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1、中华人民共和国国家标准GB5009.245—2016食品安全国家标准食品中聚葡萄糖的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会GB5009.245—2016食品安全国家标准食品中聚葡萄糖的测定1范围本标准规定了食品中聚葡萄糖的测定方法。本标准适用于食品中添加的聚葡萄糖的测定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1聚葡萄糖[(C6H10O5)n]由葡萄糖、山梨糖醇和柠檬酸(或磷酸)按一定比例混合,在高温下加热聚合并精制、干燥而成的多聚体,平均聚合度12。属于可溶性膳食纤维。3原理食品中聚葡萄糖经热水浸提、超滤离心
2、后,滤液经酶解去除淀粉、果聚糖等干扰物后,再用离子色谱-脉冲安培检测器定量测定聚葡萄糖含量。4试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1氢氧化钠溶液(50%):色谱纯,离子色谱专用。4.1.2冰乙酸(CH3COOH)。4.1.3三水合乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。4.1.4无水乙酸钠(CH3COONa)。4.1.5果聚糖酶(fructanase):≥2000U/mL。4.1.6淀粉葡糖苷酶(Amyloglucosidase):≥3260U/mL(可溶性淀粉);≥200U/mL(对硝基酚-β-麦芽糖苷,
3、p-NP-βmaltoside)。4.1.7异淀粉酶(Isoamylase):≥1000U/mL。4.2试剂配制4.2.1乙酸溶液(0.2mol/L):准确吸取1.2mL冰乙酸,用水稀释至100mL。4.2.2乙酸钠溶液(0.2mol/L):准确称取2.72g三水合乙酸钠,用水溶解并稀释至100mL。4.2.3乙酸盐缓冲液(pH为4.5):将28mL乙酸溶液(0.2mol/L)与22mL乙酸钠溶液(0.2mol/L)混1GB5009.245—2016合,用水稀释至100mL。4.2.4混合酶液:分别吸取680μL果聚糖酶、84μL淀粉葡糖苷酶、17μL异淀粉酶混合,加乙
4、酸盐缓冲液稀释至20mL。混合酶液临用现配。4.3流动相4.3.1流动相A(含0.15mol/L氢氧化钠):准确吸取15.7mL氢氧化钠溶液(50%),用预先脱气的水稀释2L,惰性气体保护。4.3.2流动相B(含0.15mol/L氢氧化钠,0.50mol/L乙酸钠):准确称量41g无水乙酸钠(或68g三水合乙酸钠),用流动相A溶解定容至1L,混匀,过0.45μm膜,脱气。注:配制流动相时,去离子水需预先脱气0.5h,定容后的流动相混匀时倒置混匀5~6次,不可剧烈振摇。配好的流动相沿储液瓶壁缓缓倒入,脱气0.5h后惰性气体保护。4.4参考物质聚葡萄糖[(C6H10O5)n
5、]:纯度大于90%,CAS:68424-04-4。注:为保证结果的准确性,如能确定添加的聚葡萄糖来源,应选用食品中添加的聚葡聚糖同源的参考物质,并达到FCC级。4.5参考物质溶液的配制4.5.1参考物质储备液(2.00mg/g):准确称取0.20g聚葡萄糖参考物质(精确至0.0001g)至已预先称重的100mL具螺口塞的试样瓶中(精确至0.001g)。加入约100g预热至80℃的去离子水,拧紧螺口塞,涡旋振荡30s,将试样瓶置于80℃水浴10min,每隔5min振荡一次,以使聚葡萄糖充分溶解,取出试样瓶,冷却至室温,称重(精确至0.001g)。参考物质储备液于4℃保存,
6、有效期1个月。4.5.2参考物质中间液:分别精确称量10.0g、7.50g、5.00g、3.75g、2.50g、1.50g参考物质储备液(精确至0.0001g)加水至20.0g(精确至0.0001g),得到浓度为1.000mg/g、0.750mg/g、0.500mg/g、0.375mg/g、0.250mg/g、0.150mg/g的参考物质中间液。4.5.3参考物质工作液:取2mL离心管,称量(精确至0.0001g),精确称量参考物质中间液0.20g(精确至0.0001g)转移至已称重的离心管中,加入酶混合液0.8mL,称量(精确至0.0001g),振荡混合均匀,于50℃
7、水浴60min,沸水浴10min,取出,冰浴5min,于10000r/min离心10min。上清液过0.22μm滤膜,进样分析,得到浓度分别为200μg/g、150μg/g、100μg/g、75.0μg/g、50.0μg/g、30.0μg/g的参考物质工作液系列,进样分析。以此6点参考物质工作液上机获得工作曲线,其回归方程的决定系数(R2值)应不小于0.995。5仪器与设备5.1分析天平:感量分别为1mg,0.1mg。5.2恒温水浴箱:控温精度±1℃。5.3高速离心机:转速≥10000r/min。5.4涡旋振荡器。5.5微量可调移液器:2
