临床第5次实验-mqf.ppt

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1、第五次实验实验目的1、认识支原体集落、螺旋体形态2、了解性病的防治方法3、观察真菌形态、培养特性1、检查牙垢中螺旋体（1份/人）2、真菌检查法（1份/人）3、观察梅毒螺旋体形态（示教）4、观察支原体集落（示教）5、HIV（录象）实验内容一、检查牙垢中螺旋体螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状，多数比细菌大，介于细菌与原虫之间，无鞭毛，但有轴丝（壁与膜之间），运动活泼的G-原核细胞型微生物，广泛分布于自然界与动物体，种类多，多为非致病性，仅少数对人致病，对人致病的有钩端螺旋体、回归热螺旋体和梅毒螺旋体等。正常人口腔牙龈部寄居有奋森氏螺旋体

2、，并与梭形杆菌共存，当机体抵抗力下降时（如病后），这两种菌大量繁殖，梭形杆菌协同奋森氏螺旋体可引起奋森咽峡炎、奋森氏口炎、牙龈炎和口腔坏疽等。材料牙签、生理盐水、玻片染液结晶紫、碘液、95%酒精、稀释石碳酸复红方法1．玻片一张，放生理盐水1-2环，用牙签取牙垢少许与生理盐水混合制成涂片2．待涂片干后火焰固定,革兰氏染色,镜检牙垢螺旋体检查涂片制备标本涂片---干燥---固定---结晶紫初染1分钟---水洗---碘液媒染1分钟---水洗---95%酒精脱色---水洗---稀释石碳酸复红染液复染30秒钟---水洗---自干或烘干、印干---

3、镜检（油镜）二、真菌检查法真菌（fungux）是一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。真菌的形态有单细胞和多细胞两大类，单细胞真菌呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。多细胞真菌大多长出菌丝与孢子，各种多细胞真菌的菌丝与孢子形态不同，菌落特征也不同，是鉴别真菌的重要标志。真菌基本形态单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。烟曲霉白假丝酵母真菌的菌落白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝多细胞真菌：观察气生菌丝，

4、营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。白假丝酵母(血平板)黄曲霉原理直接涂片检查用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。材料标本:脚皮等试剂:10％KOH其他:玻片、镊子、酒精灯等方法KOH透明法（1）取脚皮少于玻片上，加二滴10%KOH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。（2）将已制备的标本片，先用低

5、倍镜检查，然后再用高倍镜证实注意：盖玻片倾斜45度慢慢盖上，不能产生气泡！标本片制备真菌检查镜下观报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝”各种操作步骤牙垢螺旋体检查:标本涂片---干燥---固定---结晶紫初染1分钟---水洗---碘液媒染1分钟---水洗---95%酒精脱色(淡紫色到无色)---水洗---稀释石碳酸复红染液复染30秒钟---水洗---自干或烘干、印干---镜检（油镜）真菌检查法:（1）取脚皮少许于玻片上，加二滴10%KoH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使

6、成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。（2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实五、观察梅毒螺旋体形态梅毒螺旋体：Fontana镀银染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有紧密螺旋。六、支原体支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用Giemsa染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含10～20%马血清和酵母浸液的培养基上生长。最

7、适的pH7.8～8.0.生长缓慢,在固体培养基上培养2～3天后才出现菌落。典型的菌落呈“荷包蛋”状，中心厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状观察支原体集落