外源性硫化氢和多奈哌齐对pc12细胞app代谢α途径的影响与机制研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文外源性硫化氢和多奈哌齐对PC12细胞APP代谢α途径的影响与机制研究姓名：赵丰丽申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：晏勇201205外源性硫化氢和多奈哌齐对PCI2细胞APP代谢伍途径的影响与机制研究摘要第一部分外源性硫化氢和多奈哌齐对A胆5．35致PCI2细胞损伤的保护作用目的：观察外源性硫化氢(Hzs)及多奈哌齐(don印吻1)对B淀粉样蛋白25—35(p一锄yloidpeptide25—35，Ap25-35)致大鼠嗜铬细胞瘤(PCI2)细胞损伤的细胞生存保护作用。力法：以体外培养的Pcl2细胞为研究对象，

2、用硫氢化钠(NaHS)作为外源性H2S供体。实验设空白对照组、Ap25．35组、NaHS组、№lHS+Ap25—35组、多奈哌齐组、多奈哌齐+AB25—35组共6组。N{lHS的浓度为10、25、50、100、200、500、1000岬01／L，而Ap25-35和多奈哌齐的浓度都为20岬ol／L。按分组浓度分别处理PCI2细胞24h后，用甲氮甲唑蓝法(MT)检测细胞成活率。糕①Ap25—35能显著降低Pcl2细胞的存活率伊o．05)，但2

3、5岬。儿～200岬01／LNaHS能提高PCI2细胞的存活率(Po．05)；③多奈哌齐能降低Ap25．35引起的细胞毒性作用，提高PCI2细胞存活率(P

4、显差异，都能保护Ap25．35所致的PCI2损伤。对培养PCI2细胞存活的最佳NaHs浓度是100岬ol／L。结论：Hzs及多奈哌齐都对Ap25—35致PCI2细胞损伤具有保护作用。关键词：外源性硫化氢；多奈哌齐；p淀粉样蛋白25—35第二部分外源性硫化氢和多奈哌齐对PCI2细胞APⅣAp代谢途径的影响目的：探讨外源性H2s及多奈哌齐对Pcl2细胞淀粉样前体蛋白／p．位淀粉样蛋白(APP／Ap)代谢的影响。方法：以PCI2细胞为研究对象，用NaHS作外源性H2S供体，实验设空白对照组、NaHSlO岬o】／L组、25、50、100、200岬o

5、l／L组、多奈哌齐20岬。儿组，共7组。按分组浓度分别处理PCI2细胞24h后，用Westemblot检测代谢过程中关键蛋白APP表达变化；EuSA检测细胞培养上清液中AD40、A陋2、sAPP0【、sAP邓的蛋白水平。结果l①不同浓度N批s和多奈哌齐对APP蛋白表达水平无明显差异(P>O．05)；②不同浓度NaHS和多奈哌齐均可降低A即，A阻2和sAPPp蛋白表达水平，还可增高sAPP仅蛋白表达水平，这种作用与H2s浓度有相关性。结论：外源性H2s和多奈哌齐可以诱导APP／Ap代谢途径向非淀粉样途径(Cc途径)转变，HzS的这种作用具有浓

6、度依赖性。关胡：外源性硫化氢；多奈哌齐；淀粉样前体蛋白第三部分外源性硫化氢和多奈哌齐对PCI2细胞伍分泌酶(ADAMlO／AD』蝴17)的影响目的l观察H2s和多奈哌齐对Pcl2细胞阱分泌酶伽)AMlo和地～M10蛋白的影响，探讨二者对APP代谢途径的转变作用是否与心～M10和ADAMl7相关。赫以Pcl2细胞为研究对象，用NaHs作外源性H2S供体，实验设空白对照组、N￡HS10、25、50、100和200岬ol／L组、多奈哌齐20岬ol／L组，共7组。按分组浓度分别处理PCI2细胞24h后，用Westemblot检测代谢过程中关键蛋白创

7、删10和Nw洲17的表达水平。结果：不同浓度№皿s和多奈哌齐组的心～MlO和ADAMl7蛋白表达水平较对照组增高，且随着NaHS浓度增加，蛋白表达水平呈递增趋势(P<0．05)。100岬ol／L和200岬ol／LNaHS组的AD—Ⅲ10及趟)AMl7表达水平无明显差异(P>0．05)，但100Lunlol／LNaHS组的舢)AMlO及ADAMl7蛋白表达水平最高(P

8、向非淀粉样途径转变，可能与Ⅸ分泌酶的核心蛋白AD-Ⅲ10和ADAMl7蛋白表达水平增高有关。关键阔：外源性硫化氢；多奈哌齐；0【一分泌酶(ADAMlo、ADAMl7)第四部分外源