最新0302基因抑制对细胞生长和增殖的影响-药学医学精品资料.ppt

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1、最新0302基因抑制对细胞生长和增殖的影响-药学医学精品资料实验方法Trizol提取MCF-7细胞总RNA反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定细胞转染及稳定表达细胞株的筛选细胞生长曲线实验血清依赖性实验单细胞克隆形成实验软琼脂集落形成实验胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析Westernblot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达反义RNA反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子,也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA

2、特异性的互补结合,即抑制了该mRNA的翻译。近年来通过人工合成反义RNA的基因,并将其导入细胞内转录成反义RNA,即能抑制某特定基因的表达,阻断该基因的功能,有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。生长曲线的测定转染细胞的血清依赖性实验单细胞克隆形成率的比较1:MCF-as-POLD12:MCF-73:MCF-pXJ41软琼脂集落形成比较1:MCF-as-POLD12:MCF-73:MCF-pXJ41TdR双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化Con145G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA66.822.

3、910.30.299.70.15.790.34.04.242.453.4B59.831.78.52.893.93.31.895.62.53.083.013.96101112G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA8.517.574.559.57.033.484.04.811.283.17.79.1B11.665.223.35.722.971.433.113.953.140.013.546.613151820G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA88.05.46.689.58.02.541.351.67.126.

4、462.111.5B70.110.019.977.912.39.882.59.97.770.824.64.622242628G1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MG1SG2/MA16.475.08.613.464.622.052.517.130.458.015.526.5B27.764.97.320.074.45.719.160.720.221.652.725.7Westernblot检测转染细胞中周期相关基因的表达123A:CyclinEB:CDK2C:CyclinD1D:CDK4E:α－Tublin1:MCF-as-POLD12:MCF-7

5、3:MCF-pXJ41ABCDE朗读课文读出节奏天净沙·秋思（马致远）枯藤老树昏鸦，小桥流水人家，古道西风瘦马，夕阳西下，断肠人在天涯。马致远是元代著名的杂剧家。一生写了120多首散曲,其中《秋思》堪称“叹世”之作中的代表。马致远被人称为“元曲四大家”之一，更被时人美誉为“曲状元”。天净沙秋思元曲：我国古代诗歌的发展,在不同的历史时期有不同的体式,如唐诗、宋词、元曲。元曲是继唐诗宋词后兴起的一种艺术形式,是一种新的诗体，包括杂剧和散曲两部分。“天净沙”是曲牌名，“秋思”是题目。天净沙秋思品读诗歌完成练习1、用自己的话描述这首诗歌的

6、内容。2、这首诗歌写了哪些景物？3、这些景物渲染了怎样的氛围？整体把握诗意枯藤缠绕着老树，树枝上栖息着黄昏时归巢的乌鸦，小桥下，流水潺潺，旁边有几户人家，在古老荒凉的道路上，秋风萧瑟，一匹疲惫的瘦马驮着我蹒跚前行。夕阳向西缓缓落下，悲伤断肠的人还漂泊在天涯。2、这篇文章有哪些景物？枯藤、老树、昏鸦、小桥、流水、人家、古道、西风、瘦马3、这些景物渲染了怎样的氛围？萧瑟凄凉的景象，呈现出凄清孤独的氛围。背诵诗歌