最新银杏叶提取物防治哮喘小鼠气道重塑机制的研究教学讲义PPT课件.ppt

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1、银杏叶提取物防治哮喘小鼠气道重塑机制的研究1研究背景2研究目的3研究内容4发表文章及致谢研究背景哮喘研究现状哮喘与MMP-9核因子-KappaB(NF-KB)与MMP-9NF-KB与血小板活化因子（PAF）银杏叶提取物与PAFMMP-9和气道重塑MMP-9GFs前体GF活化上皮下成纤维细胞活化胶原沉积基底膜增厚气道重塑哮喘MMP-9与哮喘哮喘持续状态急性重度哮喘中度哮喘未治疗稳定期及轻度哮喘MMP-9持续增加MMP-9大量增加MMP-9有所增加MMP-9未见增加NF-KB和MMP-9NF-KB是一种重要的核转录因子，几乎存在于所有细胞，调节150多种基因的表

2、达，涉及细胞活动的许多领域如：炎症反应、免疫应答、细胞增殖分化、细胞凋亡等研究证明，MMP-9是NF-κB的靶基因。NF-κB是MMPs的上游调节因子，大量研究证实，细胞外基质金属蛋白酶上存在NF-κB的识别位点PAF和NF-KB研究证明PAF是NF-κB的有效激活因子，而且PAF主要在NF-κB激活的早期阶段发挥作用HeonSeoK等人也发现在黑色素瘤细胞中PAF也是通过NF-KB通路来增加抗凋亡因子的表达银杏叶提取物Egb和PAF银杏叶是我国名贵中药银杏的叶，其提取物的有效药用成分主要为总黄酮和银杏内酯，具有多种药理作用Egb的药理作用有很多方面：清除自

3、由基和抗脂质过氧化；改善心脑缺血和外周血液循环；改善血液流变性作用等银杏内酯B是研究得最广泛的天然PAF受体拮抗剂Egb在哮喘防治方面的研究有很多，但涉及气道重塑防治的研究未见报道研究目的PAFNF-KBMMP-9（+）？研究内容1银杏叶提取物对慢性哮喘小鼠表达MMP-9的影响2慢性哮喘小鼠气道重塑机制的探究和Egb的干预作用实验第一部分清洁级BALB/c小鼠鸡卵清蛋白银杏叶提取物RT-PCR试剂盒即用型SABC免疫组化试剂盒材料方法一：建立慢性小鼠哮喘重塑模型40只小鼠按随机数字法正常组哮喘组银杏叶干预组地塞米松干预组激发前1h予生理盐水第0，7，14天致

4、敏，15天起激发6周激发前1h予生理盐水激发前1h予银杏叶提取物注射液激发前1h予地塞米松注射液统计学处理病理组织学观察，HE染色三免疫组化法测MMP-9蛋白表达五半定量RT-PCR测MMP-9mRNA表达四取材二七定量及计算机图像分析六结果气道重塑模型结果对照组行动敏捷，一般情况未见异常。哮喘组经激发后，出现呼吸急促，口唇紫绀，腹部翕动，易激惹，烦躁不安。地塞米松干预组、银杏叶干预组也出现哮喘组情况，但症状明显减轻。HE染色A.对照组小鼠气道无明显增厚、内壁光滑，气道周围无炎性细胞浸润，肺泡壁结构完整B.哮喘组小鼠气道平滑肌层明显增厚，管壁周围大量炎性细胞

5、浸润，肺泡有明显出血C.地塞米松干预组小鼠气道增厚明显减轻，管壁周围少量炎性细胞浸润D.银杏叶干预组气道壁增厚也见减轻，炎性细胞减少ABCD图各组小鼠肺组织石蜡切片HE染色图（×400）小鼠肺组织MMP-9mRNA表达左图为4组小鼠肺组织MMP-9RT-PCR电泳图。泳道1、2、3、4依次为对照组、哮喘组、银杏叶干预组、地塞米松干预组，M为marker。在300bp附近的条带为管家基因GAPDH，在400-500bp之间的条带为MMP-9mRNA。M1234图各组小鼠肺组织MMP-9RT-PCR电泳图300bp-400bp-500bp-各组小鼠肺组织MMP-

6、9RT-PCR吸光度比值哮喘组MMP-9mRNA表达量高于正常对照组(P<0.01)地塞米松干预组表达量明显低于哮喘组(P<0.05)，但仍高于正常组(P<0.01)银杏叶干预组介于哮喘组与地塞米松干预组之间小鼠肺组织MMP-9蛋白表达ABCD图各组小鼠肺组织MMP-9蛋白的表达（×400）对照组MMP-9主要分布于支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞哮喘组除上述细胞外，肺泡上皮细胞、肺间质中各种炎性细胞中也有分布地塞米松组和银杏叶组MMP-9各细胞分布均有所减轻MMP-9免疫组化半定量图像分析结果A哮喘组MMP-9在支气管上皮细胞表达量较对照组明显增强(P<0.0

7、1)B对照组MMP-9在支气管上皮细胞不表达或少量表达D地塞米松干预组MMP-9的表达量较哮喘组明显减少(P<0.05)，但较对照组增多(P<0.01)C银杏叶干预组介于哮喘组与地塞米松干预组之间讨论讨论气道重塑是慢性哮喘的重要病理特征之一，已成为哮喘研究的热点，本试验参照文献成功制备了慢性哮喘小鼠气道重塑模型细胞外基质的降解和沉积失衡气道重塑MMP-9讨论银杏叶是我国名贵的中药材Egb具有广泛的药理作用：抗血小板活化因子、清除自由基、抗炎、抗过敏等，广泛运用于治疗其他疾病如动脉粥样硬化，冠心病，高血脂等目前，Egb治疗哮喘的研究大多与减轻气道炎症，降低气道

8、高反应性，以及抗氧自由基等有关Egb减轻气道重塑、对