基因工程重点内容

《基因工程重点内容》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家布鲁斯·博伊特勒、法国籍科学家朱尔斯·霍夫曼以及加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼，以表彰他们在免疫学领域取得的研究成果。揭示免疫反应的激活机制，使人们对免疫系统的理解发生“革命性变化”，进而为免疫系统疾病研究提供了新的认识，并为传染病、癌症等疾病的防治开辟了新的道路。诺贝尔化学奖以色列科学家达尼埃尔·谢赫特曼因发现准晶体。首次在电子显微镜中观察到一种“反常理”的现象——他们当时所观察的铝合金中的原子，是以一种不重复的非周期性对称有序方式排列的，而按照当时的理论，具有此种原子排列方式的固体物质

2、是不存在的。在谢赫特曼发现准晶体后，科研人员陆续在实验室中制造出其他种类的准晶体，并在取自俄罗斯一条河流的矿物样本中发现天然准晶体。瑞典一家公司也在一种钢中发现准晶体，这种准晶体如同盔甲一般增加材料强度。细胞的全能性：一个细胞在一定条件下具有发育成完整个体的潜能，具有这种潜能的细胞称为全能性细胞。DNA克隆:应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆

3、或重组DNA。目的:①分离获得某一感兴趣的基因或DNA②获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）。重组DNA技术操作过程：可形象归纳为:分:分离目的基因。切：限制酶切目的基因与载体。接：拼接重组体。转：转入受菌体。筛：筛选重组体工具酶：1限制性核酸内切酶：识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。作用：与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统：限制外源DNA，保护自身DNA，稳定细菌遗传性状。命名：第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株；用罗

4、马数字表示发现的先后次序.2.同功异源酶：来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点的酶。3.同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称为配伍未端。4.TaqDNA聚合酶:是一种耐热的依赖于DNA的DNA聚合酶，具有５‘→３’聚合酶活性，该酶最适反应温度为75～80.5.逆转录酶:a.合成cDNAb.替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析.6.Klenow片段:具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而无53外切活性.常用于cD

5、NA第二链合成，双链DNA3末端标记等.7.DNA聚合酶1作用：a.合成双链cDNA分子或片段连接b.缺口平移制作高比活探针c.DNA序列分析4填补3´末端.8.DNA连接酶功能:催化DNA中相邻的5´酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二酯键,使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接.9.多聚核苷酸激酶功能:催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针.10.末端转移酶:功能:在3´羟基末端进行种核苷酸多聚物加尾11.碱性磷酸酶:功能:切除5末端磷酸基团.目的基因的获取:a.化学合成法b.基因组DNA文库.c.CDNA

6、文库d.聚合酶链反应.基因载体：概念：携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子.常用载体:来源分类：质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、人工染色体载。体用途分类：克隆载体、表达载体、穿梭载体。克隆载体：能使插入的外源DNA序列被复制扩增而不能表达的载体。表达载体：使插入的外源DNA序列转录翻译，表达出多肽链的载体。穿梭载体：这类载体中含有来源不同的复制子结构，即具备原核细胞复制所需的序列结构，又具有能使外源片段在真核细胞表达所需的结构元件和相应的选择标记基因,所以能在两种受体细胞中复制并检测，

7、克隆的外源基因在此类载体直接从一种受体转入另一种受体中进行复制和表达．载体具备以下条件:1.具有自我复制能力2.具有多个单一限制性酶切位点3.具有选择性遗传标记4.分子量小，拷贝数高5.具有较高的遗传稳定性。克隆载体必需结构:松弛型的复制子、多克隆位点、筛选标记.常见:质粒、噬菌体。表达载体结构特点：具有复制子，筛选标记，位于多克隆位点的上下游具有转录效率较高的启动子，起始密码子和核糖体结合位点，转录终止子结构。克隆:来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。克隆化：获取同一拷贝的过程称为克隆化即无性繁殖。技术水平：(1)分

8、子克隆,即DNA克隆;(2)细胞克隆；(3)个体克隆（动物或植物）。质粒:①概念:存在于细菌染色体外的能独立复制的双链闭环的DNA分子。②特点:分子量相对较小，能在细菌内稳定存.能在宿主细胞内独立自主复制.具有某些遗传标志,会赋予宿主细胞一些遗传性状；具有多个限制酶的单一位点。质粒的复制类型：严谨型：复制与宿主染色体同步受宿主染色