最新4.1生物成分的分离与测定技术-课件(苏教版选修1)ppt课件.ppt

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1、4.1生物成分的分离与测定技术-课件(苏教版选修1)第一节　生物成分的分离与测定技术学习导航1.尝试蛋白质的提取和分离。(重点)2．理解蛋白质分离与纯化的原理。(重难点)3．研究从生物材料中提取某些特定成分。(重点)4．尝试测定生物材料中某些化学物质的含量。(难点)c．泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷_______，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。越多1．(1)常用吸水涨破的方法释放哺乳动物成熟的红细胞中的蛋白质。(√)(2)通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质。(×)(3)电泳是带电颗粒在电场作用下向着与其电性相同的电极移动的现

2、象。(×)判一判二、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的操作1.原理血清蛋白包含一组蛋白质，其大小、形状、所带净电荷各不相同，在电场作用下会发生__________。2.操作流程配制试剂→__________→浸泡薄膜→细心点样→__________→实施电泳→_________→漂洗→脱色。电泳架滤纸桥平悬薄膜染色3.实验结果分析呈现5条蛋白质色素带，从点样处一侧开始，依次是：γ-球蛋白、___________蛋白、α2-球蛋白、α1-球蛋白和__________。β-球清蛋白人们常说的血清蛋白是一种蛋白质吗？说说你了解的情况。提示：不是一种蛋白质，而是包含多种蛋白质：

3、清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。想一想三、从生物材料中提取某些特定成分芳香油特点：具有__________，能与水蒸气一起蒸发，易溶于___________，如石油醚、乙醚或________等。橘皮芳香油的特点：橘皮芳香油存在于_______________中，具有一定的________，其沸点________水的沸点。植物芳香油提取方法：蒸馏、________等。挥发性有机溶剂酒精果皮的油细胞挥发性低于萃取2．(1)水蒸气蒸馏法的基本原理是植物芳香油易溶于水。(×)(2)蒸馏装置中进水口在上方，出水口在下方。(×)(3)橘皮油可以通

4、过机械加压、压榨出果皮中的芳香油进行提取。(√)判一判要点突破•讲练互动要点一电泳法、影响电泳泳动速度的因素、注意事项及容易产生的几种现象1.电泳法：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。支持物电泳是目前纯化蛋白质的一种较为普遍的方法。支持物可以是滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。采用醋酸纤维薄膜作为支持物具有方法简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少、没有吸附、点样后区带界限清晰等优点，广泛应用于科学实验、临床化验和生化产品的分析(血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白等的分离与鉴定)等方面。几点说明：(1)膜的预处理：必须于电泳前将薄膜浸泡于

5、缓冲液中，浸透后，取出薄膜并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。(2)加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白的常规电泳分析，每厘米加样线不超过2～3μL，相当于60～80μg的蛋白质。(3)电泳：可在室温下进行。电压为25V/cm，电流为0.4～0.8mA/cm。(4)染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，血浆蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。(5)脱色与透明：对水溶性染料应用最普遍的脱色剂是5%醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸∶无水乙醇＝3∶7的透明

6、液中。特别提醒第一步中缓冲液要用容量瓶准确配制，试剂要多配一些备用。第二步中要驱除气泡，贴紧贴实，避免影响电泳速度和分离效果。第三、四步中作有记号的醋酸纤维薄膜光泽面朝下。第七步中染色时间要适中(5～10min)，不宜过长或过短。第八步中漂洗要彻底，防止遮盖蛋白质色带颜色。2.响电泳泳动速度的因素影响电泳泳动速度的因素很多，其中主要因素有带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外，还有电场强度、溶液的pH等因素。3.注意事项(1)保持醋酸纤维薄膜的清洁，避免用手直接接触薄膜。(2)点样要适量，2次左右即可，盖玻片的边缘应避免出现明显液滴，点样要尽

7、量在一条直线上。(3)电泳时间不低于1h。(4)点样处不要搭在滤纸上，以免血清渗入滤纸。(5)醋酸纤维薄膜应绷直，避免电泳槽隔离板的干扰。(6)不可同时接触正负极，防止触电。4.容易产生的几种现象(1)电泳图谱不齐：点样时血清滴加不匀。(2)电泳图谱出现条痕：点样后薄膜过干，或由于电泳槽密闭性不良，或电流过大，温度升高，薄膜水分蒸发干燥造成的。(3)分离不良：样品滴加过多。(4)区带拖尾：缓冲液离子强度小于0.05。(5)区带过于紧密：缓冲液离子强度大于0.075。(6)染色后清蛋白中间色浅：染色时间不足，或清蛋白含量过高，此时可减少检样用量或延长染色时间。(7

8、)球蛋白向反方向移动：系