小麦条锈病不同抗性材料中分子标记.docx

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1、【小麦条锈病不同抗性材料中分子标记Yr24　　摘要：为了研究小麦条锈病的抗性遗传基础及分子标记辅助持久抗性新品系选育技术，利用２２个条锈病抗性材料及４个感病材料并以近缘野生材料作为对照，进行抗性基因Ｙｒ２４分子标记的检测。结果表明，只有３个抗病材料扩增出目标带，但扩增条带都较弱；４个感病材料里没有目标条带出现；野生材料中的扩增结果表明该抗性基因及其分子标记于硬粒小麦。　　关键词：条锈病；分子标记；Ｙｒ２４　　中图分类号：Ｓ４３５．１２１．４＋２；Ｑ９４３．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－－2553-03Det

2、ectionofMolecularMarkerYr24-2inStripeRustResistanceWheatCultivarsＺＨＯＵＹａｎ，ＺＨＡＮＧＳｈｅｎｇ－ｌｉ，ＷＥＩＱｉ－ｃｈａｏ　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃｂａｓｉｓｏｆｒｕｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｎｗｈｅａｔａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒａｓｓｉｓｔｅｄｂｒｅｅｄｉｎｇｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｕｌｔｉｖａｒｓ，ｔｈｅｒｕｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅＹｒ２４ｗasｄｅｔｅｃ

3、ｔｅｄｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍ２２ｓｔｒｉｐｅｒｕｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｔcultivars，４ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅcultivars，ａｎｄｗｉｌｄｒｅｌａｔｉｖｅｍａｔｅｒｉａｌｓａｓｃｏｎｔｒｏｌ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔａｒｇｅｔｂａｎｄｗａｓｏｎｌｙａｍｐｌｉｆｉｅｄｉｎｔｈｒｅｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｕｌｔｉｖａｒｓ；ｂｕｔｔｈｅｂａｎｄｓｗｅｒｅｗｅａｋ．Ｎｏｔａｒｇｅｔｂａｎｄｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅ４ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｃｕｌｔｉｖ

4、ａｒｓ．Ｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｗｉｌｄｍａｔｅｒｉａｌｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｗｅｒｅｏｒｉｇｉｎａｔｅｄｆｒｏｍｈａｒｄｗｈｅａｔ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｔｒｉｐｒｕｓｔ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ；Ｙｒ２４小麦条锈病是小麦锈病的一种，是我国小麦生产上分布广、传播快、危害面积很大的重要病害，流行年份给小麦生产造成严重危害甚至毁灭性打击［１］。小麦条锈病的大流行往往是由于新生理小种的出现，导致小麦品种抗性丧失。通过聚

5、合育种将不同抗源的抗性基因聚合至一个个体培育出抗性更持久的新品种是长久防治小麦条锈病的根本措施。应用分子标记技术对抗病基因进行跟踪，实施分子标记辅助选择，可以快速有效地进行抗源累加，把多个抗病基因聚合在同一个品种中，从而大大提高育种效率［２］。研究通过对小麦条锈病的抗性基因分子标记Ｙｒ２４－２的筛选来考察一批抗性材料的抗性基因组成，为新品系的抗性遗传基础鉴定及持久抗性新品种选育提供理论及技术支撑。　　１材料与方法　　１．１材料　　本研究所用的植物材料见表１、２。　　１．２方法　　小麦基因组ＤＮＡ的提取方法为ＣＴＡ

6、Ｂ抽提法［３］。　　用前人已经报道的抗条锈病基因Ｙｒ２４的分子标记对上述２６个抗病、感病材料进行ＰＣＲ扩增［４，５］，来进行本研究。采用１５．０μＬ反应体系：模板ＤＮＡ３．０μＬ，上下游引物各０．５μＬ，１０×Ｂｕｆｆｅｒ１．５μＬ，ｄＮＴＰ１．４μＬ，Ｔａｑ酶０．４μＬ，ｄｄＨ２Ｏ７．７μＬ。ＰＣＲ循环参数：９４℃、５ｍｉｎ；９４℃、１ｍｉｎ，５３℃、１ｍｉｎ，７２℃、１ｍｉｎ，３５个循环；７２℃、１０ｍｉｎ；４℃，保存。采用２％琼脂糖凝胶进行电泳，缓冲液为１×ＴＡＥ；电泳结果用凝胶成像系统进行拍照，保存。　　

7、２结果分析　　２．１Ｙｒ２４－２在２６个材料中的扩增结果　　试验结果表明，扩增出目标条带的材料只有３号、６号和１２号，且这３个材料均为抗病材料，在２３～２６这４个感病材料里没有目标条带出现。　　３个抗病材料扩增出来的目标条带都较弱，只有１２号能够看出相对清晰的目标条带，说明这几个材料的基因组ＤＮＡ中与该标记引物序列配对区之间可能存在序列变异，导致引物结合力不够，扩增条带较弱；除１１号、１４号、１５号材料外还有大量非特异性扩增条带，分别在５００～６００ｂｐ和２００ｂｐ，说明该分子标记引物序列可能位于一个基因家族上，

8、导致扩增出许多非特异的非目标条带，或者是由于ＤＮＡ本身的多态性所致；另外，扩增结果显示，除１５号、１６号材料外，其他材料都没有出现引物二聚体，说明该引物上下游序列间或引物自身没有或有极短互补配对区，引物质量较好。　　２．２Ｙｒ２４－２在野生近缘材料中的扩增结果　　Ｙｒ２４基因于硬粒小麦，为了进一步验证该基因分子标记Ｙｒ２４－２的正确性，以包含硬粒小麦在内的１２种野生近缘材