（P=0.94）；给药后Control组20min内移动的距离（10560.95±3653.48cm）高于Control组基线（6602.89±2280.90cm），但不具统计学意义（P=0.383）（图3-13a）；图3-13a对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给图3-13b对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后的基于20min录像中的移动距离的比较药前后的基于20min录像中的活动量的比较Fig3-13aComparingthemovingdistancesFig3-13bComparingtheActivitybetweenthebetweenthecontrolgroupandthePDgroupofcontrolgroupandthePDgroupofcynomolguscynomolgusmonkeysbeforeandaftermonkeysbeforeandafteradministrationofadministrationoflevodopabasedonthelevodopabasedonthe20-minutevideo20-minutevideo给药后PD组20min的活动量（Activity）（26027.78±3358.10）较给药前基线（20528.50±2340.67）有所升高，但是没有显著性差异（P=0.092），给药后Control组（16956.79±3117.79）高于基线，但是没有统计学意义（P=0.726）（图3-13b）。2.5运动行为学评价：食蟹猴旋转转圈计数结果给药后PD组转圈次数（19.25±7.77）远少于给药前基线（30.50±7.33），且存在显著差异（P=0.001）（图3-14）。59 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-14对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后的30min内旋转圈数的比较Fig3-14ComparisonofthenumberofrotationsofthecynomolgusmonkeysinthecontrolandPDgroupswithin30minutesbeforeandafterlevodopaadministration2.6非运动行为学评价-睡眠情况身运动活动总量分析PAM监测结果给药后PD组夜间（12h）全身运动活动总量（7072.07±2318.70）较基线（3418.05±978.72）有所升高，但是没有显著性（P=0.058）；给药后Control组（20868.43±17281.99）较基线（5602.83±2610.01）也有所上升，但是没有统计学意义（P=0.360）（图3-15）。图3-15对照组与PD组食蟹猴在左旋多巴给药前后夜间12h身体活动量的比较Fig3-15ComparisonofphysicalactivityinthecontrolgroupandPDgroupofcynomolgusmonkeysforNight-12hbeforeandafteradministrationoflevodopa2.7非运动行为学：DMTS认知评价在5s延迟，给药后PD组正确率（51.20±4.08%）低于给药前（61.60±4.12%），但不存在显著性（P=0.098），给药后Control组（88.00±3.35%）较给药前（96.80±1.50%）差异不明显（P=0.086）；在10s60 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文延迟下，给药后PD组正确率（45.60±3.49%）低于给药前（51.20±5.28%），但不存在显著性（P=0.263），给药后Control组（78.40±5.15%）较给药前（84.80±3.88%）差异不明显（P=0.178）；延迟15s时，给药后PD组正确率（40.80±3.67%）低于给药前（49.60±3.71%），但不存在显著性（P=0.240），给药后Control组（79.20±3.44%）较给药前（80.80±3.44%）差异不明显（P=0.688）；30s延迟时，给药后PD组正确率（56.80±1.50%）低于给药前（60.80±1.96%），但不存在显著性（P=0.089）。给药后Control组（83.20±4.08%）较给药前（74.40±2.04%）略有升高，但是不明显（P=0.086）（图3-16）。图3-16DMTS认知行为学评价测试中对照组与PD组在左旋多巴给药前后于5s、10s、15s、30s延迟下正确率的比较Fig3-16Comparisonofthecorrectrateof5s,10s,15s,and30sbeforeandafteradministrationoflevodopaintheDMTScognitivebehaviorassessmenttest61 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文3安理申（盐酸多奈哌齐）药物干预对运动行为和非运动行为的影响3.1食蟹猴临床评分结果多奈哌齐给药后PD组临床评分（3.54±0.32）较基线没有显著差异(P=0.677)（图3-17a），各单项评分给药前后差异不明显，且没有统计学意义（图3-17b）。图3-17a对照组与PD组在多奈哌齐给药前后临床评分的比较Fig3-17aComparisonofclinicalscoresbetweencontrolgroupandPDgroupbeforeandafteradministrationofdonepezil图3-17b对照组与PD组在多奈哌齐给药前后10个评分项目的临床评分的比较Fig3-17bComparisonofclinicalscoresof10scoringitemsbeforeandafteradministrationofdonepezilbetweencontrolgroupandPDgroup62 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文3.2运动行为学评价：PUT取食测试结果多奈哌齐给药后PD组左上肢所需时间（16.53±1.63s）低于PD组基线，但没有显著性（P=0.125）；Donepezil给药后Control组左上肢所需时间（11.03±0.79s）与基线相比有所下降，但不具统计学意义（P=0.088）（图3-18a）。图3-18a对照组与PD组在多奈哌齐给药前后图3-18b对照组与PD组在多奈哌齐给药前后左上肢PUT测试中所需时间的比较右上肢PUT测试中所需时间的比较Fig3-18aComparisonoftimerequiredforPUTFig3-18bComparisonoftimerequiredforPUTtestinleftupperlimbbeforeandaftertestinrightupperlimbbeforeandafteradministrationofdonepezilbetweencontroladministrationofdonepezilbetweencontrolgroupandPDgroupgroupandPDgroup多奈哌齐给药后PD组依旧无法使用右上肢进行操作，给药后Control组左上肢所需时间（10.92±0.68s）与基线相比有所上升，但不具统计学意义（P=0.091）（图3-18b）。3.3运动行为学评价：MAP取食测试结果基于动物左上肢测试结果来看：PD组给药后EEPT（0.20±0.03s）较基线有所升高，给药后Control组（0.12±0.01s）较基线有所下降，但是都没有显著差异；PD组给药后FMPT（0.43±0.09s）较基线有所增高，但没有显著差异，给药后Control组（0.28±0.04s）较基线有所下降，但是没有显著差异；PD组给药后FEPT（0.30±0.08s）较基线有所降低，不存在统计学意义，给药后Control组（0.22±0.01s）较基线有所下降，不存在显著差异63 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文（P>0.05）（图3-19a）。图3-19a对照组与PD组在多奈哌齐给药前后左上肢MAP测试中EEPT、FMPT、FEPT的比较Fig3-19aComparisonofEEPT,FMPTandFEPTinMAPTestofLeftUpperLimbbeforeandafterdonepeziladministrationbetweenControlandPDgroups基于动物右上肢测试结果来看：多奈哌齐给药后PD组动物仍然无法使用右上肢进行本实验行为操作，给药后Control组EEPT（0.12±0.01s）较基线有所下降，但是都没有显著差异（P=0.069）；给药后Control组FMPT（0.30±0.02s）较基线有所下降，但是没有显著差异（P=0.084）；给药后Control组FEPT（0.24±0.01s）较基线有明显下降，且存在显著差异（P=0.584）（图3-19b）。64 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-19b对照组与PD组在多奈哌齐给药前后右上肢MAP测试中EEPT、FMPT、FEPT的比较Fig3-19bComparisonofEEPT,FMPTandFEPTinMAPTestofRightUpperLimbbeforeandafterdonepeziladministrationbetweenControlandPDgroups3.4运动行为学评价-粗大运动：全身运动活动总量分析PAM监测结果多奈哌齐给药后，PD组的24h全身运动活动总量（40693.75±11767.93）与Control组的24h全身运动活动总量（61784.67±26815.63）都较各基线有所增加，但是没有显著差异（P=0.699，P=0.409）（图3-20a）。多奈哌齐给药后，PD组的白天12h（Day12h）全身运动活动总量（39677.42±13748.94）与Control组的白天12h（Day12h）全身运动活动总量（58314.58±27588.99）都较各基线有所增加，但是没有显著差异（P=0.124，P=0.424）（图3-20b）。65 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-20a对照组与PD组在多奈哌齐给药图3-20b对照组与PD组在多奈哌齐给药前后全天24h全身运动活动总量的比较前后白天12h全身运动活动总量的比较Fig3-20aComparisonofphysicalactivity24Fig3-20bComparisonofphysicalactivityhoursbeforeandafteradministrationofday-12hbeforeandafteradministrationofdonepezilbetweencontrolandPDgroupsdonepezilbetweencontrolandPDgroups图3-20b对照组与PD组在多奈哌齐给药后基于PAM监测的全天24h全身运动活动总量的结果Fig3-20bTotal24-hourphysicalactivitymonitoredbyPAMafteradministrationofdonepezilinthecontrolandPDgroups3.5运动行为学评价：食蟹猴旋转转圈计数结果多奈哌齐给药后PD组旋转次数（9.50±3.91）较给药前（P=30.50±7.33）明显减少，并存在显著差异(P=0.042)（图3-21）。66 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文图3-21对照组与PD组在多奈哌齐给药前后30min内旋转圈数的比较Fig3-21Comparisonofthenumberofrotationswithin30minutesbeforeandafteradministrationofdonepezilinthecontrolandPDgroups3.6非运动行为学评价-睡眠情况：全身运动活动总量分析PAM监测结果多奈哌齐给药后，PD组的黑夜12h全身运动活动总量（4349.67±2019.52）与较基线有所增加，但是没有显著差异（P=0.415）；Control组的黑夜12h（Night12h）全身运动活动总量（3470.09±799.50）较基线降低，但是没有统计学意义（P=0.254）（图3-22）。图3-22对照组与PD组在多奈哌齐给药前后夜间12h全身运动活动总量的比较Fig3-22ComparisonofPhysicalActivitywithinnight-12hbeforeandafteradministrationofdonepezilbetweencontrolandPDgroups3.7认知行为DMTS评价结果在5s延迟中，给药后PD组正确率（67.20±4.27%）高于给药前，但没有显著性(P=0.160)，给药后Control组（82.40±4.49%）较基线下降，但没有显著差异(P=0.066)；10s延迟下，给药后，PD组正确率（55.20±3.88%）67 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文高于给药前，但没有显著性（P=0.142），Control组（70.40±8.82%）较给药前有所降低，但不具统计学意义（P=0.133）；针对15s延迟，给药后，PD组正确率（45.60±3.71%）低于给药前且差异不明显（P=0.298），给药后Control组（76.00±4.00%）较给药前有所降低，但是不明显；延迟30s时，给药后PD组正确率（56.00±3.01%）低于给药前基线，但是没有统计学意义（P=0.388），给药后Control组（73.60±5.60%）较给药前有所降低，没有显著性（P=0.854）（图3-23）。图3-23在DMTS认知行为评价测试中对照组与PD组在多奈哌齐给药前后的5s、10s、15s、30s延迟下的正确率的比较Fig3-23Comparisonofthecorrectrateof5s,10s,15s,30sbeforeandafteradministrationofdonepezilbetweenthecontrolgroupandthePDgroupintheDMTScognitivebehavioralassessmenttest68 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文四讨论非人灵长类动物在生物进化上与人类关系非常接近，它们与人类在生理基础、行为和生物遗传等方面有很多共性，被广泛的用作人类疾病、行为和认知记忆的模型[31]。神经毒性物质MPTP能够损伤大脑黑质部DA神经元从而模拟帕金森病症状[32]，同啮齿类动物相比，非人灵长类动物在病理上与PD病人更为类似，MPTP诱导的猕猴模型是研究PD的最佳动物模型[34]。我们发现偏侧PD模型食蟹猴7年后，在运动行为学方面，临床症状仍然未完全恢复，以右侧上肢（损毁对侧）运动最为显著，甚至无法进行任何精细运动的操作。左侧上肢运动能力较正常也存在一定的障碍，躯体活动量基本正常，但存在明显的自发旋转现象。非运动行为学显示认知能力存在明显障碍。造模7年后PD猴临床症状有所缓解，可能是动物体内自身补偿机制[32]的结果，但是并未完全恢复，上肢精细运动仍然存在障碍，表明动物上肢手臂存在肌强直，右侧上肢无法进行精细运动，有研究已经证实强直等运动症状与纹状体多巴胺能递质减少程度是呈正相关[36]的，但究其缘由，本实验PD动物存在的致病机制除注射的MPTP经脑部血管环路传播至右侧、损伤右侧脑纹状体致多巴胺能神经元数量减少之外，还可能存在脑内病理学的改变[37]。PD动物的旋转圈数通常也体现了黒质DA能神经元的损害程度[38]。近年研究发现PD除了上述的运动症状外，还存在非运动症状，其主要包括了认知行为受损等[39]，PD患者存在的认知功能障碍，则主要表现在注意力集中、工作记忆、执行能力、视-空间学习能力等不同程度的损害[40]。Braak等[37]研究认为嗅球和嗅前核以及边缘系统和新皮层等部位路易小体的出现以及相关的病理改变，可能与非运动症状相关联。其实在PD早期阶段就已经存在轻度认知障碍，这是是帕金森病患者痴呆的过渡阶段，随着病情的发展最终可能造成帕金森病痴呆（PDD）[41]，而无论帕金森病患者是否发展为痴呆，均会出现一定程度的认知功能障碍，病情69 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文发展到晚期则进一步出现视-空间学习障碍。造模7年后的PD猴可能就是经历了一个长达七年的病程发展，认知功能存在明显的障碍，认知能力可能随着PD病程的延长出现逐步的恶化，而且这与年龄并不一定相关[42]，有研究认为随着PD患者病程延长，认知能力的损害严重[43]。基于上述研究，我们认为造模7年后PD模型基本处于一个仍然存在运动障碍与认知障碍的慢性PD状态。在本实验中，多巴丝肼（主要成分为左旋多巴）对食蟹猴进行药物干预后临床症状明显改善，上肢精细运动及动物的活动量也出现明显改善，旋转现象出现明显减少。多巴丝肼为治疗该疾病的常用药，由苄丝肼和左旋多巴复合制成，其中左旋多巴为DA前体，能通过血脑屏障来补充患者脑内DA不足的情况，但左旋多巴容易在脑外和相关组织中发生脱羧反应形成DA，造成多数左旋多巴无法到达基底神经节，引发不良反应，而苄丝肼则可以抑制左旋多巴在脑外组织中脱羧的作用。左旋多巴给药后PD猴的临床症状和精细运动能力均出现明显改善，表明黑质-纹状体通路对左旋多巴进行了摄取、吸收、合成、释放、激动受体、重摄取等过程并且产生了显著的生物学效应，即多巴胺能反应性（DopaResponsiveness）[3]，这个结果也验证了造模7年后慢性PD模型是仍然存在的。PD动物的旋转与黒质DA能神经元的损害程度是息息相关的，而基于此现象，左旋多巴可以进行一种类似抗PD的作用[38]。有研究认为额叶在前瞻性记忆中起着重要作用，而左旋多巴可以改善PD患者前额叶皮质的功能，并可能通过平衡纹状体与额叶多巴胺的传导来恢复PD患者的工作记忆[44]，但是在本实验中，PD猴认知能力并没有任何改善的迹象，可能是PD患者的纹状体DA耗竭导致额叶功能障碍[45]，并且，年龄相关因素可能也是MPTP诱导PD行为恢复的缘由，这在灵长类动物实验中得到了一定的证实[46]。同时有研究者认为帕金森病可能还累及到胆碱能系统、5-HT能系统以及脑啡肽等神经递质系统，上述神经系统的受损与非运动症状密切相关。基于上述研究结果，也验证70 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文了造模7年后PD动物仍然处于PD疾病状态。多奈哌齐是一种非竞争性的可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂，是阿尔茨海默病的长效治疗药[47]，其作用机制是通过增加神经细胞突触间隙的乙酰胆碱(Ach)含量，补偿丢失的胆碱能信号[48]。多奈哌齐能改善患者的认知功能，也能保护海马神经元[49]，也可能通过影响钙通道的作用而发挥效果[50]，因此缓解胆碱能缺失导致的学习功能缺陷[51]。一般认为PD患者黑质DA能神经元减少，导致纹状体内DA水平下降，DA环路出现异常[52]，同时与胆碱能通路异常是密切相关的。应用恒河猴研究多奈哌齐的认知行为评价的实验中，一般认为多奈哌齐作用于胆碱能神经元，一定程度上是可以提高认知能力的[53]。在本实验中，多奈哌齐给药后并没有发现PD组的认知行为出现明显改善，有人认为PD患者存在的认知障碍不仅仅与额叶-纹状体的功能改变及黑质纹状体、中脑皮层DA神经元损伤有关，同时可能与去甲肾上腺素能及胆碱能神经元的丢失也息息相关[30]，而海马出现萎缩也可能是PD患者存在认知障碍的重要因素[54]。但近年来随着研究的深入，认知障碍的病情的严重程度不单单局限于胆碱能通路的损伤，与胆碱能相关神经出现减少，以及谷氨酸能神经出现减弱等也存在莫大的相关性[55]。多奈哌齐的干预显著改善了慢性PD模型食蟹猴的自发旋转行为，提示PD模型自发旋转机理不单局限于双侧脑内纹状体DA含量的不对称性，其机制有待我们进一步研究。在基于帕金森病灵长类动物模型的研究中，绝大部分都是基于短期研究，鲜见有长达7年的长期研究，系统性的行为评价更是少有。本实验研究造模7年后PD猴的慢性帕金森病程发展，通过运动行为与非运动行为评估手段，实现经济、无创且可持续性的临床前研究。总之，本研究对MPTP71 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文造模7年后慢性PD模型猴运动与非运动行为学的评价与功能探讨，将为灵长类动物实验提供有效载体，同时也为神经细胞修复、神经保护药物以及PD新药研发提供新思路并具有重要参考价值。72 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文参考文献[1]刘疏影,陈彪.帕金森病流行现状[J].中国现代神经疾病杂志,2016,16(2):98-101.[2]SHERERTB,BETARBETR,GREENAMYREJT.PathogenesisofParkinson'sdisease[J].CurrentOpinioninInvestigationalDrugs,2001,2(5):657-62.[3]ALBANESEA,BONUCCELLIU,BREFELC,etal.ConsensusstatementontheroleofacutedopaminergicchallengeinParkinson'sdisease[J].MovementDisorders,2001,16(2):197–201.[4]KALIALV,LANGAE.Parkinson'sdisease[J].Lancet,2015,386(9996):896-912.[5]POEWEW,SEPPIK,TANNERCM,etal.Parkinsondisease[J].AnnalsofOperationsResearch,2017,3(1):17013.[6]PARASHOSSA,LUOS,BIGLANKM,etal.MeasuringdiseaseprogressioninearlyParkinsondisease:theNationalInstitutesofHealthExploratoryTrialsinParkinsonDisease(NET-PD)experience[J].JamaNeurology,2014,71(6):710.[7]鲍晓东.中西医结合治疗晚期帕金森病的临床探讨[J].江西中医药大学学报,2008,20(2):49-51.[8]OLANOWCW,OBESOJA,STOCCHIF.Continuousdopamine-receptortreatmentofParkinson'sdisease:scientificrationaleandclinicalimplications[J].LancetNeurology,2006,5(8):677-87.[9]秦皎娇,张琦,丁斐.帕金森病的治疗进展[J].南通大学学报(医学版),2015,(3):211-6.[10]龙勇诚,程斌,谢建国,etal.灵长类人类失联太久的表亲[J].森林与73 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左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文障碍的实验性治疗等。这就是为什么对非人灵长类动物进行神经相关疾病研究中能具有独特的优势，不仅在于是研究人类脑高级功能的关键动物，还在于它们是极佳的研究神经疾病机制和治疗手段的实验动物[2]。灵长类动物具有发达的中枢神经系统，有复杂的认知能力和社交行为、精细运动的掌控能力，可以进行类似人类的记忆相关的实验任务，这对于客观评价情感状态和认知行为学、记忆评价和精细运动检测等神经疾病相关的典型行为指标尤为重要[3]。由于人类无法与非人灵长类动物进行语言或者肢体动作上的沟通，只有通过它们的客观行为表现或者引导式动作进行深层次的信息挖掘，而在脑病方面最为显著和直观的就是疾病所酿造的临床行为表现[4]。本文对基于非人灵长类动物脑病模型的行为学分析方法的研究进行综述。一基于运动相关的行为学分析方法的研究1.拾物运动实验（Pick-UpTest，PUT）Jeffrey.H在1995年对MPTP诱导的帕金森病食蟹猴模型动物进行进行左右上肢的精细运动（FineMotor）能力测试，首次用到了拾物运动测试（PUT）[5]。PUT主要用于评价精细运动的协调性（FineMotorCoordination），常用于偏侧帕金森猴模型，可以简便快速而定量的评价动物的上肢手部的精细运动能力。测试方法为在九个透明有机玻璃面板孔（孔径大小约两个手指头的宽度，深度适中）中随机在6个孔内放入花生等食物，记录动物6个孔中食物全部取走的时间以及动作的准确性与连贯性。2.猴精细运动自动评估测试（Monkey-AutomatedMAPTesting）1999年Gash等[6]在基于检测人的手部运动能力的装置（humanMovementAssessmentPanel,hMAP）制作了针对研究猴的上肢运动装置（monkeyMovementAssessmentPanel,mMAP）评估动物的手部进行精细运动，检测该运动所需时间。MAP装置通过光电二极管记录动物左右上肢的伸肌运动时间(ExtensorMovementTime，EMT)、手指精细运动执行时间(Fine81 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文FingerPerformanceTime，FMPT)和屈肌运动时间(FlexorMovementTime,FMT)[2]，从而将完整精细运动过程进行量化评价。同时为了放大作用的效应，增加不同难度的取食台面，包括有食物直接放置在平整的台面，食物套在竖杆上，以及套在弯曲的杆上，通过这种方式增加取食难度，放大不同个体间精细运动的差距[7]。3.视-空定位任务测试（Visuospatialorientationtask）Bachevalier等在1989研究广泛性脑损伤的恒河猴动物模型时，对动物进行了视-空定位任务测试[8]。在测试中，动物通过移动套在不同迂回线路的金属棒上的环形糖果（"Lifesaver"）来获得糖果奖励[9]。实验主要分成三步进行：1.用单线线路进行前期训练（Pretraining）：2.简单线路（EasyRoutes）的取食测试；3.困难线路（DifficultRoutes）的取食评价，实验人员分别计算动物将糖果移出金属杆的时间。4.视-触引导测试（Visuallyguidedreaching）Bachevalier等[8]在对脑损伤的恒河猴的视觉引导行为的测试中，采用了两种方法：第一种方法是瓶盖实验（CapsTest）；第二种是花环测试（Rosettetest）。瓶盖实验（CapsTest）：在一个面板（长61.8cm，宽20.1cm）上共设置203个瓶盖，将食物随机放入其中，形成一种伪随机的实验方式，动物需要在203个瓶盖中进行视觉搜寻和检索食物的存在，每只动物每次只有60s的检索时间，记录动物检索成功的食物数量以及没有找出来的食物数量。而此前，Nakamura在1986年将此方法用于非视觉皮质损伤的恒河猴的研究[10]。1975年Haaxma在研究恒河猴脑功能的实验中，通过花环测试（Rosettetest）评价视觉引导手部动作和手指运动能力（VISUALGUIDANCEOFHANDANDFINGERMOVEMENTS）[11]。花环测试是在面板中间有个黑色圆盘（直径50mm），其中心设置一个圆形食物井（直径16mm，深度6mm），82 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文食物井四周有八个径向的定向槽（宽7mm，长8mm，深度6mm）,其尺寸大小刚好可以容下猴子的单个手指。在食物井中放入半边花生，动物只有通过拇指与另外一个手指的配合才可以通过凹槽获取食物井的花生并记录动物的准确性和取食的时间[8]。二基于认知能力的行为学分析方法的研究对于记忆的探讨很多关注在于不同的内侧颞叶结构的研究，有研究认为视觉认知记忆的关键在于内侧颞叶[12]，尤其在嗅周和内嗅皮层[13]，但是这有争议的，毕竟海马损伤对记忆功能的影响是显著的[14,15]，基于此研究背景所进行的灵长类认知行为测试有着重要的意义。1.分辨实验Battig等在1960年对前额叶和尾状核损伤的猴进行了相关的分辨测试[16]。GERALD等在2001年也对灵长类动物颜色辨别进行了研究[17]。分辨实验主要有视觉分辨任务：物体分辨、亮暗分辨、颜色分辨以及图形分辨等。颜色分辨就是对动物进行针对不同颜色的二选一随机实验[2]，选择出正确的颜色可以获得相应的奖励。陈郁初等[18]在1983年对健康恒河猴进行相关研究，实验通过将动物置于WGTA和猴椅上进行颜色辨别实验，发现在稍自由状态下（WGTA）进行的的分辨实验比在限制环境中接受的更快，而对红、蓝、绿、灰颜色[19]的学习差异并不明显。亮暗分辨与物体分辨，图形分辨实验原理同颜色分辨实验原理都是相同的，有研究者[18]发现物体分辨和亮暗分辨实验较颜色分辨对于恒河猴学习起来更加容易些，而图形的分辨更加困难，这可能和动物的生存环境中缺乏平面几何元素的存在相关。还有另外一种感官上的分辨实验，就是纯音听力测试(testsofpuretoneauditorydetection)。听觉分辨测试：用于猕猴的听觉检测的音频一般在125HZ至31500HZ之间，基于声音信号检测模块来测试非人灵长类动物的听力阈值和震动敏83 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文度，同时也观察动物身体的感觉阈[20]。研究者认为颜色、形状、图形等的简单辨别测试一般主要用于评价6月龄以下或者存在明显认知障碍的动物[21]。2.复杂的分辨空间分辨能力测试(spatialdiscriminationtest），对动物的认知能力有一定考验，动物需要对两个完全一样的物体进行空间位置摆放的区分，空间位置摆放正确才可以获得相应的奖励[22]。这种空间分辨能力的实验往往会通过改变目标物体的表观特征进行难度的升级，应对不同年龄的动物，也可以放大实验的效果。例如将上述的简单分辨测试与之结合，设置成具有不同颜色、形状、图案等的物体（如红底色的半球贴有猕猴桃图案VS黑白间隔条纹底色的正方体），这种实验往往需要灵长类动物进行特征筛选，认清相关的特征并忽略无关的干扰信息。3.反转交替学习测试(reversaloralternationlearningtests)一般来讲，反转交替实验往往可以用于检测辨别能力，并有举一反三之意。反转交替实验考验的是动物的空间反转能力(spatialreversal)，因为动物需要进行的不再是目标物体的位置调换并再选择，而是干扰物体的选择，这需要动物摒弃对目标物的应答反射，并将视线转移至干扰物体上来。这种测试也可以将颜色和形状等结合，实现多元素的目标与干扰替换实验[2].4.比对测试（MatchTests）主要包括三种：样本不匹配测试（Non-matching-to-Sample）,样本匹配测试（Matching-to-Sample）以及异物测试（OddityTest），考察动物的抽象观察能力[23]。SharonK.Presty等在1987年对19只恒河猴进行了样本不匹配测试[24]，实验中先让动物观察一个样本（sample），展示结束后出示两个样本，一个是观察过的，另一个是完全不同并且没有观察过的，而动物需要选择的是没有观察过的样本，这样动物才可以获得食物奖励。MarkG.Baxter等[12]在2001年对30只猴进行海马记忆功能研究中也进行了相关测试。样84 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文本匹配实验则和样本不匹配实验相反，需要动物选择的事先已经观察过的样本。HBejnö通过样本匹配实验研究自闭症儿童的语言应答等相关认知能力的改变[25]。异物实验对动物的考验比较大，主要操作为：设置三个样本，其中两个样本完全一样，另外一个完全不同，而动物则需要将这个不同的样本找出来。样本匹配实验与样本不匹配实验都是分两步进行，第一步是事先观察某样本，第二步是两个样本中选择相同的或者不同的样本。而异物测试则是直接让动物进行三选一的正确样本判断。5.记忆测试AlisonE等在2017年对脑功能异常的食蟹猴进行的认知记忆评价中用到了相关的记忆测试[26]。记忆测试常用于短时记忆的评价，一般是通过延迟应答(delayedresponse)扩展开来的[27]。延迟应答实验一般设置两个位置，实验人员将刺激物放于其中一个位置并让动物进行观察，间隔一段时间后，需要动物将刺激物放在之前观察到位置，这样才可以获得相应的奖励，实验人员通过计算正确的应答次数来评价动物的记忆能力[28]。在此基础上又延伸出来的延迟空间交替测试（delayedspatialalternationtest）和空间交替测试（Spatialalternationtest），两者区别在于有无时间的延迟。有时可以通过扩大记忆的容量，设置了样本不匹配列表长度测试（Non-Matching-to-Samplelistlengthtests）和样本匹配列表长度测试（Matching-to-Samplelistlengthtests）目前常用于评价阿尔兹海默症和帕金森病灵长类动物模型认知行为是延迟样本匹配任务（DelayMatching-to-Sample，DMTS）。其评价方式是基于威斯康辛通用测试装置（WGTA）[29][30]上所进行的工作记忆评价，日本科学家金光在1989年利用WGTA对灵长类中短期记忆能力测试中运用了DMTS[31]，目前也被国内外研究者广泛应用[32][33]。Corbitt通过将神经[34]影像和电生理与延迟样本匹配任务相结合，研究神经功能的变化[34]。Hutsell等则运用了与之相对的延迟样本不匹配任务（Delay85 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文Non-Matching-to-Sample，NDMS）对瑞芬太尼作用的雄性恒河猴的瘾性研究[35]。6.美国国立毒理学研究中心(nationalcenterfortoxicologicalresearch，NCTR)行为操作测试系统NCTR行为操作测试系统(NCTRoperanttestbattery)是用于评价非人灵长类动物和儿童的神经功能行为[36]。该测试系统主要由五部分组成：第一部分是用于评估动物整体学习和接受能力的增量重复收集任务(incrementalrepeatedacquisition，IRA)；第二部分是考察动物辨别颜色和位置能力大小的条件位置应答测试(conditionedpositionresponding，CPR)；第三部分是测试动物反馈的积极性和瘾性的累进比率实验(progressiveratio，PR)；第四部分是评价动物认知能力和注意力的延迟样本匹配任务（DelayMatching-to-Sample，DMTS）；第五部分是强调动物对时间感知能力的时间响应分辨任务(temporalresponsediferentiation，TRD)[2]。7.临床评分量表在神经疾病灵长类动物模型中最常见的临床评分量表就是针对帕金森病模型的，国内外很多研究者对MPTP诱导的帕金森病猕猴模型进行了临床行为的分级和评价[4]。主要包括以下几种量表：①Kurlan量表：是文献能检索到的最早用于猴帕金森病模型的评分量表，它是1991年由韩国学者Kurlan提出[37]。该表评分项目共有10个：面部表情（0-3分）；静止性震颤（0-3分）；动作性或意向性震颤（0-3分）；姿势（0-2分）；步态（0-3分）；运动徐缓（0-3分）；平衡和协调（0-3分）；上肢总体运动技巧（0-3分）；下肢总体运动技巧（0-3分）；防御反应（0-2分）。目前该量表也被广泛用于帕金森病猕猴模型的临床评分。②统一帕金森病评分量表(UnifiedParkinson’sDiseaseRatingScale，UPDRS)[4][33]：是目前广泛应用于人类帕金森病临床行为评价，通常使用该量表的第三部分-运动检查(motorexamination)，评价动物的运动行为。86 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文③Imbert临床评分量表：此量表是法国波尔多大学神经科学科学家ImbertChristelle历经五年研究专门为灵长类动物制定的临床评分量表[38]。④Bennazzouz临床评分量表[38]：1995年法国Bennazzouz博士通过结合黑质多巴胺神经元功能退变以及相关病理检测和人帕金森病临床分级制定而成的。Bezard.E[39]等也陆续用相关实验证明了此量表的可行性。⑤Canadian量表[40]是加拿大科学家Gomez-Mancillla等在1993年基于人帕金森病量表发展而成的，目前为美洲学者引用较多。另外还有StellaM.Papa在1996年对帕金森猴进行的左旋多巴相关实验中制作的帕金森病评分量表（PARKINSONSCORE）[41]；Schneider在1994年针对MPTP诱导的偏侧帕金森病食蟹猴模型开发的偏侧帕金森病猴评分量表（HemiParkinsonmonkeyratingscale）[42]；Smith在1991年针对双侧帕金森病猴模型制定的猴帕金森病评分量表（Monkey-parkinsonismratingscale）[6]等。总结和展望非人灵长类已成为人类最理想的替身和重要的研究对象与实验对象，并广泛应用于科研、医学、国防以及药物的非临床试验、安全性评估等诸多方面，为人类的健康和生命科学的发展做出了巨大贡献，其在基础研究和生物医药研究领域的重要地位是不可替代的[2]。行为学作为疾病最直接的表观科学，一直是科学家们研究疾病尤其是神经相关疾病的重点关注对象。从小动物（啮齿类等）行为开始，到大动物（灵长类）的行为学研究，需要越来越多的分析方法对动物的行为进行深入的剖析和解读。相比各种影像学分析或者病理学分析，行为学分析更为经济和可持续性，但是由于灵长类动物有别于其他低等动物，行为学分析方法更多是需要结合动物本身特点进行定制化的评价，其分析方法和相关技术手段的建立有待大家的深入研究和探讨。87 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文参考文献[1]龙勇诚,程斌,谢建国,etal.灵长类人类失联太久的表亲[J].森林与人类,2016,7):12-27.[2]胡新天,仇子龙,顾勇,etal.灵长类动物模型[J].中国科学院院刊,2016,7):773-782.[3]王力为,许丽,徐萍,etal.面向未来的中国科学院脑科学与类脑智能研究-强化基础研究,推进深度融合[J].中国科学院院刊,2016,7):747-54.[4]OPARAJ,MALECKIA,MALECKAE,etal.MotorassessmentinParkinson`sdisease[J].Annalsofagriculturalandenvironmentalmedicine:AAEM,2017,24(3):411-5.[5]KORDOWERJH,LIUYT,WINNS,etal.EncapsulatedPC12celltransplantsintohemiparkinsonianmonkeys:abehavioral,neuroanatomical,andneurochemicalanalysis[J].CellTransplantation,1995,4(2):155-71.[6]SMITHRD,ZHANGZ,KURLANR,etal.Developingastablebilateralmodelofparkinsonisminrhesusmonkeys[J].Neuroscience,1993,52(1):7-16.[7]ZHANGZ,ANDERSENA,SMITHC,etal.MotorSlowingandParkinsonianSignsinAgingRhesusMonkeysMirrorHumanAging[J].JGerontolABiolSciMedSci,2000,55(10):B473-80.[8]BACHEVALIERJ,LANDISLS,etal.Agemonkeysexhibitbehavioraldeficitsindicativeofwidespreadcerebraldysfunction[J].Neurobiologyofaging,1991,12(2):99-111.[9]PETRIDESM,IVERSENSD.Restrictedposteriorparietallesionsintherhesusmonkeyandperformanceonvisuospatialtasks[J].Brainresearch,88 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左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文致谢本研究是在导师陈彪教授，指导老师岳峰教授的指导下完成的，我的每一次成长和进步都离不开他们的支持与关心。首先感谢我导师尊敬的陈彪教授，感谢他这三年来对我的实验，学习以及人生道路的指导与帮助,他高尚的人格风范、忘我的工作作风、开阔的科研思路令我终生难忘，他开拓进取、勇于创新的崇高品质是我永远学习的榜样。最要感谢还有我的指导老师岳峰教授对我的悉心培育，从一点一滴，不断教诲我，不管是学习，实验，还是学术以及生活中，都给予了最大的支持和关心。遇到困难时，是岳老师的鼓励和指导给了我克服困难和坚持不懈的勇气，他为我指点迷津，让我如沐春风，给我提供了许许多多无私的帮助,他严谨的治学态度，兢兢业业、孜孜以求的工作作风和大胆的创新精神鼓舞和感染着我，使我无时不刻“以人为镜”！正是有了陈彪教授及岳峰教授在选题、研究设计、实验操作和论文撰写诸方面给予我的悉心指导才使研究工作得以顺利完成。真心感谢中心的两位学术大家：张健教授和卢奕教授，他们不仅是中心的标杆，还是中心所有师生的最崇高的榜样，他们给予我在学业中的精心指导和生活中的殷切关怀，两位老师对我的关心与指导、鼓励与肯定不仅陪伴着我顺利完成学业，更是我成长路上不可或缺的宝贵精神财富。特别感谢广西医科大学转化医学研究中心邹春林副、刘夏、付杰军、郭宏伟、王丽惠、史俊林、宋琼、杨欣、管昊等老师以及南方科技大学的黄昕老师，他们在我学习和生活中给予无限的热切关怀和鼓励。真诚感谢广西南宁灵康赛诺科生物科技有限公司的陶国现、黎雪琴、陆春玲、黄景源、兰玉莲、李燕、梁敏、唐荣平、周冰、秦羽、张周泉、龙琪等，在我于灵康公司两年多的时间里，他们不仅给了我技术上莫大的支持，也时刻对我的生活给予关心和支持。感谢中心的蒙杰、孙晓婷、卫晨、胡亚松、刘洋、秦思源、舒冠男、93 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文胡龙元、谢丽叶、李玉苗等师兄师姐对我学习和实验上的指导，感谢童海波、黄麓颖、孔晓阳同学陪伴我一起走过三年硕士研究生生活，感谢师妹鲍宇、马任驰、梁维萍、杜媛媛，他们无私的帮助与鼓励是我前进的动力。感谢国家自然科学基金委、广西自治区科技厅、人社厅及广西医科大学转化医学研究中心对本课题的顺利完成所给予的经费支持。最后，衷心的感谢我的家人对我的支持与关爱！谢谢！94 左旋多巴与多奈哌齐对慢性帕金森病食蟹猴模型运动和非运动行为影响的研究2015级硕士研究生毕业论文攻读硕士学位期间发表的论文1.胡亚松,罗斌斌,陶国现,岳峰,陈彪.食蟹猴腹腔注射百草枯致胰腺α-突触核蛋白的病理变化[J].基因组学与应用生物学,2017,36(05):1732-1736.2.罗斌斌，胡亚松,陶国现,唐荣平，岳峰,陈彪.MPTP诱导的食蟹猴偏侧帕金森病模型运动行为学的长期动态评价研究[J].首都医科大学学报,2018,39(02):217-222.95 96
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