茶叶中美术绿（铅铬绿）的测定

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茶叶中美术绿（铅铬绿）的测定BJS2019101范围本标准第一篇规定了茶叶中铬酸铅含量的测定方法。本标准第一篇适用于茶叶中铬酸铅的测定。本标准第二篇规定了茶叶中美术绿的定性方法。本标准第二篇适用于茶叶中美术绿的定性判定。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1美术绿美术绿又名铅铬绿，用铬酸铅颜料沉淀到铁蓝颜料分散体上或使用铬酸铅颜料与铁蓝颜料混合均能制备出的一种颜料。美术绿的主要成分为铬酸铅和铁蓝，且铬酸铅的比例不低于50%。第一篇铬酸铅的测定铅含量的测定采用现行有效的国家标准GB5009.12方法，CrO42-的测定选用下述方法。第一法高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法（HPLC-ICP/MS）3原理茶叶样品经灰化后，其中的CrO42-经碱性提取液提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物经过雾化由载气送入ICP炬焰中，经蒸发、解离、原子化、电离等过程，大部分转化为带正电荷的正离子，经离子采集系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离测定。以保留时间和质荷比定性，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。 茶叶中美术绿（铅铬绿）的测定BJS2019101范围本标准第一篇规定了茶叶中铬酸铅含量的测定方法。本标准第一篇适用于茶叶中铬酸铅的测定。本标准第二篇规定了茶叶中美术绿的定性方法。本标准第二篇适用于茶叶中美术绿的定性判定。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1美术绿美术绿又名铅铬绿，用铬酸铅颜料沉淀到铁蓝颜料分散体上或使用铬酸铅颜料与铁蓝颜料混合均能制备出的一种颜料。美术绿的主要成分为铬酸铅和铁蓝，且铬酸铅的比例不低于50%。第一篇铬酸铅的测定铅含量的测定采用现行有效的国家标准GB5009.12方法，CrO42-的测定选用下述方法。第一法高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法（HPLC-ICP/MS）3原理茶叶样品经灰化后，其中的CrO42-经碱性提取液提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物经过雾化由载气送入ICP炬焰中，经蒸发、解离、原子化、电离等过程，大部分转化为带正电荷的正离子，经离子采集系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离测定。以保留时间和质荷比定性，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1试剂4.1.1硝酸（HNO3）。4.1.2氨水（NH3·H2O）。4.1.3氢氧化钠（NaOH）：分析纯。4.1.4无水碳酸钠（Na2CO3）。4.2试剂配制4.2.1碱性提取液（0.1mol/LNaOH和0.056mol/LNa2CO3）：称取4.0±0.05gNaOH（4.1.3）和6.0±0.05gNa2CO3（4.1.4）溶解并定容至1L，将溶液在20-25℃下密封保存于聚乙烯瓶中，使用时pH必须达到11.5以上，有效期1个月。4.2.2碱性提取液（0.2mol/LNaOH和0.112mol/LNa2CO3）：称取8.0±0.05gNaOH（4.1.3）和12.0±0.05gNa2CO3（4.1.4）溶解并定容至1L，将溶液在20-25℃下密封保存于聚乙烯瓶中，使用时pH必须达到11.5以上，有效期1个月。4.2.3硝酸溶液（5mol/L）：取357mL硝酸（4.1.1）用水定容至1000mL，混匀待用。溶液在20-25℃下避光保存，如溶液呈黄色需重新配制。4.2.4硝酸溶液（1+9）：取10mL硝酸（4.1.1）与90mL水混合，摇匀。4.2.5氨水溶液（1+9）:取10mL氨水（4.1.2）与90mL水混合，摇匀。4.2.6硝酸铵溶液（0.05mmol/L）：一定量水中加入3.4mL硝酸（4.1.1）和3.7mL氨水（4.1.2），用水定容至1L，摇匀；用硝酸溶液(4.2.4)或氨水溶液(4.2.5)调节pH在7.0-7.2范围内。4.3标准品铬酸铅：Leadchromate，CAS号:7758-97-6，分子式PbCrO4，分子量323.18，纯度≥99%。4.4标准溶液的配制4.4.1CrO42-标准储备液：准确称取0.0279g铬酸铅标准物质，于100mL烧杯中，加入50mL碱性提取液（4.2.2）置于恒温磁力搅拌水浴锅中，在90℃-95℃温度下不间断搅拌30min，取出后冷却至室温后转移至100mL容量瓶中，用水冲洗烧杯并转移至容量瓶中，用水定容至刻度。溶液中CrO42-的浓度为100mg/L。或使用六价铬标准溶液进行配制。 4.4.2CrO42-标准工作液：取1.0mLCrO42-标准储备液（4.4.1）用硝酸铵溶液（4.2.6）定容至10mL，制得标准中间液，浓度为10mg/L。分别吸取0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0mL标准中间液于100mL容量瓶中，用硝酸铵溶液（4.2.6）定容并混匀，过水系微孔滤膜（0.45μm），待上机测定。该标准工作液CrO42-的浓度分别为5μg/L，10μg/L，20μg/L，50μg/L，100μg/L，200μg/L，500μg/L。该标准工作液现用现配。5仪器和设备注：玻璃器皿及坩埚均需以硝酸溶液（1+4）浸泡2h，用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。5.1高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪（HPLC-ICP/MS）。5.2分析天平：感量为0.1mg和0.01g。5.3可调式电阻炉，功率为2000W。5.4磁力搅拌恒温水浴锅：能在90℃-95℃恒温。5.5pH计：精度为0.01。5.6样品粉碎装置。6试样制备与保存茶叶样品去杂后，放入粉碎机中粉碎，样品全部过标准网筛（425μm），储于洁净容器中，至于阴凉干燥处密封保存，备用。7分析步骤7.1样品提取准确称取粉碎均匀的茶叶样品1g(精确到0.01g)于100mL坩埚中，将坩埚置于电炉上以最大功率灼烧至无白烟。冷却至室温后加入50mL碱性提取液(4.2.1)，置于磁力搅拌恒温水浴锅中，在90℃-95℃温度下不间断搅拌30min，取出后冷却至室温，定容至100mL容量瓶中，从中取1.0mL用硝酸铵溶液（4.2.6）定容至50mL（或根据实际浓度适当稀释），过水系微孔滤膜（0.45μm），待上机测定。按同一操作方法作空白试验。7.2仪器参考条件 7.2.1液相色谱参考条件色谱柱：G3268-80001色谱柱，(柱长30mm，内径4.6mm)，或等效柱。流动相：0.05mmol/L的硝酸铵溶液（4.2.6）。洗脱方式:等度洗脱。流速：0.6mL/min。进样量：50μL。7.2.2电感耦合等离子体质谱仪参考条件模式：碰撞反应池模式；RF入射功率为1600W；载气为高纯氩气；载气流速为1.0L/min；雾化器：漩流雾化器；碰撞反应气（He），流速为3.5mL/min；检测质量数m/z=52(Cr)。7.3定量测定7.3.1标准曲线的制作吸取标准系列溶液（4.4.2）50μL注入液相色谱-电感耦合等离子质谱仪，按仪器参考条件（7.2）进行测定，得到相应的色谱图，以保留时间定性。以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。7.3.2试样溶液的测定在相同条件下，吸取空白溶液、试样溶液（7.1）50μL注入液相色谱-电感耦合等离子质谱联用仪进行测定，得到相应色谱图（参见附录A），以保留时间定性。根据标准曲线得到待测液中组分的含量，平行测定次数不少于两次。8分析结果表述8.1试样中铬酸根（CrO42-）的含量按式（1）计算：……………………(1)式中：X——试样中CrO42-的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C1——样品溶液中CrO42-的浓度，单位为微克每升（μg/L）；C0——溶剂空白中CrO42-的浓度，单位为微克每升（μg/L）；V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；ƒ——试样溶液稀释倍数; 1000——换算系数;m——样品质量，单位为克（g）。8.2试样中铬酸铅含量的计算：当CrO42-含量Pb含量≥0.5597时，试样测得的Pb含量乘以换算系数1.560，即得铬酸铅（以PbCrO4计）的含量；当CrO42-含量/Pb含量＜0.5597时，试样测得的CrO42-含量乘以换算系数2.787，即得铬酸铅（以PbCrO4计）的含量。计算结果保留三位有效数字。9检测方法的精密度、灵敏度、准确度9.1精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9.2灵敏度当称样量为1.0g，定容体积为100mL后稀释50倍测定时，PbCrO4检出限为10mg/kg，定量限30mg/kg。9.3准确度本方法CrO42-添加浓度在30~300mg/kg范围内，回收率为87.1%~105.9%。第二法离子色谱法（IC法）10原理茶叶样品经灼烧后，其中的CrO42-经碱性提取液提取，在碱性条件下（pH=9.0±0.5），采用阴离子交换色谱柱分离，离子色谱-电导检测器测定，外标法定量。11试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。11.1试剂11.1.1浓硫酸（H2SO4）。11.1.2硝酸（HNO3）。11.1.3碳酸氢钠（NaHCO3）。11.1.4氢氧化钠（NaOH）:分析纯。11.1.5无水碳酸钠（Na2CO3）。11.2试剂配制 11.2.1碱性提取液：配制同4.2.1。11.2.2硝酸溶液（5mol/L）：配制同4.2.3。11.2.3淋洗液储备液（40mmol/L碳酸钠和10mmol/L碳酸氢钠混合溶液）：分别称取4.25g无水碳酸钠（11.1.5）和0.84g碳酸氢钠（11.1.3），用水溶解并定容至1L，混匀待用。11.2.4淋洗液使用液（4mmol/L碳酸钠和1mmol/L碳酸氢钠混合溶液）：将淋洗液储备液(11.2.3)用水稀释10倍，混匀，经水系微孔滤膜（0.45μm）抽滤后使用。11.2.5再生液：吸取2mL浓硫酸（11.1.1）用水定容至1L，摇匀，经水系微孔滤膜（0.45μm）抽滤后使用。11.3标准品同4.3。11.4标准溶液的配制11.4.1铬酸根（CrO42-）标准储备液：配制同4.4.1。11.4.2CrO42-标准工作液：取浓度为100mg/L的CrO42-标准储备液（4.4.1）10mL用水定容至100mL，制得标准中间液，浓度为10mg/L。分别吸取0.2，0.5，1.0，5.0，10.0，20.0mL标准中间液于100mL容量瓶中，用水定容并混匀，过水系微孔滤膜，待上机测定。该标准工作溶液CrO42-的浓度分别为0.02μg/mL，0.05μg/mL，0.10μg/mL，0.50μg/mL，1.00μg/mL，2.00μg/mL。该标准工作液现用现配。12仪器和设备12.1离子色谱仪，配电导检测器，碳酸盐淋洗系统。如采用氢氧根系统，条件见附录C。12.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。12.3可调式电阻炉，功率为2000W。12.4磁力搅拌恒温水浴锅：能在90℃-95℃恒温。12.5pH计:精度为0.01。12.6样品粉碎装置。13试样制备与保存 同6。14分析步骤14.1样品提取准确称取粉碎均匀的茶叶样品1g(精确到0.01g)于100mL坩埚中，将坩埚置于电炉上以最大功率灼烧至无白烟。冷却至室温后加入50mL碱性提取液(4.2.1)，置于恒温磁力搅拌水浴锅中，在90℃-95℃温度下不间断搅拌30min，取出后冷却至室温，转移至100mL烧杯中，用硝酸溶液(4.2.3)调pH至9.0±0.5后转移至500mL容量瓶中，用水定容并混匀。过水系微孔滤膜(0.45μm)，待上机测定。按同一操作方法作空白试验。14.2离子色谱条件色谱柱：MetrosepASupp5-150或相当的阴离子色谱柱。检测器：电导检测器。抑制器：MSMǁ化学抑制器。柱温：30℃。流速：0.7mL/min。进样量：20μL。14.3定量测定14.3.1标准曲线的制作吸取标准系列溶液（11.4.2）20μL注入离子色谱仪，按仪器参考条件（14.2）进行测定，得到相应的色谱图，以保留时间定性。以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。14.3.2样品测定在相同条件下，分别吸取空白溶液、试样溶液（14.1）20μL，按仪器参考条件（14.2）进行测定，得到相应色谱图（参见附录B），以保留时间定性。根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次。15结果计算15.1试样中铬酸根（CrO42-）的含量按式（2）计算： ……………(2)式中：X——试样中CrO42-的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C1——样品溶液中CrO42-的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；C0——样品空白液中CrO42-的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；1000——换算系数;m——样品质量，单位为克（g）。15.2试样中铬酸铅含量的计算：同8.2。计算结果保留三位有效数字。16方法的精密度、灵敏度、准确度16.1精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。16.2灵敏度当称样量为1.0g，定容体积为500mL时，PbCrO4检出限为10mg/kg，定量限30mg/kg。16.3准确度本方法CrO42-添加浓度在30~300mg/kg范围内，回收率为85.17~107.59%。第二篇铁蓝定性验证17原理铁蓝的主要成分亚铁氰根在酸性条件下蒸馏分解出氰化物，与氯胺T反应，生成氯化氰，与显色剂生成蓝色染料，分光光度法测定。18试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。18.1试剂18.1.1氢氧化钠(NaOH)。 18.1.2无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）。18.1.3无水磷酸二氢钾（KH2PO4）。18.1.4氯胺T（C7H7ClNNaO2S·3H2O）。18.1.5酒石酸(C4H6O6)。18.1.6酚酞（C20H14O4）。18.1.71-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O）。18.1.8冰乙酸（CH3COOH）。18.1.9无水乙醇（CH3CH2OH）。18.1.10吡啶（C5H5N）。18.1.11甲基橙（C14H14N3SO3Na）。18.2试剂配制18.2.1NaOH溶液（0.1mol/L）：准确称取1.0gNaOH(18.1.1)，用水定容至250mL，摇匀待用。18.2.2NaOH溶液（0.5mol/L）：准确称取5.0gNaOH(18.1.1)，用水定容至250mL，摇匀待用。18.2.3磷酸盐缓冲溶液（pH=7.0）：准确称取42.6g无水磷酸氢二钠(18.1.2)和13.6g无水磷酸二氢钾(18.1.3)，加水溶解，定容至1L，摇匀待用。18.2.4氯胺T溶液（10g/L）：准确称取1.0g氯胺T(18.1.4)，用水定容至100mL，摇匀待用，现用现配。18.2.5酚酞指示液：准确称取1.0g酚酞(18.1.6)于60mL无水乙醇(18.1.9)中，加水40mL，摇匀待用。18.2.6吡啶-吡唑啉酮溶液(5g/L)：准确称取1.0g1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(18.1.7)，溶于200mL无水乙醇(18.1.9)中，加1.2mL吡啶(18.1.10)，混匀待用，现用现配。18.2.7乙酸溶液（0.1mol/L)：准确吸取1.15mL冰乙酸(18.1.8)，用水定容至200mL，摇匀待用。18.2.8甲基橙指示剂（0.5g/L)：准确称取50mg甲基橙(18.1.11)，溶于水中，定容至100mL，摇匀待用。18.3标准品 铁蓝：PrussionBlue，CAS号:14038-43-8，分子式Fe4[Fe(CN)6]3，分子量859.23，纯度≥99%。18.4参比溶液配制准确称取0.0150g铁蓝标准物质于250mL高型烧杯中，准确加入100mLNaOH溶液（18.2.1），于室温下震荡30min后，取10.0mL定容至100mL，取稀释液1.0mL于500mL蒸馏烧瓶中，加水至液体总量约为150mL，加入1~2滴甲基橙指示剂（18.2.8），再加入2g酒石酸（18.1.5），溶液由橙黄色变为橙红色，迅速连接好蒸馏装置，将冷凝管下端插入盛有10mLNaOH溶液（18.2.2）的100mL容量瓶中，收集蒸馏液，调节温度将蒸馏速度控制在2mL/min~3mL/min，当蒸馏液接近100mL时，停止加热，取下容量瓶，用水定容至刻度，摇匀。此标准溶液中铁蓝的浓度为0.15mg/L。19仪器和设备19.1分光光度计：配1cm比色池。19.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。19.3500mL蒸馏装置：配冷凝器和聚乙烯毛细管。19.4振荡器。19.5离心机。20分析步骤20.1试样制备准确称取未经粉碎的茶叶样品10g(精确至0.01g)，准确加入100mLNaOH溶液（18.2.1）于250mL高型烧杯中，于室温下震荡30min后，用漏斗滤去茶叶，滤液于3000r/min离心5min，准确移取上清液50mL于500mL蒸馏烧瓶中，加水至液体总量约为150mL，加入1~2滴甲基橙指示剂(18.2.8)，再加入2g酒石酸（18.1.5），溶液由橙黄色变为橙红色，迅速连接好蒸馏装置，将冷凝管下端插入盛有10mLNaOH溶液（18.2.2）的100mL容量瓶中，收集蒸馏液，调节温度将蒸馏速度控制在2mL/min~3mL/min，当蒸馏液接近100mL时，停止加热，取下容量瓶，用水定容至刻度，摇匀，待测。同时作空白试验，空白溶液除不加碱液（18.2.1）和酒石酸（18.1.5）外，均按（20.1）操作。 20.2测定准确移取参比溶液（18.4）、样液（20.1）、空白溶液（20.1）及水（仪器零点校正液）各5.0mL置于25mL比色管中，加入1滴酚酞指示液（18.2.5），用乙酸溶液（18.2.7）缓慢调至无色，加4.0mL磷酸缓冲溶液（18.2.3）和0.3mL氯胺T溶液（18.2.4），摇匀，静置3min，加5.0mL吡啶-吡唑啉酮溶液（18.2.6），摇匀，静置20min，加水至刻度，摇匀。分光光度计于620nm处，用1cm比色池，测定吸光度值后比较。21定性判定当扣除空白的样液吸光度值≥参比溶液的吸光度值时，即铁蓝有检出，反之，铁蓝未检出。22方法的定量限当称样量为10.0g，蒸馏烧瓶移取量为50mL，定容体积为100mL时，铁蓝的定量限为3mg/kg。23美术绿综合判定本方法通过测定茶叶中的铅和铬酸根，判定茶叶中是否含有铬酸铅。当铬酸铅检出时，需要定性测定茶叶中铁蓝，当铁蓝检出时，判定茶叶中含有美术绿。茶叶中的美术绿以铬酸铅的含量表示，根据8.2计算铬酸铅的含量，从而表示茶叶中美术绿的含量。 附　录　AHPLC-ICP/MS法的色谱图A.1标准溶液色谱图（HPLC-ICP/MS法）见图A.1。CrO42-图A1HPLC-ICP/MS测得CrO42-标准溶液色谱图（40μg/L）A.2基质加标色谱图（HPLC-ICP/MS法）见图A.2。CrO42-图A.2HPLC-ICP/MS测得基质加标样品测定液中的CrO42-色谱图（20μg/L） 附录B离子色谱法的色谱图B.1标准溶液色谱图（离子色谱法）见图B.1。CrO42-图B1离子色谱测得CrO42-标准溶液色谱图（10mg/L)B.2基质加标色谱图（离子色谱法）见图B.2。CrO42-图B2离子色谱测得基质加标样品测定液中的CrO42-色谱图（0.2mg/L）本方法负责起草单位：吉林省食品检验所方法的参与验证单位：大连市食品检验所、广西-东盟食品药品安全检验检测中心、海南省食品检验检测中心、辽宁省食品检验检测院、北京市食品质量监督检验三站。主要起草人：石金娥、华蕾、王莹、李滢倩、王庆峰、刘斌。