组织分离制食用菌母种

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1、实训三组织分离制食用菌母种好树结好果,好种出好菇!美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种!组织分离制食用菌母种你了解吗?噢菌种很重要！母种原种栽培种食用菌的栽培子实体(菇体)实训内容母种培养基的配制及组织分离接种（一）实训目的（二）实训原理（三）实训设计思路（四）实训器材（五）实训步骤（六）注意事项（七）实验作业（一）实训目的1.掌握母种培养基的配制操作及高压灭菌方法;2.理解组织分离法制母种的原理;3.掌握组织分离接种技术;4.会使用超净工作台和培养箱.（二）实训原理组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯

2、菌丝的方法。组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快，比较常用。实训设计思路1.母种培养基的成分不同对菌丝生长有什么影响；2.组织分离选用的材料及分离的部位不同有什么影响；3.培养温度不同有什么影响；4.杂菌污染的原因（三）实训器材新鲜菇(耳)体、刀片、镊子或接种针试管斜面培养基接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、75%酒精及酒精棉球等培养箱等。复习上一节母种培养基的配制步

3、骤1.按配方称量：见下面的配方2.煮制3.分装4.灭菌5.排斜面母种培养基配方：1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g或黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mg）。此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。培养基的高压灭菌使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？（提问同学）(1)锅内装物品不应过紧；(2)注意排出冷气

4、，否则不能保证灭菌效果；(3)加热排冷气后，使温度达到121.3℃，压力在0.1－0.15MPa之间维持30min；(4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。（四）组织分离操作的主要步骤：①挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中，无病虫害，具有本品种优良性状的菇体或组织作为种菇。②环境、用具严格消毒：即超净工作台或无菌室的使用，形成无菌的环境。超净工作台的使用超净台可将空气通过由特制的微孔的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃、真菌

5、和细菌孢子等等。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。超净工作台⑴使用注意事项（提问同学）①提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30分钟后关闭杀菌灯；②然后开启日光灯、风机，20分钟后方可进行操作。组织分离操作③菇体消毒：将子实体菌柄基部切除，置接种箱内，在无菌箱内以0.1％的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干，或用75％酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。组织分离部位的选择菌肉组织如图菌核组织如图示范操作④组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用

6、刀片在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小方块。⑤接种：在无菌条件下，随后挑取一组织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上，并塞好棉塞。示范操作⑥贴标签培养：试管从接种箱取出之前，应逐支试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，随后把试管放入培养箱（室）中，置适宜温度（平菇22℃，香菇25℃）下培养，待组织块长出菌丝无污染即为纯种。培养置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、草菇、猴头菌等多采用此方法。附：数显式恒温培养箱的使用数显式恒温培养箱

7、的使用培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞、组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件①调节适宜温度，并使温度稳定，再放培养物;②培养过程中要观察温度稳定性和生长状态，并注意培养时间；注意③培养终止，关掉电源，取出培养物；④培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风；保持培养箱内空气干净，并定期消毒；实训第二大部分学生分组操作分组操作每班同学可分为二大组6小组；第一大组3台双人超净工作台，每次可6人操作；第二大组可在无菌室内操作；第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离，第二大组采用菌盖

8、带菌褶部分进行组织分离，作对比观察。分组辅导注意同学们的操作；及时纠正不规范动作。接种操作完毕，收集试管进行培养。数显式恒温培养箱的使用注意事项（提问同学）实训第三大部分结果观察母种培养生长状态观察母种培养生长状态可分4种情况.1.菌丝已萌发，生长旺，无污染(如图所示)；2.菌丝已萌发，但有杂菌污染；3.菌丝未萌发，无污染；4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重；原因分析1.菌丝未萌发：①组织块太小②烫伤严重③培养条件如