最新EB 病毒潜伏膜蛋白1 在慢性萎缩性胃炎伴肠化黏膜中的表达及意义教学讲义PPT课件.ppt

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1、EB病毒潜伏膜蛋白1在慢性萎缩性胃炎伴肠化黏膜中的表达及意义主要内容研究背景实验过程实验结果讨论结论攻读学位间取得的成果致谢研究背景慢性萎缩性胃炎是我国比较常见的胃粘膜病变，常伴不同程度的肠上皮化生，是一种重要的胃癌前疾病。随着对胃癌研究的不断深入，生物因素在胃癌发生、发展过程中的作用越来越受到重视，而作为生物致癌因素的EB病毒近年来已成为胃癌发病方面的研究热点，在过去十年里，EB病毒在胃癌发病过程中的作用不断被发现新的证据。144例胃粘膜标本全部取自2012年6月—2013年6月期间来我院检查和治疗的病人45例CSG、63例CAG伴肠化黏膜标本均取自来我院行胃镜检查

2、的病人36例胃癌标本均取自我院外科手术病人研究对象研究对象入选标准慢性浅表性胃炎纳入标准:①胃镜下表现:胃窦黏膜红白相间，以红为主，黏膜较光滑。②取活检病理学诊断：慢性浅表性胃炎。研究对象CAG伴肠化纳入标准：①胃镜下表现：胃窦粘膜粗糙，粘膜红白相间，以白为主，粘膜变薄，粘膜下血管网清晰可见。②病理学诊断：CAG伴肠化。研究对象3.胃癌纳入标准：①术前胃镜检查，取活检行病理学诊断示胃腺癌。②术后切除病灶送检病理学诊断结果为胃腺癌。研究对象CSG及CAG伴肠化黏膜标本采集：胃镜直视下用活检钳于胃窦处取活检组织2-3块胃癌组织采集：于我院病理科取胃癌患者送检胃癌组织2-3

3、块标本取完立即甲醛固定，12h内石蜡包埋。免疫组织化学SP试剂盒(上海金杉生物科技有限公司)LMP-1单克隆抗体(即用型)（上海金杉生物科技有限公司）脱石蜡剂：二甲苯（dimethylbenzene）复染剂：苏木素(haematoxylin)磷酸盐缓冲液（PBS）无水乙醇（absolutealcohol）双氧水(aquaehydrogeniidioxidi)以及载玻片等。试剂及来源石蜡包埋机（ThermoELECTRONCORPORATIONSHANDONHISTOCENTRE3）冷冻工作台（孝感泰康达医疗设备有限公司制造）化蜡机（SHANDONPARATRIMMER

4、）切片机(LEICARM2135GERMANY)烤片机（LEICAHI1220GERMANY）恒温培养箱（山东潍坊精鹰医疗器械有限公司）BX51全自动显微照相系统（日本OLYMPUS公司）显微镜（V-TV1X-2日本OLYMPUS公司）日本OLYMPUSEVIS240系列电子内镜Pentax公司3500系列电子内镜Wilson-cook胃镜活检钳主要设备及来源石蜡切片梯度脱蜡水化胰酶抗原修复过氧化氢溶液阻断内源性过氧化物酶的活性滴加一抗、二抗DAB显色苏木素复染二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观PBS溶液代替一抗作为阴性对照，结果为阴性，无显色反应实验结果：阳性反应

5、为棕黄色免疫组化主要步骤以细胞染色程度及范围做以下评分:①着色强度：无着色为0，浅黄色1，棕黄色2，棕褐色3。②阳性细胞面积:无着色为0，着色面积<1/3为1，1/3~2/3为2，>2/3为3，两项结果相加≥3为阳性。结果判定采用SPSS19.0统计软件包进行统计学分析，用所得数据建立数据库，应用χ2检验进行统计学分析，P<0.05有统计学意义。统计学处理SP免疫组化染色EBV-LMP1在CSG及胃癌组织中的表达A.CSG中EBV-LMP1阴性表达（X100)B.胃Ca中EBV-LMP1阴性表达（X100）结果AB结果EBV-LMP1在CAG伴肠化黏膜中的表达EBV-

6、LMP1在CAG伴肠化黏膜阳性表达（X400）CD..讨论CAG和肠上皮化生是比较常见的胃癌前状态。国内外学者普遍认为胃癌的发生经历CSG→CAG→肠上皮化生→不典型型增生→胃癌几个阶段，其中向胃癌转变过程的关键环节是肠上皮化生。因此在CAG伴肠化阶段检测相关指标，及早采取措施，对早期胃癌的预防、发现、治疗及其预后具有重要意义。讨论随着对EB病毒研究的不断深入，近年来发现其与胃癌的发生也有密切关系。其导致胃癌发生的主要致瘤蛋白是EB病毒LMP1。EB病毒LMP1是一个跨膜蛋白，由386个氨基酸残基组成，是EB病毒编码的主要致瘤蛋白，现有研究已证明其具有促进细胞转化和永

7、生化、介导细胞增殖、抑制细胞分化和凋亡、促进肿瘤转移等多种生物学活性。讨论EB病毒LMP1在胃癌发病过程中的重要作用已被证实，但在由CSG向胃癌发展的过程中LMP1主要在哪一期起作用，目前尚不清楚，在本研究中，EB病毒LMP1在CAG伴肠化黏膜中的表达远高于CSG及胃癌组织，而肠化又是向胃癌发展过程中的关键环节，据此推测，EB病毒LMP1主要在胃癌形成早期起作用，胃癌形成以后可能会关闭LMP1基因表达，通过降低免疫原性去促进肿瘤生长，而不是依赖LMP1介导的细胞增殖效应。讨论尽管目前在对EBV与胃癌关系的研究中取得了较大进展，但EBV是如何进入胃黏膜