最新结核分枝杆菌传统药敏试验方法教学讲义PPT课件.ppt

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1、结核分枝杆菌传统药敏试验方法药敏试验的目的耐药监测-评估治疗方案-选择有效的标准方案病例管理-诊断耐药结核病(耐多药/广泛耐药结核病）-为个体病例(耐多药/广泛耐药结核病）选择有效的方案问题►可靠性:技术重复性/临床反应预测►周转时间►操作可行性及可持续性►成本以检测基因突变为基础的快速药敏试验系统扩增目标区的DNA测序聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术;-探针杂交：反向探针线性杂交方法；Hain分枝杆菌药物抗性plus分子灯塔/信标：GeneXpert系统是一个将样品准备、定量扩增和荧光检集于一身并自动进行核酸检测分析的系统;L

2、AMP(Eiken)核酸环介导等温扩增技术高效液相色谱应用与扩增的DNA的突变检测药敏试验的结果可靠性治疗结果的预测值-药敏试验的耐药标准试验可靠性-试验精确度&可重复性药敏试验的校正获得最相关的临床耐药标准▽可能的敏感株的敏感级别▽在治疗反应变化方面测定敏感性水平▶从未接受过治疗的患者(PS)与至少接受5/6个月治疗的患者(PR)的标本菌株的敏感性进行比较PS=>100菌株;PR=>50菌株CanttiG,etal.BullWHO1969;41:21-43.可能敏感菌株/（可能无耐药性菌株）在不同药物浓度下的抑菌分布Minimal

3、inhibitoryconcentrations(MIC)最小抑菌浓度FrequencyofstrainsClinicallysusceptiblestrains(PS)Breakpoint1SD3SD不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药菌株最低抑菌浓度的分布FrequencyofstrainsMinimalinhibitoryconcentrations(MIC)Breakpoint*Technicalvariation(inoculum/media/drugconcent.)Clinicallysusceptiblestrain

4、s(PS)Clinicallyresistantstrains(PR)不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药菌株最低抑菌浓度的分布FrequencyofstrainsMinimalinhibitoryconcentrations(MIC)PSPR2mcg/mlBreakpoint13.1as“R”75.811.1as“S”可能敏感/可能耐药菌株对利福平的最小抑菌浓度的累积分布（此试验采用L-J培养基用绝对浓度法）85.8不同药物浓度下可能敏感菌株和可能耐药菌株最低抑菌浓度的分布FrequencyofstrainsMinimalinhi

5、bitoryconcentrations(MIC)Breakpoint*InoculumvariationClinicallysusceptiblestrains(PS)Clinicallyresistantstrains(PR)可能敏感和可能耐药的结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星敏感性分析采用L-J培养基Donotquotethisdata!(n=81)(n=111)校正的乙胺丁醇的临界浓度(此试验采用改良罗氏培养基的绝对浓度法)42%50%可能敏感和可能耐药的结核分枝杆菌临床分离株对卡那霉素敏感性分析InL-JMediumIn7

6、H10Medium67%67%抗结核药物的最低抑菌浓度比平均峰值EMBETHOFXCFXINHRMPKMCPMPASSM推荐的临界浓度药物LJ*7H107H11Bactec460MGIT960异烟肼0.20.20.20.10.1利福平40.01.01.02.01.0乙胺丁醇2.05.07.52.55.0链霉素4.02.02.02.01.0吡嗪酰胺NRNRNR100.0100.0卡那霉素30.05.06.04.0阿米卡星40.01.01.0卷曲霉素40.010.010.01.252.5环丙沙星2.02.02.02.01.0氧氟沙星2.

7、02.02.02.02.0莫西沙星0.50.25加替沙星1.0乙硫异酰胺5.010.02.55.0丙硫异烟胺40.01.252.5PAS1.02.08.02.0环丝酰胺40.0NRNRNRNR氨苯硫脲NRNRNRNRNR利奈唑酮1.01.0*ProportionWHO推荐药敏试验的临界浓度,2007抗结核药物药敏试验程序复杂：必须在有质量保证的实验室才能实施2.试验操作危险大：操作只能在拥有好的设施及设备的实验室(BSL-3)进行，而且所有的实验室工作人员都要熟练的掌握每个程序影响药敏试验结果的物理化学环境因素培养基中活动性/精确的

8、药物浓度药粉.试剂效价：剂量/溶解/稀释/存储purityxactivefractionxH2OEMB:99%purity;C10H24N2O2.2HCl(277.2-72.9=204.3);nowater;0.99x0.74x1.0