基因工程第一讲.ppt

《基因工程第一讲.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、基因工程第一讲科目：高三生物讲课：徐少冲1概念2分析基因工程的概念基因工程的别名操作环境原理基本过程优势目的DNA重组技术或基因拼接技术生物体外基因重组人类需要的生物类型和生物产品定向改造性状、打破物种界限剪切→拼接→导入→检测表达“分子手术刀”--“分子缝合针”--“分子运输车”--限制性核酸内切酶DNA连接酶载体考点1DNA重组技术的基本工具识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶化学本质：蛋白质。1、来源：3、作用：4、结果：形成两种末端黏性末端平末端可用于目的基因和载体的切割2、特性：限

2、制酶是一类酶，而不是一种酶。一、限制酶——“分子手术刀”AT磷酸二酯键1234512345黏性末端黏性末端EcoRI限制酶的切割被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。平末端平末端SmaI限制酶的切割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。种类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源_________T4噬菌体特点缝合黏性末端缝合_____末端和___末端作用缝合双链DNA片段，恢复两个核苷酸之间的___________大肠杆菌黏性平磷酸二酯键二、DNA连接酶——“分子缝

3、合针”1、作用？2、类型1、种类：2、作用部位：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键二、DNA连接酶——“分子缝合针”（黏性末端）（黏性末端和平末端）两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来DNA连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？AATTGCAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质化学本质不同点模板作用对象作用结果用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质不需要需要形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制DNA连接酶

4、与DNA聚合酶的比较在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯键三、载体——“分子运输车”1、载体的作用将转移到受体细胞中去。目的基因2、常用的载体质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒3、作为载体必须具备的条件①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制；②有一个至多个限制酶的切割位点,以便于与外源基因连接；③有特殊的遗传标记基因,供重组DNA的检测和鉴定有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。有切割位点能复制并带着插入的目的基因一起复制质粒——裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。最常用运载体——质粒

5、1．确定切割某种目的基因的限制酶的种类根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类：①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。2．载体上标记基因的作用载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以

6、在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，原理如下图所示：1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定考点2基因工程的基本操作程序（分四个步骤）1、目的基因主要是______________________编码蛋白质的结构基因2、获取目的基因的常用方法：（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成一、目的基因的获取（一）从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库基因组文库部分基因文库（cDNA文库）提取某

7、种生物的全部DNA用适当的限制酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库1.基因文库的构建方法（1）直接分离法(鸟枪法)某种生物的单链mRNA单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶（2）反转录法2.基因组文库和部分基因文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子基因中内含子基因多少物种间基因交流小大无有无有某