欢迎来到天天文库
浏览记录
ID：59456172
大小：205.00 KB
页数：8页
时间：2020-09-16
《微生物实验课件：第2次、PFC试验.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、实验2一、PFC实验一、溶血空斑试验（PFC）（一）实验目的掌握PFC实验原理、实验操作和结果观察；（二）实验原理溶血空斑试验或空斑形成细胞试验（Plagueformingcell,PFC)，体外检测抗体形成细胞。1、SRBC＋B细胞＝记忆性B细胞（抗体形成细胞）2、SRBC＋抗体形成细胞＝（抗原＋抗体复合物）＋补体＝SRBC溶解（溶血空斑）（三）材料与器材1、小鼠，5％和15％SRBC，补体，Hank’s液2、解剖器械，试管，载玻片，石蜡，100目不锈钢网，双面胶带3、37℃培养箱（四）实验方法1、免疫小鼠：4天前5％SRBC腹腔注射免疫小鼠
2、2、制备脾细胞悬液：颈椎脱臼处死小鼠，取脾在不锈钢网上研磨（3mlHank’s液），1000rpm离心6min，去上清，加1mlHank’s液悬浮脾细胞3、制备小室：用双面胶将2张载玻片两端及中间粘起，形成两个小室4、制备灌注液：试管1：脾细胞悬液100μl＋15％SRBC100μl＋补体100μl＋Hank’s液500μl试管2：脾细胞悬液100μl＋15％SRBC100μl＋Hank’s液600μl5、灌注小室:2管分别灌注2个小室，石蜡密封小室的两侧6、孵育：37℃培养箱中40min（1）小室注入液体时不要留有气泡；（2）小室边缘需用石蜡
3、封严；（3）37℃孵箱孵育时，必须放平，不可倾斜；（五）注意事项（六）实验结果计数溶血空斑数，1个溶血空斑代表1个抗体形成细胞。区分：溶血空斑：比周围颜色浅，折光性差，边缘不整齐。气泡：比周围亮，折光性好，边缘整齐。（七）实验结论
此文档下载收益归作者所有
