第一讲基因工程

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1、第一讲双基落实——系统化•问题化I基础知识•系统化］知识点一基因工程的基本工具识别待定的核甘酸序列并切开转定部位的两个核苗酸之间的磷酸二歸键/團迴SK壓^产工黏性末端或、卜末端DNA连接酶在曲个核苛酸之间形成磷酸二弗键以连接两个DNA片段^F：-coUDNA连接稱:连接黏件末端^^t4dna连接酶：既能连接黏性末瑙也能连接平末瑙找体园空.x唆菌体的衍生物、型鯉誉等能自我复制;有个至多个限制陽的柔"川切割位点:有特殊的标记—知识点二基因工程的基本操作程序目的基因的获取「从川因文库中获取〜利用PCR技术扩增丄通过化学方法人工仑成达栈

2、体的构建気冃的奉因、启动了、终止了及标记基因等将FI的从r杭物细胞:农杆菌转化法卫因枪法、花粉管通道法因9入受片动物细胞：妙射技术（注射到受稱卵内）体细胞「微工物细胞：感受态细胞法目的垄因的检测与.鉴定・利用DNA分子杂交技术检测冃的肚肉的右无•利用分子杂交技术检测n的廉因足否转录-利用抗踰抗体杂交检测n的加因是否翻译•利用个体生物学水平的检测鉴定目的基因定否农达知识点三蛋白质工程朋因修饰或肚冈合成操作事段蛋白质-T-设吃预期蛋白质的功能!设计预期的如白质结构:♦桥•的蛍IX购:攻适现右蛋白质,车果1JUJx^-APrrtx/J7U

3、:i或制造岀新的蛋工找到相对应的脱氧核哥:白质程酸庠列（基因）a［基本技能问题化］1.据两种限制酶的作用图示填空⑴已知限制酶EcoRl和S〃ml识别的碱基序列和酶切位点分别为G*AATTC和CCC'GGG,在图中画出两种限制酶切割DNA后产生的末端并写出末端的种类。①C-GT—ATTCIlli、AAG)②cc:C(1JG(EcoRISma1(2)①产生的是黏性末端;②产生的是平末端。(3)EcoRI限制酶和SmaI限制识别的碱基序列不同,切割位点不同(填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有专一性。CTTAAIIIIrAATTC1.

4、观察下图所示过程，回答相关问题GAATTC®_CTTAAGT~~Z(1)①是限制酶,②是DNA连接酶,二者的作用部位都是磷酸二酯键。(2)限制酶不切割自身DNA的原因：自身DNA不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。2.结合抗虫棉的培育过程图填空十一、离蛋白亦玄金劳ttiJJ构建基因农达载体TDNATi质粒抗虫棉抗虫棉的培仃过程感将冃的辛插入到迓勺染色体DNA中X棉株细胞(1)从图中可以看岀，目的基因是Bt毒蛋白基因,使用的载体是Ti质粒,将目的基因表达载体导入受体细胞的方法是农杆菌转化法。(2)请写出两种检测目的基因是否表达的

5、方法:抗原一抗体杂交法、用棉叶饲喂棉铃虫。1.填写蛋白质工程流程图中字母代表的含义蛋白质工程中心法则A.魁，B.翻译,C・分子设计,D.氨基酸序列,E.预期功能。考点突破——题点化•重点化考点一基因工程的操作工具命题点(一)限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用1・(2016全国卷III)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRI>BamHISau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）。——GAATTC————GGATCC————GATC——

6、——CTTAAG————CCTAGG————CTAG——ttt图（町根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）经BamHI酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被酶切后的产物连接，理由是（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有,不能表达的原因是抗生素抗性M因T图（b）启夂制廉点图（C（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。解析:（1）由题图可知，Ba加HI和Sau

7、3AI两种限制性内切酶的共同识别序列是GATCde，二者切割可以形成相同的黏性末端，因此经BamHI酶切得到的目的基因C1AG可以与图（b）所示表达载体被Sau3I酶切后的产物连接。（2）在基因表达载体中，启动子应位于目的基因的首端，终止子应位于目的基因的尾端，这样目的基因才能顺利地转录，再完成翻译过程，即顺利表达。图中甲所示的目的基因插入在启动子的上游，丙所示目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录，因此目的基因不能表达。（3）常见的DNA连接酶有EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中T4DNA连接酶既能连

8、接黏性末端又能连接平末端。答案：（l）Sa“3Al两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端（2）甲和丙甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录（3）E・co〃DNA连接酶T4DNA连接