黄曲霉毒素1检测试剂盒.doc

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1、黄曲霉毒素B1检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）1原理及用途本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样品中的黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉毒素B1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素B1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素B1的残留量。2技术指标2.1试剂

2、盒灵敏度：0.01ppb(ng/ml)2.2反应模式：25℃，30min～15min2.3检测下限：谷物……………………………………0.05ppb配合饲料………………………………0.1ppb食用油、花生…………………………0.2ppb酱类、麦类等饲料……………………0.1ppb啤酒……………………………………0.1ppb葡萄酒、酱油、醋……………………0.05ppb2.4交叉反应率：黄曲霉毒素B1…………………………100%2.5样本回收率：谷物及配合饲料……………………85%±15%花生……………

3、……………………82±15%食用油………………………………85±15%酱类、麦类等饲料………………83±15%啤酒………………………………84±15%葡萄酒、酱油、醋………………87±15%3试剂盒组成酶标板……………………………96孔标准液（黑盖）：各1ml0ppb、0.01ppb、0.03ppb、0.09ppb、0.27ppb、0.81ppb高标准液：100ppb…………………1ml酶标记物（红盖）…………………5.5ml抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml底物液A（白盖）……………………6

4、ml底物液B（黑盖）……………………6ml终止液（黄盖）………………………6ml20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml说明书………………………………1份4需要的器材和试剂4.1仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）4.2微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl4.3试剂：甲醇、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷5样本前处理5.1样本处理前须知：实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。5.2配液

5、：配液1：样品提取液70%甲醇，即V甲醇:V去离子水=7：3。5.3样本前处理步骤：5.3.1谷物处理方法1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加5ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；3）取50μl进行分析。样本稀释倍数：5检测下限：0.05ppb5.3.2配合饲料处理方法1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，

6、混匀；3）取50μl进行分析。样本稀释倍数：10检测下限：0.1ppb（若样本中黄曲霉毒素含量较高，可取2）步骤中已混匀的液体，以35%甲醇进行稀释，此时样本稀释倍数则为实际稀释倍数。例如：取2）步骤中液体以35%甲醇10倍稀释，实际稀释倍数为10×10=100，检测下限：2ppb）5.3.3食用油、花生、高油脂的饲料处理方法1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加8ml正己烷和10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；2）去除上层液体，取0.5ml下层液体加入0.5ml去离

7、子水，混匀，再取混匀液体0.5ml加入0.5ml35%甲醇，振荡30S；3）取50μl进行分析。样本稀释倍数：20检测下限：0.2ppb5.3.4酱类、麦类、饼干、糕点等食品或调料，以及饲料浓缩料等饲料处理方法1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；2）取2ml上清，加入4ml三氯甲烷（或二氯甲烷），振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；3）转移上层液体到另一容器中，下层液留置备用，向上层液中再加入4ml三氯甲烷（或二氯甲烷），

8、充分振荡混5分钟，室温4000转/分离心10分钟；4）去除上层液体，合并两次的下层液体并充分混匀；5）取合并后的下层液体2ml于50-60℃氮气下吹干；6）加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去离子水混匀；7）取50μl进行分析。样本稀释倍数：10检测下限：0.1ppb5.3.5啤酒处理方法1）将啤酒充分搅拌（去除CO2），取2ml啤酒样品，加入1ml蒸馏水，再加入7ml甲醇，振荡5分钟；2）取混匀后的样品液0.5ml加入0.5ml去离子水，混匀；