gb 5009.276-2016 食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定

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1、中华人民共和国国家标准GB5009.276—2016食品安全国家标准食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB5009.276—2016前言本标准代替GB/T9695.17—2008《肉与肉制品葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定》。本标准与GB/T9695.17—2008相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定”;———增加了第一法的检出限、定量限;—

2、——修改了5.1中试样制备的方法;———增加了“第二法高效液相色谱法”。ⅠGB5009.276—2016食品安全国家标准食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定1范围本标准规定了食品中葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定方法。本标准第一法适用于肉与肉制品、豆制品、饮料中葡萄糖酸-δ-内酯的测定,第二法适用于食品中葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定。第一法分光光度计法2原理用沸水提取试样中的葡萄糖酸-δ-内酯,过滤上清液,在氢氧化钾作用下葡萄糖酸-δ-内酯转化成葡萄糖酸盐。葡萄糖酸盐通过葡萄糖酸激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶的

3、作用,产生5-磷酸核酮糖并使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原。用分光光度计测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的吸光度,然后计算出葡萄糖酸-δ-内酯的含量。葡萄糖酸激酶葡萄糖酸盐+腺嘌呤核苷三磷酸→6-磷酸葡萄糖酸盐+二磷酸腺苷6-磷酸葡萄糖脱氢酶+6-磷酸葡萄糖酸盐+NADP→5-磷酸核酮糖+NADPH+CO2+H3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1无水乙醇(C2H6O)。3.1.2石油醚:沸程30℃~60℃。3.1.3

4、氢氧化钾(KOH)。3.1.4双甘氨肽(C4H8N2O3)。3.1.5氯化镁(MgCl2)。3.1.6碳酸氢钠(NaHCO3)。3.1.7烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐(C21H27N7NaO17P3)。3.1.8腺嘌呤核苷三磷酸钠盐(C10H14N5Na2O13P3)。3.1.96-磷酸葡萄糖脱氢酶(活力,110U/mg)。3.1.10葡萄糖酸激酶(活力,13U/mg)。3.2试剂配制3.2.1氢氧化钾溶液(2mol/L):称取11.22g于50mL小烧杯中,加水溶解后转移至100mL容量瓶,1G

5、B5009.276—2016定容。3.2.2缓冲液:分别称取双甘氨肽2.64g和氯化镁0.284g溶于150mL水中,用氢氧化钾溶液调pH至8.0,定容到200mL容量瓶(可在4℃下保存4周)。3.2.3烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐(NADP)溶液(10mg/mL):称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐50mg于带盖的小瓶中,用5.0mL水溶解(可在4℃下保存4周)。3.2.4腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)溶液(50mg/mL):称取腺嘌呤核苷三磷酸钠盐250mg和碳酸氢钠250mg于带盖的小瓶中,加入5.

6、0mL水溶解(可在4℃下保存4周)。3.2.56-磷酸葡萄糖脱氢酶(6-PGDH)溶液(2.0mg/mL):每毫升6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6-PGDH)悬液中含有6-PGDH2.0mg,葡萄糖酸激酶和还原型NADP氧化酶不超过0.05%(可在4℃下保存6个月)。3.2.6葡萄糖酸激酶(GK)溶液(1.0mg/mL):每毫升葡萄糖酸激酶(GK)悬液中含有GK1.0mg,NADP氧化酶含量不超过0.05%(可在4℃下保存6个月)。4仪器和设备4.1紫外可见分光光度计。4.2分析天平:感量1mg和0.1m

7、g。4.3匀质机。5分析步骤5.1试样制备5.1.1肉与肉制品、豆制品等固体样品取有代表性的样品不少于200g,用匀质机制成匀浆。制成后的试样应尽快分析,若不立即分析,应密封冷冻贮存。贮存的试样在启用时应重新混匀。5.1.2饮料等液体样品摇匀后直接取样。5.2提取肉制品:称取2g~10g(精确至0.001g)试样于50mL烧杯中,加入10mL石油醚洗涤,用玻璃棒搅拌均匀,静置15min后,用干燥滤纸过滤,重复洗涤三次。再用10mL无水乙醇洗涤三次。然后将滤纸上残渣转移至原小烧杯中,加30mL水煮沸

8、,待冷却后用氢氧化钾溶液(2mol/L)调至溶液pH为10,用水定容至100mL容量瓶。过滤,滤液待上机用。豆制品:称取2g~10g(精确至0.001g)试样于50mL烧杯中,加30mL水提取,煮沸,冷却后用氢氧化钾溶液(2mol/L)调至溶液pH为10.0,用水定容至100mL容量瓶。过滤,滤液待上机用。饮料:过滤,准确吸取30mL滤液用氢氧化钾溶液(2mol/L)调至溶液pH为10,用水定容至100mL容量瓶,待上机用。5.3测定取两个1cm比色皿,一个为试验皿,一个为空白皿。