食用菌母种细菌污染原因的探讨

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1、第25卷第6期濮阳职业技术学院学报Vol.25No.62012年12月JournalofPuyangVocationalandTechnicalCollegeDec.2012食用菌母种细菌污染原因的探讨武模戈（濮阳职业技术学院，河南濮阳457000）摘要：食用菌母种生产过程中常常遇到细菌污染，如何防止或减少细菌污染，需要探明污染来源及污染原因。本文针对可能引起母种细菌污染的原因进行设计试验，从母种种源、冷凝水、棉塞、灭菌、接种环境及无菌操作技术等环节进行了详细研究。实验结果表明，经彻底灭菌后产生的冷凝水不带细菌，棉塞的内部和中部也无细菌存在，但在试管口外或靠近试管口部分

2、棉塞的表面有细菌存在。故接种时要在拔掉棉塞后将试管口进行灼烧，以杀死细菌从而减少污染。经过本实验更容易查找食用菌在生产和发酵中染菌的原因，以扩大食用菌生产规模、提高生产效率。关键词：食用菌；培养基；冷凝水；棉塞；母种；细菌污染中图分类号：S646文献标识码：A文章编号：1672-9161（2012）06-0144-03在食和菌母种生产中常常发生细菌污染，特别疗器械厂生产。是当培养基表面存在大量冷凝水时，发生的几率更SW–CJ–2F洁净工作台，苏净集团苏州安泰空高。细菌污染产生的原因众说纷纭、莫衷一是。多数气技术有限公司生产。作者认为，细菌污染是由于培养基灭菌不彻底所致，

3、HHB11电热恒温培养箱，天津市华北实验仪器也有人认为是无菌操作不严所致，或认为是母种种有限公司生产。源带菌、由于冷凝水所致，培养环境中杂菌密度过高WP750中型机械微波炉，顺德市格兰仕电器实引起，更有人认为是由于棉塞灭菌不彻底所致。这些业有限公司生产。原因多数是推测而来，没有专门针对母种细菌污染101A–2B电热鼓风干燥箱，上海实验仪器厂有的原因进行细致的研究，没有实验证据。为探明母种限公司生产。生产中细菌污染的真正原因，我们设计试验来探讨JA5002电子天平，上海精天电子仪器有限公司细菌污染的原因，并对防止母种细菌污染的技术措生产。施进行讨论，以解决母种细菌污染原因

4、这个悬而未XSP-6C显微镜，南京光学仪器厂生产。决的问题。1.3方法1材料与方法1.3.1制备牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（BPA）1.1材料按照培养基的配方准确称量，然后将其置于电菌种：平菇PL-BN-2菌株，保存于濮阳职业技饭锅中溶化，向电饭锅中加入所需要的水量并搅动,术学院微生物实验室。然后加热使其溶解，将配好的培养基分装三角瓶内，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（BPA）：牛肉膏0.5g、三角瓶用八层纱布两层报纸包扎好，进行灭菌。蛋白胨1g、氯化钠0.5g、琼脂2g、蒸馏水100mL、将制备好的培养基和待灭菌物品放在灭菌筐PH7.0～7.2灭菌1.05kg/cm2，22min

5、。用于细菌检测的中，打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线，盖上灭菌培养。锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯20g、密闭，勿使漏气。当压力上升到0.05MPa时打开排气葡萄糖2g、KH2PO40.15g、MgSO4·7H2O0.1g、琼脂2g、阀，将锅内的冷空气排出，重复两到三次，以确保锅PH6.5。用于平菇母种的培养。内冷空气全部排出。当锅内冷空气排净时，即可关闭排1.2仪器气阀，这时压力开始上升。当温度上升至121℃时开始LDZX–50F立式压力蒸汽灭菌器，上海甲安医计时，维持30min，灭菌后关上电源等待压力表归零。收

6、稿日期：2012-10-09作者简介：武模戈（1965-），男，河南台前人，濮阳职业技术学院副教授。—144—1.3.2制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）棉塞与试管口平齐，分别取试管内残留部分棉塞的按照培养基的配方，准确称取各成分于电饭锅外部﹑中部﹑内部的少许棉花，在牛肉膏蛋白胨平板中溶化，向上述电饭锅中加入所需要的水量，搅动，表面拖动，最后置于平板中央。每个处理的内、中、外然后加热使其溶解。用马铃薯配制的PDA培养基需先部分别做3个平板，即3次重复。然后置于36℃恒将削皮后的马铃薯按其配方的浓度加热煮沸半小时温箱中培养，定期观察有无细菌污染。并用纱布过滤,然后加其他

7、成分继续加热使其溶化,再2.2.5无菌操作条件和方法的检测加入其他药品,并补足水量。将制好的PDA培养基分将倒好的牛肉膏蛋白胨平板直接放在36℃温装入试管中,试管用新鲜的棉花塞好，每7支为一把并箱中培养，观察有无细菌污染，实验设3次重复。用两层报纸包扎好按照上述方法进行灭菌。3结果与分析2实验设计及实验过程3.1母种种源是否带菌的检测结果2.1培养基预处理通过镜检，在母种种源中未检测到有细菌存在。PDA培养基灭菌结束后进行3个处理。母种接种于牛肉膏蛋白胨平板培养结果见图1。由处理Ⅰ：当灭菌锅压力自然回复到零后，马上打图1可以看出，三个平板