QC微生物培训电子教案.ppt

《QC微生物培训电子教案.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、QC微生物培训微生物实验室管理（三）洁净实验室的要求：室内墙壁光滑，应尽量避免死角，以便于洗刷消毒。应保持密闭、防尘、洁净、干燥。进行操作时尽量避免走动。室内设备简单，禁止放置杂物。工作台、地面和墙壁可以用0.1％新洁尔灭溶液或0.5％84消毒液擦洗消毒。微生物实验室管理（三）洁净实验室内的温度应控制在18-26℃，相对湿度最好在40%-60%。操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度不低于10000级，局部洁净度为100级。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于10Pa，操作间与缓冲间应保持相对正压，不低于5Pa。常用仪器使用注意事项（一）培养箱

2、：取放物品应快速进行，并随手关闭箱门以维持恒温；定期检查加湿用水水位，注意加水。每周要断电消毒一次。超净工作台：在每次操作前后用消毒液擦拭操作台及可能的死角，然后要打开层流净化装置30min。操作者应穿着洁净工作服、工作鞋、戴口罩。高压灭菌锅：每次使用前都要检查水位；根据不同的物品选择相应的灭菌程序。当屏幕显示“灭菌完成，可以开门”同时蜂鸣器叫时，才可以开门取出物品。提篮不可以超载，试管，玻璃瓶等的灭菌，应是开口向下竖直放置。培养基灭菌时，装载量不超过2/3容积，避免外溢。常用仪器使用注意事项（二）检定菌管理（一）人员要求：菌种设双人、双锁保管。用受过专业培训，有足

3、够的菌种保存经验。检定菌的申购：根据检验品种的需要，菌种保管员现提出购买检定菌的申请，并写明购买菌种名称、标准编号、数量，注明要求购回时间，并交QC主管、品管部经历批准。检定菌的接收：菌种保管员应详细核对购买回菌种与申购单中内容一致后，方可签字接收，并填写《阳性菌购置记录》。检定菌管理（二）检定菌的保存、传代：1菌种应于2～10℃专用冰箱中贮存，并有每天的运行记录。2每月定期对菌种进行传代，传代时须核对编号、代数、传代日期、所用培养基，并记录。3控制传代次数。一般传代次数不得超过5代。检定菌管理（三）检定菌传代编号方法：1编号由阳性菌简写字母+代数+支数组成，中间以

4、“—”连接。2阳性菌的简写字母：大肠埃希菌：Y，黑曲霉：H，金黄色葡萄球菌：JY，枯草芽孢杆菌：KY，白色念珠菌：BY，沙门菌：SY3保存形式：在阳性菌的简写字母后加以汉子说明。保存方式有两种，琼脂斜面保存和半固体加封石蜡，斜面保存不用加以说明，如为半固体在阳性菌的简写字母后加写“半”字。4首次购进的检定菌规定为0代，以购进时编号表示；第一次传代后变为第一代，代数“1”，第二次传代后变为第二代，代数“2”，依次类推。培养基管理培养基的配置：按使用说明书上的要求操作。配置培养基时用纯化水。填写配制记录。在每个已灭菌的培养基容器外做好标记，注明名称、配制日期，培养基的保

5、存：1环境条件：2～10℃为宜，不得冻结。2保存时限：自配培养基应在2周内用完。3琼脂平板最好现配，在冰箱内密闭保存不应超过一周。4培养基的再融化：只允许再融化一次，45~50℃水浴中保存不超过8小时。5培养基的处理：被污染的培养基要经高温灭菌后在进行处理。微生物限度检验方法（一）通常微生物限度检验的方法有平皿法、培养基稀释法、薄膜过滤法等。1.平皿法根据菌数报告法规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培

6、养基至少制备2个平板。微生物限度检验方法（二）2.稀释法：取规定量的供试液，加至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少至不具抑菌作用。用平板法测定菌数时，1ml供试液可等量分注多个平血;控制菌检时，可加大增菌培养基的用量。微生物限度检验方法（三）3.薄膜过滤法采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，若采用其它直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。供试液经薄膜过滤后，

7、若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml。计数方法的验证（一）验证方法验证试验分4组，至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。（1）试验组平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。计数方法的验证（二）（2）菌液组测定所加的试验菌数