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《GBT 17819-1999 维生素预混料中维生素B12的测定高效液相色谱法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/'r17819--1999前台维生素预混料中维生素B}}测定方法尚无国际标准。本标准参考《色谱科学杂志》第15卷和洲封罗纳普朗克动物营养公司提出的分析方法，该法简捷、快速、准确，在技术内容上采用其中技术条件，在编写规格上，依据GB/T1.1---1993《标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第I部分:标准编写的基本规定》和GB/T1.4-1988《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定》。本标准的附录A是标准的附录。本标准由全国饲料工业标准化委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标
2、准主要起草人:李兰、陈必芳、梁冬生。中华人民共和国国家标准维生素预混料中维生素B12的测定CB/r17819一1999高效液相色谱法DeterminationofvitaminB,Zinvitaminspremix一High-pressureliquidchromatography1范围本标准规定了用高效液相色谱法测定维生素预混料中维生素B12的方法。本标准适用于维生素预混料、维生素B,z预混制剂中维生素B,z的测定。检测范围为每千克样品中维生素B,含量大于。.25mg,方法原理试样中维生素B,:用水提取，经高效液相色谱反相柱
3、分离，其峰面积与维生素B,。的含量成正比试剂和材料本标准所用试剂除特殊注明外，均为优级纯，水为去离子水。11乙睛:色谱纯。3.2正磷酸溶液3.325%乙醇溶液3.4维生素B,标准溶液。3.4.1维生素B。标准贮备溶液:准确称取。.1000g维生素B,:纯品(符合USP),溶解于100MI乙醇溶液(3.3)中，并稀释定容至刻度，摇匀。该标准贮备液每毫升含维生素B,,Img.3.4.2维生素B,z标准工作液:准确吸取维生素B,z标准贮备液(3.4.1)1mL于50MI容量瓶中，用移动相稀释定容刻度，摇匀。该标准工作液1MI含维生素
4、BV2(Age4仪器、设备4.1实验室常用设备。4.2超声波水浴。4.3高效液相色谱仪，带自动进样器，紫外可调波长检测器。4.4超纯水装置4.5离心机:3000r/min.5试样制备取具有代表性样品至少500g，用四分法缩分至100g，粉碎·圣部过0.28mm孔卜混匀，装入样品瓶内密闭，避光低温保存备用。国家质量技术监督局1999一08一10批准2000一02一01实施GB/T17819-19996分析步骤6.1提取6.1.1维生素预混料中维生素B。的提取称取试样2^-3g(精确至士。.0001g)，置于100mL棕色容量瓶中
5、，加约60mL去离子水，在超声波水浴中超声提取15min，取出，用去离子水定容至刻度，混匀，过滤，滤液过。.45fam滤膜，供高效液相色谱仪分析。6.1.2维生素B二制剂(1%-2%)的提取称取试样1g(精确至士。0001g)于100mL棕色容量瓶中，加人约60mL去离子水，在超声波水浴中超声提取10min，取出用去离子水定容过滤。精确吸取1.00mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用去离子水定容至刻度，该液通过。.45pm滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析6.2测定步骤6.2.1色谱条件柱子:p.-BondpakNH,,粒度5pm,
6、3.9mmX300mm.柱温:30C。流动相:3%正磷酸水溶液260mL与700mL乙膀混合，超声脱气。流速:1.7mL/min,检测波长:361nm,6.2.2定量测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，用两次以上相应标准工作液，对系统进行校正。将通过。.45p=滤膜的样液((6.1.1)依次分装于自动进样小瓶中，依外标法上液相色谱仪测定6.2.3也可采用反相离子对高效液相色谱测定维生素B,,的方法(见附录A)7测定结果的计算Mill定结果按式(1)计算P;XVXp;XV=m;=·····。.········.····。
7、.····一(1)尸。，X舰XV式中:.;一一每千克样品中维生素B,:的含量，mg;m-一试样质量，g+V;-一试样溶液进样体积,pL;尸.-一试样溶液峰面积值;V-一试样稀释的体积，mL;P-一标准溶液浓度，pg/mL;v，-一标准溶液进样体积,pL;P,-一标准溶液峰面积平均值。每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。结果表示到每千克样品中维生素B,,O.01mg8允许差同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差应不大于1500GB/T17819-1999附录A(标准的附录)反相离子对高效液相色谱
8、测定预混料中维生案B,2A1原理试样中维生素BZ经水提取后，注人反相色谱柱上，由于输入了有机的反相离子对四丁基磷酸钱(PICA)和己烷磺酸钠(PIC-Bs)溶掖，维生素B,:的阳离子与移动相中阴离子形成离子偶化合物，在移动过程中与固定相分开达到分离.A勺乃乙内乙‘，‘，‘IJ
