最新实验一兔血清免疫球蛋白分离与纯化教学讲义ppt.ppt

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1、实验一兔血清免疫球蛋白分离与纯化实验课要求预习不迟到、早退、不旷课、有事请假穿白大褂、注意自我防护不能喧哗，不做与实验无关的事认真完成实验报告值日要求：擦桌子、拖地、擦黑板、倒垃圾、关灯和门窗一、实验目的二、实验原理三、实验仪器及试剂四、实验步骤五、注意事项六、数据处理及计算实验一兔血清免疫球蛋白分离实验原理-盐析不同蛋白质由于所带电荷不同以及水化程度不同，加入不同浓度的中性盐可分阶段从溶液中沉淀出来。蛋白质盐析中最常用的盐是硫酸铵硫酸铵分级沉淀三、实验仪器及试剂1.实验材料：血清（兔免疫血清）。2.试剂：0.01mol/LpH7.4PBS、0.5m

2、ol/LNaOH、0.5mol/LHCl、饱和硫酸按（用前以5mol/LNaOH调至pH7.4）、奈氏试剂。三、实验仪器及试剂3.用具：三角瓶、烧杯、各种吸管、小试管、量筒、布氏漏斗、透析袋（用前用PBS或双蒸水煮沸10min）、饭盒（装碎冰）等。4.仪器：搅拌器、离心机等。5.溶液配制三、实验试剂饱和硫酸铵溶液的配制：称（NH4）2SO4400～425克，以70～80℃之蒸馏水500ml溶解，搅拌20分钟，趁热过滤。冷却后以浓氨水（28%氨溶液）调PH至7.4。配制好的饱和硫酸铵，瓶底应有结晶析出。磷酸盐缓冲液0.2M，PH7.4磷酸盐缓冲盐液（P

3、hosphateBufferedSalinePBS）配制。贮存液：A液：0.2MNaH2PO4：NaH2PO4·2H2O31.2克，加蒸馏水至1000ml；B液：0.2MNa2HPO4：Na2HPO4·12H2O71.7克，加蒸馏水至1000ml；应用液：取A液19ml加B液81ml混合，再以生理盐水作10倍稀释，加入NaCl至终浓度为0.85%，即为PBS。柰氏试剂HgI11.5g，KI8.0g，加双蒸水至50ml；搅拌溶解后过滤，滤液中再加入浓度为20%的溶液NaOH50ml。四、实验步骤1兔免疫血清的制备2硫酸铵分级沉淀（1）取制备好的血清20

4、ml，逐滴加入（NH4）2SO4饱和溶液20ml，使成50%（NH4）2SO4溶液，边加边搅拌，充分混合后，静置10min。（2）3000r/min离心10min，弃去上清。（3）用6ml磷酸盐缓冲液溶解沉淀，再加（NH4）2SO4饱和溶液3ml，使成33%（NH4）2SO4溶液，充分混合，静置10min。（4）3000r/min离心10min，弃上清。（5）为进一步纯化，可重复步骤32~3次。3透析去盐（6）用5mlPBS溶解沉淀，装入透析袋。（7）透析除盐，中间换液数次，至奈氏试剂测透析外液无黄色。五、数据处理及计算蛋白含量（mg/mL）＝（1.

5、45×OD280nm－0.74×OD260nm）×样品稀释度注：式中1.45与0.74为常数，nm为波长。蛋白质及其定量鉴定：取样品少许作适量稀释，以紫外分光光度计测量蛋白含量260、280nm处读数实验报告的要求题目、原理、主要试剂与器材、步骤、结果、注意事项（心得体会）班级、姓名、学号由学习委员统一收齐，按学号从小到大顺序放好自己写、书写整齐订成一本或每次分开渗流力学典型例题解析油藏工程系中国石油大学（华东）[例题1]刚性水压驱动油藏，油层厚12m，渗透率0.5，地下原油粘度9mPa.s，原油体积系数1.2，地面原油密度0.85g/cm3，原始地

6、层压力10.5MPa，井距500m，某井折算半径8cm，该井以50t/d生产，求井底流压？解：单井供油半径：单井地下产液：（cm3/s）（Mpa）（m）井底流压:[例题2]均质等厚圆形油藏中心一口井，在刚性水压驱动方式下生产。油藏半径150m，油层厚10m，渗透率为0.5，孔隙度0.3，地下原油粘度9mPa.s，原油体积系数1.2，地面原油密度0.85g/cm3，油藏边缘压力11MPa，油井折算半径8cm，井底压力为8MPa，求：1）该井产量为多少t/d？2）油藏边缘的原油流入油井需要多少天？(cm3/s)(t/d)(天)（10-1MPa）（10-1

7、MPa）（10-1MPa）所以A井压降[例题4]均质油藏中一维两相非活塞式水驱油，忽略毛管力、重力及弹性作用。已知Swc＝0.3，Swf＝0.5，fw（Swf）＝0.8。请计算：（1）油水前缘到达油藏中央部位时的采出程度；（2）若累积注入孔隙体积倍数Qi为1时，出口端饱和度Swe＝0.6，fw（Swe）＝0.95，计算此时油藏的采出程度。（1）由：见水时采出程度：油水前缘到达油藏中央部位时：R＝17.9％。（2）油井见水后：[例题5]非活塞水驱油过程中，排液道以Q=5000cm3/s恒定生产，已知原始含油边缘位置为x0，水驱油10天时，水驱油前缘位置

8、x1=70m，20天时，水驱油前缘又移动了30m到达x2，又知地层束缚水饱和度0.35，孔隙度0.3，供给长