最新11DNA重组的技术基本工具教学讲义ppt课件.ppt

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1、11DNA重组的技术基本工具能发光的水母不能发光的热带斑马鱼请您欣赏能否让热带鱼也能发光?设想能发荧光的热带斑马鱼普通热带斑马鱼是不发荧光的RNADNA蛋白质转录翻译复制培育转基因大肠杆菌的关键步骤1.ONE胰岛素基因从人体细胞内提取出来2.TWO胰岛素基因与运载体DNA连接3.THREE胰岛素基因导入受体(大肠杆菌)细胞基因的“分子手术刀”基因的“分子缝合针”基因的“分子运输车”一、基因工程概念基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状（目的）。原理：操作水平：结

2、果：目的基因供体细胞受体细胞基因重组DNA分子水平定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。获得新性状识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。约4000种。(1)来源：(2)种类：(3)作用：(4)结果：形成两种末端1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶黏性末端平末端限制酶的种类与命名：迄今已从近300种微生物中分离出约4000种限制酶。EcoRⅠSmaⅠ粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesen

3、s）大肠杆菌（EscherichiacoliR）练习：流感嗜血杆菌的d菌株(Haemophilusinfluenzaed)中先后分离到3种限制酶，则分别命名为:HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ限制酶的作用特点：①不同限制酶的识别与切割位点不同，体现了酶的专一性；②一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子，断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（a）特定的核苷酸序列限制酶所识别的序列，大多由6个核苷酸组成，少数由4、5或8个核苷酸组成，无论哪种序列，都可以找到一条中心轴线，中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称、重复排列的，即序列表现为中心对称。只能在特定位点切割

4、。黏性末端和平末端课本P7：思考与探究1CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG练习使用EcoRI剪切目的基因GGCATCTTAAAATTCCGTAG目的基因黏性末端CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTDNA连接酶GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG用同种限制酶切割2.“分子缝合针”——DNA连接酶磷酸二酯键DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？？阅读思考：DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链双链单链连接

5、部位在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键运载体的作用有哪些？作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。作用二：利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？3.“分子运输车”——运载体常用的运载体主要有三类：1）细菌细胞质的质粒2）某些动植物病毒3）λ噬菌体的衍生物质粒是基因工程最常用的运载体。假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？如果载体对受体

6、细胞有害将怎样？基因进入受体细胞的载体作为载体的必要条件能自我复制有切割位点能与目的基因结合能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；有遗传标记基因对受体细胞无害比较容易得到常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别（1）要将目的基因与运载体连接起来，在基因操作中应选用A、只需DNA连接酶B、同一种限制酶和DNA连接酶C、只需限制酶D、不同的限制酶和DNA连接酶练习（2）下列各项中，说明目的基因完成了表达的是A、棉珠中含有杀虫蛋白基因B、大肠杆菌中具有胰岛素基因C、酵母菌中产生了干扰素D、抗病毒基因导入土豆细胞中（3）不属

7、于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNA（4）有关基因工程的叙述中，错误的是A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶呼吸科多媒体示教体例感冒8/12/2021中医内科学『概述』·（一）定义感冒，俗称伤风，是因感受风邪或时行病毒，引起肺卫功能失调而出现鼻