原癌基因pim3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治疗药物的开.ppt

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1、原癌基因Pim-3在胰腺癌发生中的作用机制以及分子靶向治疗药物的开发复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心复旦大学上海医学院肿瘤学系李影奕Pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制以Pim-3为靶向治疗分子的新型有效的抗肿瘤药物的开发报告内容Pim-3激酶在胰腺癌发生中的作用机制p34p34p34p37p40KinaseDomainPim-1Pim-2Pim-3DeneenB.etal.MolCellBiol2003;23:3897MikkersH.etal.MolCellBiol2004;24:6104Pim-3与恶性转化相关Pim基

2、因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代Pim-3是原癌基因。研究背景Pim-3isaproto-oncogenewithserine/threoninekinaseactivity.FujiiCetal.IntJCancer.2005Mar20;114(2):209-18.Pim-3激酶是否与肝脏以外的其它脏器肿瘤发生有关？我们聚焦在同是内胚层来源的器官，胰腺。NormalTissueCancerTissuesPim-3蛋白在人胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中高表达PCI55PCI35α-Pim-3Actin3643kDaWCLPim-

3、3shRNANonScramblePim-3PCI55Pim-3siRNA干扰Pim-3蛋白表达，导致人胰腺癌细胞株细胞凋亡，从而降低细胞活力ScrambleshRNAPim-3shRNADNAContentNoshRNASubG1AnnexinVPim-3shRNAScrambleshRNAPim-3shRNAScrambleshRNANo-shRNAScrambleshRNAPim3shRNA012345876543210CellviabilityratioTimeafterpassage(days)****Pim-1,P

4、im-2Pim-3?BadSer136＋SurvivalFactorPI3KAKTBad14-3-3SurvivalSer112Pim-1andPim-2CanInactiavtePro-apoptoticMolecule,Bad,byPhosphorylatingItsSerineResiduesApoptosisBadBcl-XL+Bcl-XLPim-3BadPim-3/BadPCI5520mmPim-3和Bad的相互作用a-Pim3HeLaa-Bada-IgGIP:PCI35PCI55PCI552526kDaBadIgG

5、Blot:anti-Pim3Blot:anti-Bad5036Pim-3IgGImmunoprecipitationwithanti-Pim-3Westernblottingwithanti-BadWashingwithStrippingbufferWesternblottingwithanti-Pim-3Pim-3pBad112Pim-3/pBad112PCI35PCI5520mmPim-3和磷酸化Bad在细胞质内共定位ActinBadpBad112pBad136pBad155Pim-32626262643KDa36shRN

6、ANonScramblePim-3PCI55降低Pim-3蛋白表达可以减少Bad112磷酸化小结（1）Pim-3对于难治性胰腺癌来说是一个很好的靶向治疗分子以Pim-3为靶向治疗分子的新型有效的抗肿瘤药物开发胰腺癌是我国十大恶性肿瘤之一〉早期诊断困难〉晚期患者手术治疗5年生存率低于5%，发病率等于死亡率传统的化学治疗存在抗肿瘤能力低，杀伤指数过小，副作用大等缺点分子靶向治疗具有特异性强，效果显著，正常组织损伤小等优点现有的抑制增殖因子受体活性的分子靶向治疗缺乏肿瘤治疗的特异性，而且容易产生耐药性研究背景Pim-3作为药物靶点，

7、特异性更强。Pim-3与Pim-1具有高度的同源性（70%）和类似的生物功能推测Pim-3的立体空间结构低分子化合物-Pim-3激酶复合物立体空间结构从DrugBank和PubChem数据库中筛选了23种类似低分子化合物低分子化合物的筛选选择并合成了对Pim-3有高亲和性的小分子化合物-蔓生百部碱（stemonamide）合成中间体蔓生百部碱是百部属生物碱中的一种，其在中国和日本民间医学中作为镇咳药。合成顺序：T-10>T-6,T-10>T-4>T-5,T-10>T-2>T-3蔓生百部碱合成中间体结构Pim-3Pim-1Pim

8、-2T2,T5体外抑制Pim激酶活性IC50(mmol/L)Pim-3Pim-1Pim-2AKT-1AKT-2T2T5T10AKT1/27892>2000nd9056>2000nd3350>2000nd1934>2000>2000>200031.5872.47345462T-