实验七 食品中金黄色葡萄球菌的检验

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1、实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验一、实验目的要求1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。二、原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素

2、，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个制生理盐水3、250ml三角瓶3个制培养基等4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验5、

3、1ml移液管2支6、10ml移液管2支7、直径为90mm平皿12套制血平板B-P平板8、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶1.普通营养琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶2.B—P培养基95m

4、l/瓶1瓶250ml三角瓶3.兔血液5ml四、实验内容（一）、增菌培养法样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告第一天样品处理和增菌培养（一）、样品处理固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1:10样品匀液。　　液体食品:：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇制成1:10样品匀液。（二）、增菌培

5、养接种操作：吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中。37°C培养24小时。培养：放于36±1℃培养24h。培养结果：在NaCl肉汤中呈混浊生长，胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长。第二天接种选择性平板进行分离培养（一）、接种选择性平板取增菌液1环，划线接种于血平板或B－P平板。（二）、培养放于36±1℃培养24h。第三天观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试验（一）、观察分离结果结果：金黄色葡萄球菌，在血平板上呈：金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈；在Ba

6、ird-Parker平板上：菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。（二）、革兰氏染色、镜检操作：革兰氏染色→镜检结果：金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞，直径0.5-1μm。（三）、结果报告：综合形态特征，血平板情况以及血浆凝固酶试验结果，判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。五、思考题1、金黄色葡萄球菌在血平板或B－P平板上的菌落特征如何？为什么？2、食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在？为什么？3、鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标

7、是什么？