分子生物学实验理论与操作教程

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1、分子生物学实验理论与操作教程分子生物学实验理论与操作教程中国农科院研究生院中国生化及分子生物学学会植物病虫害生物学国家重点实验室９３二零零四年七月目录前言-----------------------------------------------------------I第一部分核酸提取----------------------------------------------1实验一：基因组DNA提取--------------------------------------------1实验二：总RNA提取-------------------

2、-----------------------------3第二部分亚克隆技术---------------------------------------------8实验三：质粒DNA提取----------------------------------------------8实验四：DNA片段的酶切--------------------------------------------9实验五：DNA片段的酶修饰-脱磷-------------------------------------12实验六：DNA片段的连接-----------

3、---------------------------------13实验七：DNA片段的回收-------------------------------------------15第三部分PCR技术-----------------------------------------------18实验八：PCR产物的克隆技术----------------------------------------18八．1：T-载体构建---------------------------------------------19八．2：PCR产物的T-载体克

4、隆------------------------------------20八．3：PCR产物的平端克隆技术----------------------------------21实验九：RT-PCR技术-----------------------------------------------21实验十：定量PCR-------------------------------------------------25第四部分文库构建技术------------------------------------------29实验十一：mRNA的提取

5、及纯化--------------------------------------29实验十二：cDNA文库构建技术-cDNA链的反转合成--------------------32实验十三：1,cDNA文库构建技术-cDNA链的连接、包装及转染----------34实验十三：2,RACE技术---------------------------------------------36第五部分核酸杂交技术-------------------------------------------40实验十四：DNA探针的标记---------------

6、---------------------------40实验十五：Southern杂交技术---------------------------------------44第六部分：基因及基因产物检测技术----------------------------------48实验十六：DNA的测序技术------------------------------------------48实验十七：基因表达1，基因的体外快速翻译-------------------------532，基因的诱导表达--------------------------

7、---54实验十八：报告基因的应用------------------------------------------57实验十九：Western杂交技术----------------------------------------58第七部分基因表达轮廓技术---------------------------------------67实验二十：DD-PCR技术---------------------------------------------73实验二一：SSH技术------------------------------------

8、------------74第八部分：遗传转化技术-----------------------------