酪蛋白等电点实验讲解学习.ppt

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1、酪蛋白等电点实验一、生物化学实验要求与实验室规则1、遵守课堂纪律、维护课堂秩序，不迟到、不早退，严禁打闹，进入实验室必须穿实验服。2、原则上不允许请假。如是病假，须医院开具证明，且要辅导员签字；如是事假，列出事假理由，并有辅导员签字。由于请假漏做的实验，需要补做，否则零分。无故旷课，则零分，且实验课须重修。3、实验前要认真预习，掌握实验的目的、原理，熟悉操作步骤。听从老师的安排，不违规操作，注意自身安全。实验完成后要及时书写实验报告（实验名称、日期、目的、原理、步骤、结果、结果分析、思考题，文字简练、准确、认真，实验报告下一次实验课开始前上交，统一用实验报

2、告纸）。4、实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应及时复原。实验完成后，仪器洗净并放回原处，将实验产生的垃圾打扫干净，方可离开实验室。5、注意节约药品、试剂；洗涤和使用仪器时要小心仔细，防止损伤仪器及造成自身伤害；发现仪器故障应立即报告老师，不可擅自动手检修。6、严禁在实验室吸烟、喝水、吃东西。7、每次实验课结束，由班长负责安排值日生，负责打扫实验室卫生。二、生物化学实验的基本操作（一）常用玻璃器皿的洗涤玻璃器皿洁净与否，是实验结果是否准确的重要环节。洁净依据：内壁应十分明亮光滑，无水珠附在玻壁上。1、新购玻璃器材的清洗：一般用1~

3、2%的稀盐酸浸泡1~2h，有条件的可以用浓硫酸浸泡30min，再用水冲洗，以去除附着的油污、灰尘和金属离子等。2、用过的玻璃器材清洗：（1）一般器皿（如烧杯、试管等）用肥皂水和毛刷刷洗，再用清水冲洗干净。（2）定容分析器皿（如吸量管、量筒等）比较干净的，直接去离子水冲洗即可；否则用铬酸（酸性和氧化性）洗液浸泡，自来水和蒸馏水冲洗。（3）粘附有血浆的刻度吸管清洗45%尿素浸泡或1%氨水浸泡后，再稀盐酸浸泡，对于顽固污垢可再次采用重铬酸钾溶液浸泡。（二）常用器材的使用方法1、吸量管种类和使用（1）种类：移液管、奥氏吸管和刻度吸管移液管奥氏吸管刻度吸管（2）刻度

4、吸管的使用使用前：① 吸管无破损且干净；②选取合适的量程；③观察有无“吹”字：若有，说明刻度到尖端，放液后需将尖端的溶液吹出，否则不吹。握法：拇指和中指夹拄吸管，食指游离。取液：①垂直入液 ，且入液深度适中；② 吸耳球吸取液体，并使液高高于待量刻度2-3cm；③食指按紧吸管上端，并提离液面、观察液内有无气泡。放液至刻度：刻度吸管垂直，右眼与刻度线平行，轻轻松开食指（转动刻度吸管），使液面缓慢降低，直至最低点与刻度线相切。放液至容器：刻度吸管垂直，容器倾斜45℃，使溶液自然流入容器，注意吹与不吹。注意：一根吸管只吸取一种试剂；严禁用嘴吸。2、自动移液器的使用

5、优点：使用方便，取、加样速度快，计量准确，不易破损，可以吸取多种液体（只需要换枪嘴即可）移液器使用方法和注意事项（1）设定移液体积：从大量程调节至小量程为正常调节方法；从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。（2）装配移液枪头：将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。（3）吸液及放液：垂直吸液；吸头尖端浸入液面3mm以下，吸液前枪头先在液体中预润洗2-3次确保移液的精度和准 ； 慢吸慢放，以防突然松开溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气；放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。（4）不

6、适合吸取浓度和粘度大的液体（可采用反向移液技术移取高粘度液体） 。（5）吸有液体的移液枪不应平放，枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。（6）移液枪在每次实验后应将刻度调至最大，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命（7）移液枪校正：可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法，来校正取液器，1mL蒸馏水20℃时重0.9982g.（8）移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等）。（9）严禁使用移液器吹打混匀液体。（10）不要用大量程的移液器移取小体积的液体，以免影响准确度； 同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体，

7、请使用移液管进行操作。（11）如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物；定期清洁移液枪外壁，可以用95%酒精或60%的异丙醇，再用蒸馏水擦拭，自然晾干。3、溶液的混匀、过滤及离心（1）混匀的目的：使反应体系内的各种物质分子很好的相互接触，充分的进行反应；使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。（2）常用的混匀方式 ：腕混匀、指弹混匀、吹吸混匀、搅拌混匀、磁搅拌混匀、涡旋器混匀等。（3）混匀注意事项：防止液体溅出，严禁用手指堵塞容器口。（4）过滤：收集滤液、沉淀或洗涤沉淀。三、分光光度法（一）分光光度法的原理（掌握）（二）如何求被测组分的含量（掌握）（三）分光光度计

8、的基本结构（四）分光光度法计的使用与注意事项（一）分光光度法概念：