紫外分光光度法测定未知样含量方案公式图.doc

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1、紫外分光光度法测定未知样含量(含方案、公式、标准误吸收光谱图)1.仪器1.1紫外可见分光光度计(T6型)；1.2石英吸收池(1cm)：2只；1.3比色管（50mL）10支；1.4吸量管5mL：2支。　2.试剂2.1苯甲酸标准溶液(0.1mg/mL)；2.2未知液：浓度约为40～60ug/mL。3.实验操作3.1吸收曲线的绘制3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5nm测定一次测定吸光度，

2、再次根据最大吸收波长，附近间隔1nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。附图：苯甲酸的吸收曲线。3.1.2标准水杨酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。附图：水杨酸吸收曲线。3.1.3未知液吸收曲线的绘制准确吸取含苯甲

3、酸的未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并摇匀。以蒸馏水为参比，于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线。（观察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）附图：未知液的吸收曲线。3.2吸收池配套性检查石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一吸收池的吸光度（其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，否则更换

4、）作为校正值。3.3校准曲线的绘制及未知样含量的测定准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于50mL比色管中，以水定容，制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0～10ug/mL），在最大吸收波长处，以水为参比，测定各自吸光度。由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（ρ/ug·mL-1）为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线。在相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算出样品稀释液的浓度。试样平行测定三份。4.结果计算根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量。【相关计算及公式】1.校准曲线由试验点经

5、最小二乘法对试验数据进行回归计算，得出一元一次线性回归方程，并计算出该方程的相关系数。然后在坐标纸上画出该回归方程的直线。回归方程为：2.相关系数3.相对标准偏差：按照未知稀释液的A校正计算相对标准偏差RSD4.未知稀释液含量：稀释后未知溶液中待测组分的浓度应由回归方程计算而得。则：5.未知溶液中待测组分的含量：根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液中待测组分的含量。附图1维生素C吸收曲线附图2苯甲酸吸收曲线附图-3附图3水杨酸吸收曲线