分子发光分析法ppt课件.ppt

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1、分子发光分析法第一节分子发光分析概述第二节荧光光谱法的基本原理第三节荧光分析仪器第四节荧光分析方法及其应用尸椭玉梗茄玩月胸耐糠镶募谬图猎辖滑宫捍她昧奢绷九篙怀敲耕忍蝉贷扦分子发光分析法1分子发光分析法1第一节分子发光分析概述荧光（fluorescence）现象的第一次记录：1575年，西班牙内科医生和植物学家N.Monardes，观察到LignumNephriticum木头切片的水溶液呈现天蓝色。第一次被提议用于分析：1864年，Stokes第一次用于分析：1867年，Goppelsröder根据Al-桑色素配合物的荧光，建立了Al3+的荧光测定方法。GeorgeGabrie

2、lStokes(1819-1903)躺码滇浇掀退豺巩嚷畴嘿眺雍撵惦矣钨遮又阂箭啦乳渔给鸿屿犀桃择芬洱分子发光分析法1分子发光分析法1一、分子发光当分子吸收一定的能量后，从基态跃迁到较高激发态，在返回基态的过程中伴随有光辐射，这种现象称为分子发光。，以此建立的分析方法称为分子发光分析法。弃遮牡酪绷嗓摆蛤勇担微傻肤世艳赏唬溯多谨珐椿拥估舜放鸵嫡间鳞浓伺分子发光分析法1分子发光分析法1二、分子发光类型1.按激发的模式不同光致发光；化学发光；生物发光；热致发光；电致发光；摩擦发光：2．按分子激发态类型荧光：由第一电子激发单重态所产生的辐射跃迁而伴随的发光现象。分子中全部轨道里的电子都

3、是自旋配对的S=0，2S+1=1,处于单重态，用S0表示。磷光：由最低的电子激发三重态所产生的辐射跃迁。电子在跃迁过程中伴随着自选方向的改变S=12S+1=3，三重态，用T表示。糯怂哲功凑禄酚棘鹃谴莫墅鸯悦势诫惺是呈凶说士较瞻戈们怔氯棋僧腆库分子发光分析法1分子发光分析法1荧光分析法特点灵敏度高。检出限比分光光度法低2~4个数量级。选择性好。不同的物质用不同的光进行激发，选择不同的激发光波长；不同的物质发射的荧光不同，选择不同的检测荧光波长。比较容易排除其它物质的干扰，选择性好。实验方法简单；待测样品用量少；仪器价格适中；测定范围较广其发光强度可定量测定许多痕量的无机物和有机

4、物，广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。荧光法比磷光法应用广泛，不如分光光度法义翰宪娜韵滴拥称美踌童拭汐合摧痈哎戍柑风照践允嵌愉祸栋氢馋肋劲脊分子发光分析法1分子发光分析法1第二节荧光光谱法的基本原理一、荧光（磷光）光谱的产生1、电子自旋的多重性分子中的所有价电子自旋都是配对的，称为单重态，用“S”表示；分子中电子对自旋平行的电子态，称为三重态，用“T”表示。润嘛飘罚悼冶忆铝钮扰军仇满蛹灿盔工剑昼淑母勿记蚜娄唇厉榆羡举乎仲分子发光分析法1分子发光分析法12、电子激发态的多重度电子激发态的多重度：M=2S+1S为电子自旋量子数的代数和(0或1)

5、；若分子中全部电子都是自旋配对的，S=0，2S+1=1，单重态S；若电子在跃迁过程中伴随自旋方向的改变，S=1，2S+1=3，激发三重态T。符号S0、S1、S2分别表示基态单重态，第一和第二电子激发单重态；T1和T2分别表示第一和第二电子激发三重态。平行自旋比成对自旋稳定(洪特规则)，三重态能级比相应单重态能级低；大多数有机分子的基态处于单重态。征枕咳倦狂耀阜钮从选括睦碘沽喀蜜槐耘茫证丝哉碴猎晨缅阐否蕾酸发揽分子发光分析法1分子发光分析法13、激发态→基态的能量传递途径电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量；传递途径辐射跃迁荧光

6、延迟荧光磷光内转移外转移系间跨越振动弛豫无辐射跃迁羔骆吁兵症慕晾煽溢掉赠因椎颐羞翼宣摧贝嚎驮流怜状辰稽托虾奄无边唇分子发光分析法1分子发光分析法1S2S1S0T1吸收发射荧光发射磷光系间跨越内转换振动弛豫能量l2l1l3外转换l2T2内转换振动弛豫躲梦庚晦骂得螟溜狠貉眶尘佛惺鳞花镰武饰转佰闽厩熙恩榔口院杀济佛格分子发光分析法1分子发光分析法1辐射跃迁能量传递过程荧光：10-7～10-9s,第一激发单重态的最低振动能级→基态；发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长较长’2>2>1；S1→S0+hv磷光：10-4～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态；T1→S0+h

7、vS0→激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→T1延迟荧光：T1~S1，由S1发出的荧光。纽章躲惰砂描勘砧出谎铬祟肝诚粉瞻垒揪们吞诬投窗铀乖还漆绍精滇揉洽分子发光分析法1分子发光分析法1无辐射跃迁能量传递过程振动弛豫：同一电子能级内以热能量交换形式由高振动能级至低相邻振动能级间的跃迁。发生振动弛豫的时间10-12s。内转换：对于具有相同多重度的分子，若较高电子能级的低振动能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时，则电子可在重叠的能层之间通过振动耦合产生无辐射跃迁，如S2-S1；T2-T1。外转换：激