分子生物学 重点理论 及实验操作 .doc

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1、GT-AG法则真核生物基因的外显子与内含子接头处都有一段高度保守的一致性序列，即：内含子5′端大多数是以GT开始，3′端大多是以AG结束。是RNA加工时剪接的信号。启动子（promoter）是能够被RNA聚合酶特异性识别与结合并启动转录的DNA序列。外显子（exon）编码氨基酸序列，在基因转录后经过剪接连在一起，形成成熟的mRNA，最终参与指导多肽链合成基因（genes）指存在于DNA分子上编码RNA或多肽链的功能区段，包括编码序列(外显子)、侧翼序列(含有调控序列)及插入序列(内含子)。基因是决定遗传性状的功能单位.结构域（domain）蛋白质的三维结构常可分割成一个或数个球状或纤维状

2、的区域，折叠得较为紧密，各行其功能，称为结构域。基因组（genome）广义上指一个细胞或病毒颗粒所含DNA的全部序列（包括编码序列和非编码序列）。即遗传物质的总量。狭义上指一个细胞或病毒颗粒所含基因的总和。端粒（telomere）真核生物染色体线性DNA分子末端由DNA和蛋白质组成的一种特殊结构，由短的高度重复序列组成，维持染色体的稳定性和DNA复制的完整性。多基因家族（multigene）指碱基序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的基因。编码产物具有相似的功能。假基因与有功能的基因结构相似，但不能表达基因产物的基因。复制子（replicon）从一个复制起始点开始所复制的DNA分子或D

3、NA片段。复制叉（replicationfork）复制时，自起点解开双链成两股单链而在起点两侧形成现叉状结构。半不连续复制（semi-discontinuousreplication）DNA复制过程中，在复制叉处的一条新链的合成是连续的(前导链领头链)，与复制叉前进方向一致。另一条新链的合成是不连续的(尾随链)，与复制叉前进方向相反。S-D序列（Shine-Dalgarnosequence，核糖体结合位点）指位于原核生物mRNA起始密码（AUG）的上游约4-13个碱基处存在的一段富含嘌呤的序列，其一致序列为-AGGAGG-，能与核糖体30S亚基中16SrRNA3′端富含嘧啶的序列结合，与

4、蛋白质合成过程中起始复合物生成有关。开放阅读框架（openreadingframe，ORF）从mRNA5′端起始密码AUG到3′端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称开放阅读框架。RNA编辑（RNAediting）指改变mRNA分子中的碱基而使同一基因表达出不同的蛋白质。分子伴侣（molecularchaperon）指促进、帮助、监视和加速蛋白质进行正确折叠的一类蛋白质分子。热休克蛋白（HSP）、伴侣蛋白（伴侣素）基因表达（geneexpression）指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定

5、的生物学功能和生物学效应的全过程。klenow片段（DNA聚合酶Ⅰ大片段）E.coliDNA聚合酶I经部分水解生成的C末端605个氨基酸残基片段。保留了DNA聚合酶I的5′-3′聚合酶和3′-5′外切酶活性，缺少5′-3′外切酶活性。基因打靶（genetargeting）是利用DNA同源重组原理，定向地从细胞染色体上移除或移入特定基因的过程。包括基因敲除(置换特定基因使其丧失活性)和基因敲入（代替特定基因）。真核生物：初级转录产物—核不均一RNA（hnRNA）—需转录后加工和修饰；5′端加帽、3′端加尾、切除内含子、连接外含子，才能形成成熟的mRNA分子。真核生物转录后水平的调控：⑴5′

6、端加帽——在5′端加上7-甲基鸟苷（m7GPPPmNp—）；保护mRNA免遭核糖核酸酶降解，增强mRNA的稳定性；协助mRNA的剪接；利于mRNA自细胞核转运至细胞质；促进mRNA与核糖体的结合，启动翻译。3′端加尾——在3′端加上50-150个A，即多聚腺苷酸尾poly（A）；保护mRNA免遭核糖核酸酶过早降解，有助于保持翻译模板活性。⑵mRNA前体的剪接真核细胞基因表达所转录出的mRNA前体在剪接酶作用下，有序删除每一个内含子并将外显子拼接起来，形成成熟的mRNA。⑶mRNA前体的选择性剪接选择性剪接（alternativesplicing）指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式（

7、选择不同的剪接位点组合）产生不同的mRNA剪接异构体的过程，而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性，或者，在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。在高等生物细胞的高度异质性中起重要作用。由于剪接的多样化，一个基因在转录后通过mRNA前体的剪接加工而产生两个或更多的蛋白质。⑷RNA编辑可增加mRNA信息的内涵。RNA编辑（editing）是指基因转录产生的初级mRNA分子中，由于核苷酸的缺失，插入或替换，