塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究

ID:5998786

大小:37.50 KB

页数:13页

时间:2017-12-30

塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究_第1页
塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究_第2页
塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究_第3页
塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究_第4页
塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究_第5页
资源描述:

《塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性探究  [摘要]目的研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布影响口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞对长春新碱敏感性的效应,探讨其作用机制。方法采用MTT法分别检测塞来昔布组、长春新碱组、塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+前列腺素E2(PGE2)组对KB/VCR细胞的生长抑制作用,用Western印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2和Bcl-XL的表达,流式细胞术检测塞来昔布对KB/VCR细胞凋亡的影响。采用SPSS13.0软件进行

2、统计分析。结果塞来昔布+长春新碱组的细胞生长抑制率高于塞来昔布组、长春新碱组及塞来昔布+长春新碱+PGE2组(P  [Keywords]KB/VCRcell;multidrugresistant;P-glycoprotein;cycloxygenase-2inhibitor;apoptosis口腔癌是常见的口腔头颈部恶性肿瘤之一,近年来口腔癌的发病率呈现明显增高趋势,已成为威胁人类健康的重要因素之一。化疗是口腔癌重要的辅助治疗方法之一,目前化疗所面临的主要问题是癌细胞对化疗药物的敏感性下降,导致多药耐药(mult

3、idrugresistant,MDR)的产生,使癌细胞产生抵抗广谱化疗药物的能力。13近来研究[1-3]发现,选择性环氧化酶-2(cycloxy-genase-2,COX-2)抑制剂可抑制许多类型癌细胞的生长及诱导细胞凋亡,增强抗肿瘤药物对癌细胞的毒性作用。COX-2抑制剂的抗肿瘤活性的作用机制包括抑制细胞分裂周期、诱导细胞凋亡和抑制肿瘤新生血管生成等。此外有研究[4-5]认为,COX-2抑制剂可以通过调节ABC转运家族中的膜转运蛋白活性而增强肿瘤对化疗药物的敏感性。研究[6]发现,在肿瘤组织内COX-2与P-糖

4、蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达呈显著性正相关。本课题组前期研究[7-8]也证实,选择性COX-2抑制剂塞来昔布可显著增强顺铂对人舌癌细胞株Tca8113细胞的生长抑制作用,增加耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞内化疗药物的蓄积[9]。本实验研究塞来昔布对口腔上皮癌耐长春新碱细胞株KB/VCR化疗敏感性的影响,探讨塞来昔布增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用机制。1材料和方法1.1药物及试剂长春新碱(Vincristine,VCR)(Merck公司,德国),塞来昔布胶囊(Pfizer公司,美国),

5、MTT、二甲基亚砜(dimethyl13sulfoxide,DMSO)(Sigma公司,美国),RPMI-1640、胎牛血清(Invitrogen公司,美国),P-gp、Bcl-2、Bcl-XL及β-肌动蛋白鼠抗人单克隆抗体、荧光标记的羊抗鼠二抗(Epitomics公司,美国),人口腔表皮样癌耐长春新碱细胞株KB/VCR、人口腔表皮样癌细胞KB、膜联蛋白(annexin)V-异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)细胞凋亡检测试剂盒、Hoechst33342/PI双染试剂盒(

6、南京凯基生物科技发展有限公司)。1.2细胞培养KB/VCR细胞用含有10%胎牛血清和200nmol·L-1VCR的RPMI-1640培养基于37℃、5%CO2环境中培养,KB细胞用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,于37℃、5%CO2环境中培养。1.3MTT法检测将处于对数生长期的KB/VCR细胞,以每孔2×103个细胞的密度接种于96孔板中,常规培养24h,细胞贴壁后分别加入含10μmol·L-1塞来昔布(塞来昔布组)、1.5μmol·L-1长春新碱(长春新碱组)、10μmol·L-1塞来昔布+1.

7、5μmol·L-1长春新碱(塞来昔布+长春新碱组)及10μmol·L-1塞来昔布+1.5μmol·L-1长春新碱+100μg·L-1前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)(塞来昔布+长春新碱+PGE2组)的培养基,终液量为每孔20013μL,另外以未添加药物的RPMI-1640培养基作为空白对照。继续培养24、48、72h后,加入终质量浓度1g·L-1的MTT溶液100μL,继续培养4h,弃上清后每孔加入150μLDMSO,缓摇15min,酶标仪(EL×800型,BioTek公司,美国)490n

8、m波长下检测光密度(opticaldensity,OD)值。每孔设4个复孔,取其平均值,重复3次。按下述公式计算细胞生长抑制率:细胞生长抑制率=1-(实验组OD值/对照组OD值)×100%。用金正均法计算塞来昔布与长春新碱两药联用后的合并效应(q值):q=EA+B/(EA+EB-EA·EB)。其中EA代表A药单独给药时的效应,EB代表B药单独给药时的效应,EA+B代表A、

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
正文描述:

《塞来昔布提高耐长春新碱细胞株kb-vcr细胞化疗敏感性探究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性探究  [摘要]目的研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布影响口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞对长春新碱敏感性的效应,探讨其作用机制。方法采用MTT法分别检测塞来昔布组、长春新碱组、塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+前列腺素E2(PGE2)组对KB/VCR细胞的生长抑制作用,用Western印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2和Bcl-XL的表达,流式细胞术检测塞来昔布对KB/VCR细胞凋亡的影响。采用SPSS13.0软件进行

2、统计分析。结果塞来昔布+长春新碱组的细胞生长抑制率高于塞来昔布组、长春新碱组及塞来昔布+长春新碱+PGE2组(P  [Keywords]KB/VCRcell;multidrugresistant;P-glycoprotein;cycloxygenase-2inhibitor;apoptosis口腔癌是常见的口腔头颈部恶性肿瘤之一,近年来口腔癌的发病率呈现明显增高趋势,已成为威胁人类健康的重要因素之一。化疗是口腔癌重要的辅助治疗方法之一,目前化疗所面临的主要问题是癌细胞对化疗药物的敏感性下降,导致多药耐药(mult

3、idrugresistant,MDR)的产生,使癌细胞产生抵抗广谱化疗药物的能力。13近来研究[1-3]发现,选择性环氧化酶-2(cycloxy-genase-2,COX-2)抑制剂可抑制许多类型癌细胞的生长及诱导细胞凋亡,增强抗肿瘤药物对癌细胞的毒性作用。COX-2抑制剂的抗肿瘤活性的作用机制包括抑制细胞分裂周期、诱导细胞凋亡和抑制肿瘤新生血管生成等。此外有研究[4-5]认为,COX-2抑制剂可以通过调节ABC转运家族中的膜转运蛋白活性而增强肿瘤对化疗药物的敏感性。研究[6]发现,在肿瘤组织内COX-2与P-糖

4、蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达呈显著性正相关。本课题组前期研究[7-8]也证实,选择性COX-2抑制剂塞来昔布可显著增强顺铂对人舌癌细胞株Tca8113细胞的生长抑制作用,增加耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞内化疗药物的蓄积[9]。本实验研究塞来昔布对口腔上皮癌耐长春新碱细胞株KB/VCR化疗敏感性的影响,探讨塞来昔布增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用机制。1材料和方法1.1药物及试剂长春新碱(Vincristine,VCR)(Merck公司,德国),塞来昔布胶囊(Pfizer公司,美国),

5、MTT、二甲基亚砜(dimethyl13sulfoxide,DMSO)(Sigma公司,美国),RPMI-1640、胎牛血清(Invitrogen公司,美国),P-gp、Bcl-2、Bcl-XL及β-肌动蛋白鼠抗人单克隆抗体、荧光标记的羊抗鼠二抗(Epitomics公司,美国),人口腔表皮样癌耐长春新碱细胞株KB/VCR、人口腔表皮样癌细胞KB、膜联蛋白(annexin)V-异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)细胞凋亡检测试剂盒、Hoechst33342/PI双染试剂盒(

6、南京凯基生物科技发展有限公司)。1.2细胞培养KB/VCR细胞用含有10%胎牛血清和200nmol·L-1VCR的RPMI-1640培养基于37℃、5%CO2环境中培养,KB细胞用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,于37℃、5%CO2环境中培养。1.3MTT法检测将处于对数生长期的KB/VCR细胞,以每孔2×103个细胞的密度接种于96孔板中,常规培养24h,细胞贴壁后分别加入含10μmol·L-1塞来昔布(塞来昔布组)、1.5μmol·L-1长春新碱(长春新碱组)、10μmol·L-1塞来昔布+1.

7、5μmol·L-1长春新碱(塞来昔布+长春新碱组)及10μmol·L-1塞来昔布+1.5μmol·L-1长春新碱+100μg·L-1前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)(塞来昔布+长春新碱+PGE2组)的培养基,终液量为每孔20013μL,另外以未添加药物的RPMI-1640培养基作为空白对照。继续培养24、48、72h后,加入终质量浓度1g·L-1的MTT溶液100μL,继续培养4h,弃上清后每孔加入150μLDMSO,缓摇15min,酶标仪(EL×800型,BioTek公司,美国)490n

8、m波长下检测光密度(opticaldensity,OD)值。每孔设4个复孔,取其平均值,重复3次。按下述公式计算细胞生长抑制率:细胞生长抑制率=1-(实验组OD值/对照组OD值)×100%。用金正均法计算塞来昔布与长春新碱两药联用后的合并效应(q值):q=EA+B/(EA+EB-EA·EB)。其中EA代表A药单独给药时的效应,EB代表B药单独给药时的效应,EA+B代表A、

显示全部收起
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。
关闭