最新抗菌药物敏感性试教学讲义ppt.ppt

《最新抗菌药物敏感性试教学讲义ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、抗菌药物敏感性试学习目标1、了解抗菌药物敏感性试验的意义、我国抗菌药物敏感性试验应遵循的规则。2、掌握纸片扩散法和E试验原理，牢记试验的操作步骤及各步骤中的注意事项，在日常工作中进行规范化的操作。抗菌药物敏感性试验的意义是什么？我国抗菌药物敏感性试验应遵循哪些规则？一、基本内容（一）药敏试验的意义：1.查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体化疗方案、节省费用。2.进行耐药监测，为医院感染控制部门提供防治依据，为经验用药提供可靠依据。3.利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐药菌株的出现，延长新药使用寿命。4.为新药的研究和评估提供有价值的信息。（二）、药物敏感试验

2、规则目前世界上通用的规则是德国和欧洲标准，而我国主要以临床试验室标准化委员会（CLSI），即美国国家实验室标准委员会(NCCLS)的规则为标准，这个标准主要包括CLSI纸片扩散法（M2）和需氧菌稀释法（M7）。（三）、抗菌药物敏感性试验结果参照标准1.标准的正确使用M100–即新表M100-S17，每年更新1次；包括M2和M7文件，M2–即纸片扩散法(DD)文件M2-A9，M7–即MIC文件M7-A7。M2、M7文件每3年更新一次；使用文件时应注意文件是否已更新，避免使用旧文件造成判断结果失误。2.获得文件的方法如果购买厂家的纸片可向厂家索取标准，每年国际化会议也会颁发此

3、文件的中心内容。（四）、CLSIM-100表内容：CLSIM-100表主要包括版本中的更新要点、各版本抗菌药物分组、M2纸片扩散法用的表、M7MIC用的表、M7MIC用的表及词汇表等内容。1.培养基制备及种类操作流程图注意事项：1.全程无菌操作2.湿度控制3.胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的影响4.培养基用水培养基种类1.Mueller-Hinton琼脂培养基（非苛氧菌）2.HTM培养基：其组成成分如下：M-H琼脂粉；15μɡ/ml牛羟基血红素；PH7.2-7.4；NCCLS不推荐用M-H巧克力培养基作嗜血杆菌药敏试验。（嗜血杆菌）3.GC琼脂.此补充品(1升水中加入

4、1.1gL-胱氨酸，0.03g盐酸鸟嘌呤，3mg盐酸硫胺，13mg对鞍基苯甲酸，0.01g维生素B12，0.1g辅羧酶，0.25gNAD，1.0g腺嘌呤，10gL-谷氨酰胺，100g葡萄糖，和0.2g硝酸铁)是在GC琼脂高压灭菌后加入的.（淋病奈瑟菌）4.5－7%脱纤维羊血的M-H琼脂（链球菌）培养基的制作过程中最重要的是厚度，即厚度4mm是最重要的因素。（如图）2.接种物的制备1).直接菌落悬液法多用，广泛2).生长法少用，局限性3).注意事项：嗜血杆菌、淋球菌配制菌悬液必须采用巧克力培养基上的菌落作直接悬浮法。菌液浓度应严格要求0.5麦氏单位。选取新鲜的纯菌落

5、，配置0.5麦氏单位的菌悬液，：接种物浊度调整好后，最好在15分钟内接种，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，挤出多余的接种菌液。用棉拭子在无菌的稍干燥的M-H琼脂表面划线接种，再重复操作两次，每次将平板转动约60度，保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘。在加含药的纸片之前，可以将培养皿盖半开3-5分钟，但不超过15分钟，促使表面过多的水分被吸收。1.通过CLSI推荐表选择药物，标志性药物不可少，如：FOX-STAPH，CN120-ENTEROCOCCI。纸片顺序可做调整，如：测定E.coli和Klebsiellapneumoniae

6、时CAZ、CTX纸片贴在含酶抑制剂的纸片如AMC旁边，初步提示是否产ESBLs。2.在接种好的琼脂平板上贴加纸片注意要点<1>将事先确定的抗微生物药组合的纸片分贴到接种好菌的琼脂平板表面。每个纸片应与琼脂表面完全接触，并且应均匀分布，使其中心间距不小于24mm。<2>贴完纸片后，应在15分钟内，将平板反转过来，置于35℃孵箱中。注意事项：1.150mm平板所贴纸片不应超过12个，100mm的不应超过5个，嗜血杆菌要求150mm平板贴纸片不应超过9张，100mm平皿贴纸片不应超过4张。2.纸片一但接触了琼脂表面，就不应再挪动位置。3.除嗜血杆菌，淋球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟氏

7、外，平板不应在CO2含量高的空气中孵育，因为其解释结果是根据普通空气中的孵育结果研究出的，而CO2会显著改变某些药物的抑菌圈大小。5、判读平板和解释结果孵育16-18小时后，检查每一块平板，如果平板划线满意，接种物准确无误，抑菌圈应为正圆形，菌落应相互融和生长。则可以开始记录抑菌环大小。如果出现明显的单个菌落，说明接种量太少，必须重复试验。注意：葡萄球菌或肠球菌应在投射光的照射下判读，变形杆菌属会攀延生长，应读大的抑菌环。下图所示为理想的试验结果。6、测量工具游标卡尺与普通直尺图中所示为经常用到的测量工具，注意用直尺测量时应通