最新镜检技术幻灯片1课件ppt.ppt

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1、镜检技术幻灯片1主讲内容：厚薄血膜的制作与染色。疟原虫计数方法。疟原虫人体内生活史简介。相关注意事项小结。疟疾的实验室诊断1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确诊最可靠。2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测（2）循环抗体的检测3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾的“金标准”仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。★快速诊断试纸条可与镜检疟原虫相互补充。血膜的制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。发

2、热病人血片标本片血膜的制作（涂片操作）涂制厚、薄血膜的位置通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查；标本片发热病人血片标签薄血膜的制作薄血膜用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约②2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜

3、（约2.5cm长）。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部分（或第4—6份）】。熟练工作者的推片姿势厚血膜的制作厚血膜用推片的左下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1

4、/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签的1、2份相邻的第3份中部）]。④厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC为宜。标准的疟疾厚薄血膜位置各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片（1人）门诊发热病人血片（1人）居民普查血片（2人）血膜的制作血膜编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码，以防差错；待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。染液的种类染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏（Wrightstain）和吉氏染液（Giemsastain）

5、。这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。染液的染色原理染色原理是染料于被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一种化学反应。红、白细胞和疟原虫所含蛋白质的氨基酸电离出的阴阳离子与酸碱染料伊红、美蓝有色集团所带的阴阳离子相互结合便被染上不同的颜色。疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟原虫和白细胞核被染成紫红色。红、白细胞和疟原虫的蛋白质均由氨基酸组成，每个氨基酸电离出一个带正电荷的-NH

6、3+和一个带负电荷的-COO-。多色染剂的碱性染料美蓝的有色基团带阳离子，可与细胞中带负电荷的-COO-部分结合，使之成为蓝色。疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质，故被染成蓝色。酸性染料伊红的有色基团带阴离子，可与细胞中带正电荷的-NH2+部分结合，使之呈红色；但美蓝与伊红都不能使疟原虫和白细胞的核着色，可美蓝氧化后产生的天青有媒染作用，于是，在媒染物与染料的共同作用下，疟原虫和白细胞核被染成紫红色。染液的种类及染色原理注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液的pH值7.0-7.2较好。染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使

7、红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。姬氏染液母液配置方法取姬氏粉0.5克置于研钵中，加25ml甘油充分研磨，倒入60或100ml带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至25ml甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55—60℃水浴中或温箱内24h或室温内3—5天，多加摇动，即成原液。姬氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久不变。材料：1、姬氏粉0.5克2、甘油25ml3、甲醇25ml注意事项：1.高纯度试剂。2.

8、所用器皿绝