最新[医药卫生]抗菌药物教学讲义PPT课件.ppt

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1、[医药卫生]抗菌药物主要内容抗菌药物的敏感性试验（定义、目的、方法）如何报告药敏试验结果什么是抗菌药物的敏感性试验？测定抗菌药物在体外抑制病原微生物生长的效力，称抗菌药物对细菌的抑菌试验，或称细菌对药物的敏感性试验。实验室中常用的几种MIC测定方法2μg/ml1μg/ml0.5μg/ml肉汤(试管)稀释法肉汤微量稀释法琼脂(平板)稀释法几个重要的指标MIC(最低抑菌浓度minimalinhibitoryconcentration)–在体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度•MBC(最低杀菌浓度minimalbactericidalconcentration)–在体外能够使细菌总数减少(

2、杀灭)99.9%以上的最低药物浓度。•MIC50、MIC90–在一批实验中能抑制50%或90%受试菌所需的MIC。•MBC50MBC90–在一批实验中能使50%或90%受试菌的活菌数减少99.9%所需的MBC。•临界浓度（breakpoint）–根据抗菌药物抑制细菌生长所需要的MIC，结合常用剂量时该药所血药浓度，划定细菌对各种抗菌药物敏感或耐药的界限。扩散法(纸片法)原理：将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，因此敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制，根据抑菌圈的大小即可推知该药物的最低抑菌浓度（MIC）。扩散法：K-B操作：•制备0.5

3、MacFarlandStandard（1.5×108CFU/ml）菌液•无菌棉签蘸取菌液，在管壁内将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。•室温干燥或35℃干燥5-15分钟•用纸片分配器或无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面纸片间距20mm纸片离平板内缘15mm。如何制备菌悬液？菌落？至少3个菌落，为什么？可能丢失耐药细菌(携带有耐药质粒的耐药菌株)….如何阅读结果（纸片法）•工具：游标卡尺，尺子•光源：反射光、透射光•阅读：药敏平皿背衬不反光的黑色背景，用肉眼观察。纸片法结果的正确阅读•正确的光源：反射光•不反光的黑色背景•完全抑

4、制的抑菌圈直径，包括纸片的直径•抑菌圈的界限应该是以肉眼观察没有明显的可见细菌生长区域•在抑菌圈边缘微弱生长的、仅能在放大镜下才能观察到的细小菌落应忽略。应注意葡萄球菌、肠球菌的药敏结果阅读•苯唑西林、利奈唑胺和万古霉素对葡萄球菌的抑菌圈•万古霉素对肠球菌的抑菌圈•任何有可见的菌落生长均应视作对上述抗菌药物耐药•需在透射光（Transmittedlight）下阅读，遇不敏感的结果需用稀释法测定MIC确证要使用透射光不要用反射光应注意磺胺类药物的结果阅读培养基内可能有磺胺类药物的拮抗物，如胸腺嘧啶、核苷类物质。允许有轻微生长的薄菌苔忽略20%或更低生长的薄菌苔，测量抑菌圈直径较为明

5、显的细菌生长界限应注意变形杆菌属细菌的药敏结果阅读•变形杆菌属细菌的生长呈迁移性•在某些抗菌药物抑菌环内可见霾样（淡淡生长的云雾状）迁徙生长的变形杆菌属细菌的菌苔•抑菌环内由于变形杆菌属细菌迁徙生长出现的霾样生长可忽略不计•忽略迁移性应注意溶血性细菌的结果阅读•链球菌–B-溶血性链球菌–草绿色链球菌–肺炎链球菌等•应忽略溶血圈，读取生长完全被抑制处应注意产色素细菌的结果阅读•有些细菌会在生长过程中产生色素–铜绿假单胞菌–黄杆菌–沙雷菌•应忽略色素分泌圈，读取生长完全被抑制处抑菌圈内有菌落，怎么办？大肠埃希菌污染有肠球菌菌落再次纯分铜绿假单胞菌有耐药菌落E-试验(E-Test)•原

6、理：基本同扩散法，即浓度呈连续梯度的抗菌药物从塑料纸条中向药敏琼脂中扩散，在试条周围浓度范围内检测菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。•E-test综合了稀释法和扩散法的原理和特点，直接定量测出药物对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）。•药敏平板同K-B法•E-Test条宽5mm，长60mm•抑菌圈-椭圆形•结果-MICEtest试条模板的应用•放试条时，操作要稳妥，试条一旦接触琼脂则勿再移动。•作苛养菌或极敏感菌株药敏时，150mm平皿上只能放置4到6个试条，90mm平皿只放1个试条。•将试条放置平板上的方法有用手指，镊子，Etest加样器或真空笔。•如果试条放到非正常位置，勿移动

7、试条，维持原状判读结果。E-test试验结果阅读忽略溶血，读取生长完全被抑制处：MIC0.032ug/ml杀菌型药物如氨基糖苷类产生“干脆利落”椭圆球MIC0.064ug/ml试条两边产生不同的交界点，读取较高数值侧的MIC。如果两侧差＞1个稀释度，则须重复试验。MIC0.5ug/ml忽略变形杆菌的迁延现象，MIC0.064ug/ml什么时候可以使用E-试验?•临床治疗要求了解某种抗菌药物确切的MIC值以及MIC的范围•当某种抗菌药物对某种细菌的纸片法药敏结果不可靠时