惠州学院folin-c 法测定植物多酚的含量实验报告.doc

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1、惠州学院实验报告课题：folin-c法测定植物多酚的含量姓名：黄景军专业：生物科学班级：11生科一班学号：一、实验目的1.掌握Folin-C法测定植物多酚含量的原理及其实验操作技能；2.掌握制作标准曲线的要领和通过保准曲线求样品溶液中多酚含量的方法；3.通过测得的吸光值计算所选材料的多酚含量及分析不同提取因素效果的影响二、实验原理以没食子酸为主的多酚类化合物在碱性溶液可将钨钼酸成蓝色化合物，该化合物在765nm处有做大吸收值，且吸收值与多酚含量成正比。以没食子酸为标准物质制作标准曲线。三、实验材料与试剂1.实验材料:佛肚竹叶子；黄金间碧竹叶子；绿竹叶子2.实验试剂：Folin-酚试剂，7.5

2、%碳酸氢钠溶液（7.5g碳酸氢钠固体定容至100ml容量瓶得到），没食子酸溶液，蒸馏水四、实验步骤1.标准曲线绘制：用0.02g没食子酸溶于10ml的蒸馏水制作没食子酸标准液（2.0mg/ml），然后将母液分别稀释成1.2,1.0,0.80.6,0.4,0.2和0.1mg/ml的工作液，40μL没食子酸工作液加1.8ml福林-酚试剂（用之前将福林酚试剂稀释十倍，即用水按1:9的比例稀释），室温静置5min，然后加上1.2ml的7.5%碳酸氢钠溶液，混匀，室温静置60分钟，在765nm处测定吸光值。制作标准曲线，得到线性方程y=ax+b。2.提取液多酚含量测定：（1）实验材料：禾本科：佛肚竹叶

3、子；黄金间碧竹叶子；绿竹叶子（2）样液制备：2.5g鲜样用研钵磨碎后加入50ml蒸馏水（即料液比为1:20），在100℃水浴提取30min，过滤，弃滤渣，滤液备用。（3）样液多酚含量测定：用40μL植物提取液，加1.8mlfolin-酚试剂（用之前将福林酚试剂稀释十倍，即用水按1:9的比例稀释），室温静置5min，然后加上1.2ml的7.5%碳酸氢钠溶液，混匀，室温静置60分钟，在765nm处测定吸光值。（注意：在测定之前要先进行预实验，找到合适的提取液浓度进行测定，假如提取液浓度过大，将会导致读数过大。在测定时候，反应液的读数在1.2以内最好）。以等量蒸馏水替代提取液，按上述步骤加入试剂后

4、作为空白调零。每个材料的实验重复三次，结果以平均值±标准差的形式表示。（4）多酚含量计算：将步骤（3）测得的吸光值代入标准曲线的方程，计算出提取液的浓度，提取液的浓度×提取液的体积=提取得到的多酚的质量。结果以mgGA/g鲜样来表示。3.不同提取因素对提取效果的影响在上述实验基础上，比较3种材料的多酚含量，以多酚含量最高的材料进行下一步的实验。（1）提取温度对植物多酚提取效果的影响。分别取2.5g鲜样，加入50ml蒸馏水，提取30min，考察不同温度（50、60、70、80、90、100℃）对多酚提取效果的影响。（2）料液比对植物多酚提取效果的影响。分别取2.5g鲜样，按不同料液比（1:10

5、,1:15,1:20,1:25,1:30）加入蒸馏水，在上述得出的最佳提取温度下，提取30min，考察料液比对多酚提取效果的影响。（3）提取时间对植物多酚提取效果的影响分别取2.5g鲜样，在上述得出的最佳提取温度、最佳料液比的条件下，考察提取时间（30、45、60、75、90、120min）对多酚提取效果的影响。4.撰写实验报告：3种材料中，哪种材料的多酚含量最高，并分析各因素对提取效果影响的原因。五、实验结果:(1)没食子酸标准曲线的绘制：没食子酸浓度（mg/ml）00.10.20.40.60.811.2待测样品量（ul)4040404040404040Folin-酚（ml）1.81.81

6、.81.81.81.81.81.87.5%碳酸氢钠（ml）1.21.21.21.21.21.21.21.2765nm吸收值00.1070.2080.4120.7310.8961.1551.40700.0980.1980.3510.7240.861.1291.46900.1060.1990.3320.7310.881.1391.471平均值：00.1040.2020.3650.7290.8791.1411.449样品多酚含量以mg没食子酸/g.FW表示，结果见图5-1。标准曲线回归方程为：Y=1.1953X+0.0340，R2=0.9925。图4-1（2）三种材料提取液多酚含量测定：样品OD值

7、平均值多酚含量（mg/g)黄金间碧竹叶子0.1040.1130.1140.1102.409±0.078佛肚竹叶子0.1070.0930.0980.09932.230±0.110绿竹叶子0.3980.3760.3680.3816.944±0.216图4-2在温度为100摄氏度，料液比1：20，提取时间为30min。绿竹叶子OD值最大，其次是黄金间碧竹叶子，最后是佛肚竹叶子。我们组最后选取绿竹叶子做接下去的单因素