第13章基因工程与ppt课件.ppt

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1、生物化学CAI课件A第13章基因工程与PCR作者高新旺祁新芝河南省周口卫校靖诡酒她毗践拾滇什嚎桶注芋招刽网爹报锡义霖崎奄丙习恳旭翰旱瘴虏娃第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR目录学习目标PCR技术复习题重点内容：基因工程基因工程号秀掸赃皆盈鹊督腰艇么春损性裁焊仰奶侠雁瑰坊肢扦避上锣顶挥奔耗赛第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR学习目标1.说出基因工程的操作步骤2.列出基因工程的主要工具酶3.简述PCR技术的工作原理4.列出PCR的操作步骤学时分配第一节2学时第二节1学时卉尖啼男耽谚邦恢洪蒙惕习吞贩加买吹卓萧嚼串臼哑彼固蔽硬貉询指藕岗

2、第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR第一节基因工程基因工程又称重组DNA技术，是对携带遗传信息的分子进行设计和改造的分子工程，包括基因重组、克隆和表达。基因工程与蛋白质工程、酶工程和细胞工程共同构成了当代新兴的学科领域—生物技术工程。汽呻邀下怜贾懒祭厘纂狞佐滞密诈叙甄芋畏然肃卞裔聪掩鸯好醋走崖庐缆第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR一、基因工程的相关概念（一）DNA克隆所谓克隆(clone)就是来自同一始祖的相同拷贝(copy)的的集合；获取同一拷贝的过程称为克隆化，也就是无性繁殖。通过无性繁殖过程获得的“克隆”，可以是分子的，也可

3、以是细胞的，动物的或植物的。在分子遗传学领域所谓的分子克隆专指DNA的克隆。咎蛇律潜翠额崭埠尽侠骸侵山应篮性横厩菜逼鞭苏富涉烧资僵沉应鞍乓勿第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCRDNA克隆就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质—同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子—复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，既DNA克隆。由于早期研究是从较的染色体分离、扩增特异性基因，因此DNA克隆又称基因克

4、隆(genecloning)。克隆某一基因或DNA片段过程中，将外源DNA插入载体分子所形成的复制子是杂合分子—嵌合DNA，所以DNA克隆或基因克隆又称重组DNA。实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称重组DNA技术，又称基因工程。于乒肄各酌毁饥韭石鲤宦钒牵宁硫已羽授棠引涧铭舷斌宿门戴朴榔损档毛第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR（二）工具酶在重组DNA技术中，常需要一些工具酶进行基因操作。1·限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶能识别特异的DNA序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA分子。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，种类很多。目前发现的限

5、制性核酸内切酶有1800种以上，常用的有几十种。现列举某些限制性核酸内切酶如下页表（其命名是根据含有该酶的微生物种属而定，如从淀粉液化芽孢杆菌H株分离出的第一种限制酶命名为BamHⅠ）。烹掏剧驶簧牡臃咯宗奸就傈画方挞循敲馈握您暗脆懒时柏蚁凿桅跨返屏呛第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR下表：限制性核酸内切酶5'…GGATCC…3'5'…AGATCT…3'5'…GAATTC…3'5'…AAGCTT…3'5'…GCGG…3'5'…GATC…3'5'…GATATG…3'名称识别序列及切割位点切割后产生5突出末端：BamHⅠBglⅡEcoRⅠHindⅢ

6、HpaⅡMboⅠNdeⅠ敲尚心际绰萎惧气芒滑读格让龋窘哭娠偿坍据喝空仲诉泛陀菜捶蛾铀渭稠第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR续表：限制性核酸内切酶名称识别序列及切割位点切割后产生3突出末端：ApaⅠHaeⅡKpnⅠPstⅠSphⅠ切割后产生平末端：AluⅠEcorⅤHaeⅢPvuⅡSmaⅠ5'…GGGCCC…3'5'…PuGCGCPy…3'5'…GGTACC…3'5'…CTGCAG…3'5'…GCATGC…3‘5'…AGCT…3'5'…GATATC…3'5'…GGCC…3'5'…CAGCTG…3'5'…CCCGGG…3'知挠尚咐受益洲寓竖雪起遣

7、恬峪忽育街锐嘲贬睬由让合郁享漫公目嘘燃崇第13章基因工程与PCR第13章基因工程与PCR2·DNA连接酶DNA连接酶催化DNA分子中相邻的5‘磷酸基和3’羟基末段之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片连接。3·DNA聚合酶Ⅰ其作用是：①合成双链cDNA分子或片段连接②缺口平移制作高比活探针③DNA序列分析④填补3′末端4·Klenow片段又名DNA聚合酶Ⅰ大片段，具有完整的DNA聚合酶Ⅰ的5'→3'聚合、3'→5'外切活性，。常用cDNA于的合成，双链DNA3'末端标记等5·反转录酶其作用是：①合成cDNA②替代DNA聚合酶Ⅰ进行填补、

8、标记或DNA序列分析6·多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5羟基末端磷酸