最新6实验六金黄色葡萄球菌的检验[1]教学讲义PPT.ppt

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1、6实验六金黄色葡萄球菌的检验[1]Contents革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；1无芽孢，不运动2兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好3可在15%氯化钠和40%胆汁中生长4生物学特性---菌体形态及培养特征2广东科贸职业学院3广东科贸职业学院致病性金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；

2、7广东科贸职业学院c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。8广东科贸职业学院致病性金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，

3、甚至败血症、脓毒症等全身感染。9广东科贸职业学院致病性葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素。10广东科贸职业学院1、目的要求了解食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测方法观察金黄色葡萄球菌的革兰氏染色镜检形态以及在血平板和Baird-Parker琼脂平板上生长的菌落特征观察金黄色葡萄

4、球菌产生血浆凝固酶现象11广东科贸职业学院2、基本原理金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。在血平板上生长可金黄色色素使菌落呈现金黄色；由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾使菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊带，而在其外层因产生蛋白水解酶有一透明带。金黄色葡萄球菌Ⅰ型溶血金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态12广东科贸职业学院在肉汤中培养时，菌体可生成血浆凝固酶并释放于培养基中，此酶类似凝血酶原物质，不直接作用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活

5、剂激活后，变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使血浆中的液态纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆因而成凝固状态13广东科贸职业学院葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数

6、致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。14广东科贸职业学院肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。15广东科贸职业学院实验材料仪器材料：显微镜、恒温箱、无菌吸管、无菌试管、 无菌平皿、 载玻片、L型涂布棒、酒精灯、接种环等培养基及试剂：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板

7、、Baird-parker培养基、无菌盐水、BHI肉汤、兔血浆、革兰氏染色液16广东科贸职业学院B—P平板主要成分及作用：氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长丙酮酸钠:促进葡萄球菌生长亚碲酸钾:抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐呈黑色卵黄:含蛋白质、卵磷、脂肪17广东科贸职业学院检验程序检验处理：取25g固体样品或吸取25ml液体样品，加入225ml灭菌生理盐水，固体制成混浊液吸取5ml上述混悬液，接种于50ml7.5％氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50ml培养基内，置36℃±1℃培养24h转

8、种血平板和B-P平板，置36℃±1℃培养24h，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落时行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验：取新鲜兔血浆，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性。同时以已知阳性金黄色葡萄球菌株作为对照。18广东科贸职业学院取25ml样品，接种于225ml7.5