食用菌母种的分离.ppt

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1、食用菌母种的分离制备一、母种培养基的制备及接种培养（一）母种培养基制作：1.用具、设备：手提消毒灭菌锅、铝锅、试管、电炉、棉花、漏斗、PH试纸、接种箱或超净工作台、培养箱等。2.培养基配方：①去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾0.5克，磷酸氢二钾0.1克，硫酸镁0.5克，蛋白胨2克，水1000亳升，PH值自然（也可根据不同食用菌品种进行调节，如草菇PH值7.5-8）。②.去皮马铃薯100克，玉米粉30克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾0.5克，磷酸氢二钾0.1克，硫酸镁0.5克，蛋白胨2

2、克，水1000亳升，PH值自然。③.去皮马铃薯100克，玉米粉15克，麸皮15克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾0.5克，磷酸氢二钾0.1克，硫酸镁0.5克，蛋白胨2克，水1000亳升，PH值自然。3.工艺流程：称量→煮制→分装→灭菌→排斜面→无菌检验培养基的分装及排斜面示意图1．组织分离法制母种（无性繁殖）将子实体、菌核、菌索等一小块组织放于斜面培养基上，使其萌发为纯菌丝的方法，称为组织分离。该法具有简便、易成功、能保持原菌种性状等优点，但重复多，易退化，应与孢子分离交替进行。组织分离法适用于绝大多数食用菌

3、（二）、母种的接种与培养种菇选择：在出菇场要选择肉厚肥大、鲜嫩，出菇早、菇形整齐、菌柄短且无病害的做种。表面消毒：将种菇表面用清水冲洗干净，放在接种箱（或无菌室内）进行表面消毒。用镊子将种菇放在培养皿内，用另一反镊子夹75%酒精棉球（或0.1%升汞棉球）对种菇进行表面消毒，然后移入另一培养皿内再用无菌水反复洗涤三次，洗净残留的消毒剂。实验方法菌柄与菌盖交界处取组织块用解剖刀或鲜剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把自己消毒的种菇纵切开，然后用菌盖笔菌柄交界处，切取长宽的0.3~0.5厘米的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养

4、基上，置24℃恒温箱中培养。检查筛选每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝转移新的试管斜面。若在组织块附近或其他地方出现其他颜色杂菌生长应予以淘汰。纯化培养将菌丝块移入PDA平板培养若纯：四周辐射状生长，外缘整齐一致否则：边缘参差不齐，色素分布不均匀将较一致的菌丝的前端，切割→新培养皿菌肉组织分离示意图菌核组织分离示意图2．孢子分离法（有性繁殖）孢子分离有单孢分离和多孢分离两种方法。单孢分离由于技术难度大，主要用于杂交育种的研究，生产上较少采用，一般

5、采用多孢分离法。孢子收集器示意图3、母种转管接种与培养。母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸入菌种试管内，挑小块菌种放入斜面培养基中（见下图）斜面试管转管接种二、原种培养基的制备及接种培养（一）、原种常用培养基制作：1.用具、设备：高压蒸汽灭菌锅或常压蒸汽灭菌锅；铝锅、电炉；拌料机；装袋机；无菌室、接种箱或超

6、净工作台；培养箱或培养室等。2.培养基配方：①木屑培养基：木屑78%，麸皮或米糠20%，石膏1%，糖1%，水适量。适用于培养平菇、木耳、香菇、猴头。②棉子壳培养基：棉子壳99.5%，石膏0.3%，水适量。适用于培养平菇、猴头、金针菇、鸡腿菇。3.培养料的配制⑴木屑、棉籽壳培养料的拌料配制木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60﹪左右。⑵谷粒培养料的配制谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高等优点，在生产中应用

7、较多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。4.装袋或装瓶将培养料拌匀装入菌种瓶（或袋）内、装料松紧适宜，上下一致，装料高度以齐瓶（袋）肩为宜。然后用锥形木棒在瓶的中央向下插一个小洞，塞上棉塞。装好的料瓶（袋）要当天灭菌，以免培养料发霉变质。5.培养基的灭菌通常采用高压蒸气灭菌法和常压蒸气灭菌法以达到灭菌的目的。高压灭菌2小时或常压灭菌于100℃维持8-10小时，灭菌后培养基最好放在适温下，空白培养5-7天，以检查培养基灭菌的效果。如在此期间没有出现任何杂菌，说明灭菌效果良好。待其冷却30℃以下可接种。三、栽

8、培种培养基的制备及接种培养栽培种是直接用于生产的菌种。生产种的优劣，对产量有着直接的影响。栽培种的培养基和接种方法，基本上和原种相同。栽培种是用培养好的原种进行扩大接种的。栽培种制作示意图四、菌种质量优质菌种是食用菌栽培成功的重要保证。因此，在食用菌栽培中，既要了解各类菌种的贮藏保管方法，又要能正确选用菌种，识别菌种的真假与优劣。1、母种的保藏母种量少，一般