胃泌素和其受体拮抗剂作用下胃癌细胞dnmt—1和mmp—2、e—cadherin甲基化相关性探究

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1、胃泌素和其受体拮抗剂作用下胃癌细胞DNMT—1和MMP—2、E—Cadherin甲基化相关性探究　　【摘要】目的：通过检测胃泌素及丙谷胺干预下胃癌MKN45细胞DNMT-1基因表达与E-Cadherin和MMP-2基因甲基化变化的相关性。方法：胃癌细胞株分别在胃泌素和丙谷胺干预下分为空白组、胃泌素组、丙谷胺组和混合组，应用SYBRGreenIQ-PCR检测各组DNMT-1基因表达水平；运用RQ-MSP法检测用亚硫酸氢盐修饰后的基因组DNA为模板的各组基因甲基化状态。结果：胃泌素组与空白组相比，DNMT-1表达明显增高，而丙谷胺组则表达明显减

2、低（P　　1.5相对表达量水平的计算1.5.1DNMT-1相对量的表达水平直接用样品各自的内源控制物β-actin表达来标准化加入的初始RNA量，样品中靶基因的相对mRNA表达水平用以下公式计算：相对mRNA表达=2-△ct×100%，其中△ct值=靶基因Ct值-β-actinCt值。可依次分别得到每个标本相对β-actin的模板数。1.5.2各干预组及空白对照组甲基化相对定量比较4运用上述建立的MSP方法分析胃泌素和丙谷胺对胃癌细胞中E-Cadherin和MMP-2基因甲基化的影响作用（n=5），采用比较Ct值法计算公式2-△t（△ct值

3、=甲基化Ct值-非甲基化Ct值）法来半定量，显示各组甲基化相对非甲基化水平改变。1.6统计学处理采用SPSS13.0统计软件对实验数据进行分析，Q-PCR的计量资料采用（x±s）表示。两样本均数比较，方差齐时采用两独立样本t检验，方差不齐时行秩和检验。相关性分析用Pearson线性相关检验。以P　　结果说明胃泌素可影响甲基化相关基因表达，它已成为经典的造成基因表达紊乱的“第二次打击模式”。启动区基因甲基化变化作为第二次打击事件，而使其功能发生变化。Ajani等[8]用胃泌素免疫抗原特异性的抗胃泌素抗体，从而抑制了肿瘤细胞的增殖和浸润，表明胃

4、泌素参与了胃癌的发生和发展。随着肿瘤生长调节机制研究的不断深入，人们可望通过操纵激素的方法选择胃泌素依赖性胃癌进行内分泌治疗。高效专一的胃泌素受体拮抗剂的问世必将为胃癌患者提供一条特异性的非细胞毒性的内分泌辅助疗法，从而为胃癌内分泌治疗开辟新的途径。浸润和转移是肿瘤细胞的生物特性，而这是受外在信号及内在的基因调控产物与细胞外基质（ECM）各种成分相互作用的结果。胃泌素的外在信号可以促进DNMT-1表达，这可导致细胞甲基化信号通路紊乱，从而可能间接调控MMP-2的表达，直接促进E-Cadherin基因表达沉默，导致细胞基因甲基化紊乱，促进了肿

5、瘤的侵袭和转移。4参考文献[1]马俊萍，曹润林.195例消化道疾病患者胃泌素水平测定的临床分析[J].山西职工医学院学报，2011，21（1）：24-25.[2]MiyajiM，OgoshiK，TajimaT，etal.Associationbetweenserumgastrinlevels，gastricacidsecretionandageinearlygastriccancer[J].TumourBiol，1997，18（5）：311-320.[3]JungTY，JungS，MoonKS，etal.ChangesoftheO6-met

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