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时间:2020-09-16
《微生物实验课件:第2次、PFC试验.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、实验2一、PFC实验一、溶血空斑试验(PFC)(一)实验目的掌握PFC实验原理、实验操作和结果观察;(二)实验原理溶血空斑试验或空斑形成细胞试验(Plagueformingcell,PFC),体外检测抗体形成细胞。1、SRBC+B细胞=记忆性B细胞(抗体形成细胞)2、SRBC+抗体形成细胞=(抗原+抗体复合物)+补体=SRBC溶解(溶血空斑)(三)材料与器材1、小鼠,5%和15%SRBC,补体,Hank’s液2、解剖器械,试管,载玻片,石蜡,100目不锈钢网,双面胶带3、37℃培养箱(四)实验方法1、免疫小鼠:4天前5%SRBC腹腔注射免疫小鼠
2、2、制备脾细胞悬液:颈椎脱臼处死小鼠,取脾在不锈钢网上研磨(3mlHank’s液),1000rpm离心6min,去上清,加1mlHank’s液悬浮脾细胞3、制备小室:用双面胶将2张载玻片两端及中间粘起,形成两个小室4、制备灌注液:试管1:脾细胞悬液100μl+15%SRBC100μl+补体100μl+Hank’s液500μl试管2:脾细胞悬液100μl+15%SRBC100μl+Hank’s液600μl5、灌注小室:2管分别灌注2个小室,石蜡密封小室的两侧6、孵育:37℃培养箱中40min(1)小室注入液体时不要留有气泡;(2)小室边缘需用石蜡
3、封严;(3)37℃孵箱孵育时,必须放平,不可倾斜;(五)注意事项(六)实验结果计数溶血空斑数,1个溶血空斑代表1个抗体形成细胞。区分:溶血空斑:比周围颜色浅,折光性差,边缘不整齐。气泡:比周围亮,折光性好,边缘整齐。(七)实验结论
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