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时间:2020-09-13
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1、实验免疫比浊法检测免疫球蛋白12材料和方法3实验结果实验原理实验原理免疫球蛋白(Ig)是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的球蛋白,能与诱导其产生的抗原发生特异性结合,是体液免疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细菌感染,如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高:在系统性红斑狼疮患者中以IgG、IgA或IgG、IgM升高较多见;在类风湿关节炎中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损伤和免疫抑制剂治疗后等情况。实验原理血浆蛋白分析
2、技术经历了:试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散实验发展到现代免疫分析技术,其中很重要得一类就是免疫比浊法。实验原理抗体(Ab)与可溶性抗原(Ag)反应,形成一定结构的免疫复合物,在PEG作用下,成为悬浮于反应溶液中的微粒,使样品浊度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质,当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时,由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱,故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定时,样品的浊度与其中所含抗原量成正比。实验原理聚乙二醇即PEG是中性、无毒且具有独特理化性质和良好的生物相溶性的高分子聚合物,聚乙二醇具有高度的亲水
3、性,在水溶液中有较大的水动力学体积,并且没有免疫原性。在免疫反应中,为增强抗原抗体反应常使用增聚剂,如3-4%的聚乙二醇等,利用其破坏抗原抗体的水化层,促进其靠近反应,但如浓度不适合,高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。优点稳定性好,敏感性高(达ng/L)、精确度高,干扰因素少,结果判断更加客观、准确。快速、简便,结果回报时间短,便于及时将各种信息向临床反馈,又可节约大量人力物力,利于大批量样品的处理。能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。可利用多道计数器、测光仪,同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目,血清用量少,具有明显的应用优势。免疫比
4、浊法的特点:实验原理缺点当抗体或抗原大量过剩时,出现可溶性的复合物,造成误差。应维持反应管中的抗体蛋白量始终过剩,此值要预先测定。受血脂浓度影响。脂蛋白的小颗粒可形成浊度,造成假性升高。少量小抗原抗体复合物极难形成浊度,除非放置较长时间。如要形成较大的的复合物,抗原抗体量应较大。实验原理免疫比浊法的特点:实验材料1.免疫球蛋白A,M,G(IgA,IgM,IgG)测定试剂2.免疫球蛋白A,M,G(IgA,IgM,IgG)校准品,蒸馏水,血清样本3.微量加样枪、试管4.分光光度仪、水浴箱实验方法空白管校准管样本管+蒸馏水(10mL)+校准品(10mL)+样品血清(10
5、mL)OD340+IgX试剂(1mL)37℃5min37℃,10min混匀Ig浓度(g/L)=×Ig校准浓度(g/L)样本管吸光度校准管吸光度结果计算方法:实验结果IgA:1.72g/LIgG:9.77g/LIgM:1.37g/L感谢亲观看此幻灯片,此课件部分内容来源于网络,如有侵权请及时联系我们删除,谢谢配合!
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