CELL-基本培养方法ppt课件.ppt

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1、细胞培养操作前及操作中应注意事项无菌操作贯穿细胞培养的始终一、培养操作前注意1.培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。2.操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线消毒30分钟）。3.洗手和着装（原则上与外科手术相同）。4.火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管）。二、培养操作中注意：动作准确敏捷有序；培养用液开口后应45度倾斜，不再重复使用的应立即封口；一个吸管只能吸一种液体；不能面向操作台讲话或咳嗽。基本的培养方法悬滴培养方法：悬滴培养用的凹载玻片单位：mm（一）单盖玻片培养方法左图；凹载玻片支

2、架右图：单盖玻片培养法操作图解1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡密封a为正确操作b错误操作8、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养9、培养7-8个小时，组织块向外生长，培养24小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），48小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液。盖玻片法再培养1、2、眼科刀切除生长晕3方型培养物切为两到四片4、5培养物漂洗6、7、再培养此方法易污染（二）双盖玻片悬滴培养法双盖玻片图解：1、载体盖玻片2、带培养物盖玻

3、片与单盖玻片不同之处：1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少污染。二、培养瓶培养方法20世纪50年代Carrel设计了卡氏瓶Earle设计了T-培养瓶用血浆固定组织块的培养方法图:卡氏瓶培养组织块1.消毒卡氏瓶2.火焰略烧瓶口3.取少量血浆加入瓶底4.再加等量胚胎浸出液5.接种组织块7.上盖8.消毒9加入培养液10.通气用透明纸固定组织块的培养方法图:内放有孔透明纸的培养瓶培养a.一个T培养瓶内放有有孔透明纸b.卡氏瓶

4、接种后图解1.有孔透明纸2.组织块3.培养液旋转管培养法：与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。旋转管培养方法用具a.简易旋转鼓，可放入培养箱内b.带旋转鼓装置的培养箱c.培养用的旋转管1.示血浆的高度2.示接种组织间间距3.示加培养液4.示可放旋转鼓内培养d.放旋转管的支架.(1.接种组织块时用2.观察时用)四.灌注小室培养法优点1.连续观察活细胞的动态变化2.研究理化性质对培养细胞的影响和作用3.活细胞的反应.不锈钢培养小室图A中央切面图B侧面图(mm)

5、灌注小室及灌注系统示意图A.排液瓶B.受液瓶C.不锈钢灌注小室D.扁锥型小孔道E、F、J.2号注射针头G、H.塑料导管I玻璃导管K、L.14号注射针头(塞以棉花)五.培养板培养方法无菌条件下操作，在超净工作台下进行培养过程：1、取材并制备拟用于培养的细胞悬液2、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内3、给培养板各孔补加足够的培养液4、加盖，放入CO2培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于CO2培养箱中培养3-5小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养

6、）5、每隔2-3天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入新的培养液。盖上盖子继续培养。六、转瓶培养生物观测台