液相色谱工作原理ppt课件.ppt

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1、液相色谱工作原理流动相储液瓶单元或多元泵梯度混合器预柱手动-进样器自动-进样器保护柱色谱柱柱后反应器柱温箱检测器馏分收集器积分仪工作站计算机接口温度控制单元样品制备单元液相色谱仪器结构组成示意图溶剂传输泵溶剂传输泵的要求能在高压下连续工作较宽的可程序控制的流速范围耐化学腐蚀无脉动输出输出流量稳定、重复性好易安装维护步进电机齿轮变速箱活塞液体到色谱柱密闭输液系统工作过程：步进马达带动活塞输液优点：流速恒定，无脉冲缺点：输液泵缸溶剂有限活塞与液缸间密封要求高，更换溶剂不方便造价高溶剂输出泵—柱塞泵工作过程：电机带

2、动偏心轮，驱动活塞往复运动在高压下连续以恒定的流量输送液体优点：溶剂不受限制死体积小溶剂混合均匀缺点：会产生脉冲需增加脉冲阻尼器溶剂输出泵—往复泵溶剂进入：活塞收回、腔内形成低压入口阀打开，出口阀感应压差而闭合溶剂输出：活塞推出、腔内压力增加出口阀打开，入口阀感应压差而闭合单向阀的特点：密封性能相当好可以非常敏感地感应压差而迅速闭合往复泵的工作原理并联往复泵的工作原理进样阀六通阀设计耐高压，低死体积可以手动或自动旋转进样阀自动进样的重复性优于手动进样上样(load)状态进样(inject)状态手动进样阀的进样

3、注意：一定使用平头微量进样针进样—层流效应当样品注入定量环时，环中的流动相将被取代样品于流动相之间的界面呈抛物线状，称为层流效应全定量环进样时，必须考虑层流效应的影响进样—层流效应以定量环的体积定量对一般样品而言，进样体积需大于定量环的2.5倍>4倍则更加保险倍数进样—进样量全定量环进样准确，但浪费样品至少需要2.5倍进样体积的样品部分定量环进样进样量<进样环体积的一半无层流效应的影响误差来源于进样针及操作人员使用内标法将可以提高进样的准确度检测器作用：检测色谱柱流出物组份浓度的变化理想的检测器：灵敏度高对所

4、有溶质都有快速的相应不引起柱外谱带扩展线性范围宽对样品无破坏性检测器响应对流量及温度变化不敏感检测器分类按检测对象分类整体性检测器：检测流动相的总体物理性质如：示差折光检测器、电导检测器灵敏度低、易受温度影响的波动、不适合梯度洗脱溶质性检测器：测量溶质的某种特性或物化性质的变化如：紫外检测器、荧光检测器流动相不能有紫外吸收按选择性分类选择性检测器：紫外检测器、荧光检测器、电导检测器通用性检测器：示差折光检测器检测器的噪音和漂移噪音和漂移反应了检测器的稳定性噪音无溶剂通过检测器时，输出信号的变化电路及泵的脉冲引

5、起短噪音，不影响色谱峰的分辨率，但影响检测限长噪音来自检测器本身、或流动池有气泡，温度及流量的变化也会引起长噪音漂移基线随时间增加朝单一方向偏移电源电压不稳、温度及流动相发生缓慢变化对分析误差及检测能力有影响检测器的技术指标灵敏度检测器的主要性能指标，样品进入检测器的响应信号灵敏度越高检测限越低检测限两倍噪音时所需要的样品量检测限低、检测性能强、检测时所需要的样品少线性范围检测信号与被检测物呈线性关系的范围下限定义为两倍噪音紫外-可见波长检测器应用范围最广泛的检测器大约占使用的70%紫外光区：190~370n

6、m特点灵敏度高、噪音低、线性范围宽为溶质型检测器、对流速和温度的变化不敏感为选择性检测器，必须使用无紫外吸收的溶剂作流动相为浓度型检测器为非破坏性检测器，可与制备色谱或其他设备串联结构简单、维护方便I0IAbsorbedradiationTransmittedradiationIncidentradiationReflectionbA=log()=abcIoI紫外-可见波长检测器工作原理朗伯-比尔定律：吸光度与化合物的浓度成正比理论检测限估算摩尔吸光系数ε（A=εbc）紫外检测器灵敏度很大程度取决于样品的ε值

7、ε与物质分子结构有关估算最低检测浓度CminCmin=3ND/εb（ND噪声）摩尔吸光系数影响检测灵敏度估算最小检测量MminMmin=Cminx进样体积紫外-可见波长检测器的光学系统二极管阵列检测器光学特性光电二极管阵列汞灯波长校正棱镜分光系统二极管阵列检测器的数据分析功能荧光检测器原理物质吸收特征频率的辐射，跃迁到高能级从高能级状态向低能级，发射出比吸收波长更长的特征辐射荧光检测器光学系统ProStar363荧光检测器示差折光检测器通用型检测器溶剂选择合适几乎可测所有的物质原理折射率：光在真空的速度和在某

8、介质中的速度之比光光由一种介质进入另一种介质时发生折射现象折射率随温度升高而降低同一介质对不同波长的光有不同折射率示差折光检测器光学系统温度控制维持参比、样品池温差最小采用热交换器、利用热平衡控制温度避免室温变化的影响示差折光检测器的特点属通用型检测器响应值取决于柱后流出液折射率变化适合检测无紫外吸收的物质流动相溶剂具有高紫外吸收浓度敏感型检测器响应信号与溶质浓度成正比中等灵敏度检测器不适合痕量分析