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1、中华人民共和国国家标准GB5009.258—2016食品安全国家标准食品中棉子糖的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会GB5009.258—2016食品安全国家标准食品中棉子糖的测定1范围本标准规定了食品中棉子糖含量测定的离子色谱方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、婴幼儿罐装辅助食品、饮料及豆粉食品中棉子糖含量的测定。2原理试样采用乙腈沉淀、高速离心的方式去除样品中的蛋白质和脂肪,经固相萃取柱净化后,注入离子色谱仪,氢氧化钠溶液为淋洗液,经阴离子交换柱分离,脉冲安培检测器检测。保留时间定
2、性,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈(C2H3N):色谱纯。3.1.250%氢氧化钠溶液(NaOH):色谱纯。3.1.3α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。3.1.4氮气(N2):纯度≥99.99%。3.2试剂配制氢氧化钠溶液(250mmol/L):在2L塑料试剂瓶中加入500mL经过0.22μm尼龙滤膜过滤的蒸馏水,移取13.1mL氢氧化钠(3.1.2)溶液至水面以下,加蒸馏水至1000mL,通入氮气保护后,摇匀备用。3.3标准品棉子糖标准品(C18H32O16):纯度≥
3、99.0%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备溶液(1000mg/L):准确称取棉子糖100mg(精确到0.1mg)于50mL烧杯中,用蒸馏水溶解,转移到100mL容量瓶中,用水定容。摇匀,4℃保存,有效期为1个月。3.4.2标准使用溶液(50.0mg/L):准确吸取5mL标准储备溶液于100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。现用现配。3.4.3标准系列工作溶液:分别准确吸取棉子糖标准使用溶液0mL、1mL、2mL、5mL、10mL、1GB5009.258—201620mL、50mL于100mL容量瓶中,用蒸馏水定容。得到标准曲线工作溶液浓度分别为0.000m
4、g/L、0.500mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L。4仪器和设备4.1离子色谱仪:配置脉冲安培检测器。4.2天平:感量为0.1mg。4.3离心机:转速≥10000r/min。4.4涡旋混合器。4.5超声波清洗器。4.6固相萃取装置。4.7培养箱:60℃±2℃。4.8固相萃取柱:OnGuardⅡRP柱(填料为反相聚二乙烯基苯聚合物)和OnGuardⅡH柱(填料为H型聚苯乙烯基强酸树脂),或其他等效柱。规格为1.0mL,H柱为650mg,RP柱为350mg。4.90.22μm水性滤膜针头滤器。4.10
5、注射器:15mL。5分析步骤5.1试样制备5.1.1试样预处理5.1.1.1乳粉、米粉、豆粉等试样:取试样约100g(其他固体试样先进行粉碎、研磨),装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,通过反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀直到使试样均一化。5.1.1.2液体试样:取试样约100mL,装入能够容纳2倍试样体积的带盖容器中,通过反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀直到使试样均一化。5.1.1.3肉泥等其他半固体试样:称取试样50.0g,称取等量的水与之混合,涡旋混匀,超声20min。5.2试样处理5.2.1米粉等含淀粉的试样:称取混合均匀的试样1g~5g(精确至0.1
6、mg,含有棉子糖约为20mg)于离心管中,加入1gα-淀粉酶,固体试样需用约50mL45℃~50℃的水使其溶解,混合均匀后充氮,盖上管盖,置于60℃±2℃培养箱内酶解30min。冷却至室温后,用水定容至100mL。5.2.2乳粉、豆粉、饮料、肉泥等其他试样:称取混合均匀的试样1g~5g(精确至0.1mg,含有棉子糖约为20mg)于100mL烧杯中,加水溶解,固体试样需用约50mL45℃~50℃的水使其溶解,转移到100mL容量瓶中,用水定容。5.3净化5.3.1吸取5mL经过处理的试样溶液于50mL具塞锥形瓶中,加入10mL水,摇匀,超声30min,转移到50m
7、L容量瓶中,加入30mL乙腈,用水定容。转移到50mL离心管中,于10000r/min离心10min,取上清液备用(可以根据样液中棉子糖含量调整稀释倍数)。5.3.2固相萃取柱的活化:将OnGuardⅡRP柱使用前依次用10mL甲醇、15mL蒸馏水进行活化;OnGuardⅡH柱用10mL蒸馏水进行活化。必要时可以使用固相萃取装置,液体流速控制在1mL/min。5.3.3将15mL注射器的柱筒部分、0.22μm水性滤膜针头滤器、OnGuardⅡRP柱、OnGuardⅡH2GB5009.258—2016柱顺序连接,接在固相萃取装置上。取备用的上清液(5.3.1)约1
8、5.0mL加入注射器柱筒
