分子发光分析法ppt课件.ppt

《分子发光分析法ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、红外光谱法光学分析法光谱法非光谱法原子吸收光谱法紫外可见分光光度法分子发光分析原子发射光谱法原子光谱法分子光谱法分子发光分析法物质的分子吸收一定的能量后，其电子从基态跃迁到激发态，如果在返回基态的过程中伴随有光辐射，这种现象称为分子发光(molecularluminescence)，以此建立起来的分析方法,即利用物质分子被激发后具有激发发光特性建立的分析技术，称为分子发光分析法。荧光和磷光分析仪器激发光源激发光源应具有足够的强度、适用波长范围宽，稳定等特点。常用的光源有高压汞灯和氙弧灯。高压汞灯:高压汞灯

2、是以汞蒸气放电发光的光源，主要有365、405、436nm的三条谱线，尤以365nm谱线最强，一般滤光片式的荧光计多采用它为激发光源。氙弧灯：氙弧灯通常就叫氙灯，是目前荧光分光分度计中应用最广泛的一种光源。它是一种电弧气体放电灯，外套为石英，内充氙气，温度时其压力为5atm，工作时压力为20atm，具有光强度大，在200～800nm范围内是连续光源的特点。光源激发单色器样品发射单色器检测系统数据处理系统氙灯高压汞灯、激光光栅、棱镜石英样品池光栅、棱镜光电倍增管记录器、计算机选择激发光单色器；分离荧光单色器

3、分子荧光分析仪器I0IfI分子发光可按激发模式的不同进行分类如果分子因吸收外来辐射光子的能量而被激发，所产生的次级光发射现象称为光致发光，光致发光根据余辉时间的长短又分为磷光和荧光两类；如果分子被激发的能量是由化学反应释放的能量所提供，其发光现象称为化学发光；由生物体内化学反应所引起的发光现象，被称为生物发光；由热活化的离子所引起的发光现象，称为热致发光。分子荧光分析技术有些物质分子吸收了较短波长的光(如紫外光)后，能够被激发，在极短的时间内(延迟几纳秒)发射出较照射波长为长的光，这种光被称为荧光。利用物

4、质分子的荧光特性来进行定性和定量分析，研究其分子的大小形状、结构和运动状态的方法就是分子荧光分析法(molecularfluorescentmethod)。灵敏度高：比UV-Vis的灵敏度高得多（2-4个数量级）！选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。结构信息量多：激发光谱、发射光谱、光强、荧光量子效率、荧光寿命等。应用不广泛：能发荧光的物质少、增强荧光的方法有限、干扰因素较多。荧光分析的特点荧光激发光谱和发射光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。荧光激发光谱(Excita

5、tionspectrum简称激发光谱)就是测量荧光样品的总荧光量随激发波长变化而获得的光谱，它反映不同波长的激发光产生荧光的相对效率。荧光发射光谱(fluorescencespectrum常称为荧光光谱或发射光谱)，它是分子吸收辐射后在不同波长上再发射的结果，它表示在所发射的荧光中各种波长组分的相对强度。荧光激发波长与发射波长的选择一般选择激发光谱中的最高峰的波长为激发波长(λex)，荧光光谱中的最高峰的波长为发射波长(λem)。λex与λem之间的距离至少相差20－30nm，最好为50nm左右。若激发光

6、谱中有几个强度适宜的峰，则应选择较长波长作为λex，以减小样品可能产生的光分解现象。荧光效率当激发光照射在荧光物质上时，吸收光的一部分转换成荧光。吸收光的光子数与发射光的光子数之比称为荧光效率(又称量子效率)，通常用Φ来表示。Φ=发射荧光的光子数/吸收激发光的光子数荧光强度荧光强度通常用F表示，表示荧光的相对强弱。物质所发出的荧光强度与物质所吸收的光量成正比，与物质本身的荧光效率也成正比，当然与仪器条件也是有关的。可用下列公式表示：F=KφI0εCL式中：F：荧光强度K：仪器常数Φ：样品的荧光效率I0：激

7、发光强度ε：是物质的摩尔吸光系数C：物质浓度L：样品池的光径荧光与化学结构的关系①具有刚性结构和平面结构的π电子共轭体系，随π电子共轭度和分子平面度的增大，荧光量子化效率增大，荧光光谱向长波方向移动。ph(CH=CH)3ph,ph(CH=CH)2ph的荧光量子化效率分别为0.68和0.28。(荧光物质的刚性和共平面性的增加，减小了荧光物质与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用，使外转移的能量减小，有利于荧光)。②芳香化合物上的取代基会使该化合物的最大吸收波长和荧光峰改变，不同取代基的作用不同。③卤素取代随卤原

8、子的序数增加，荧光下降，磷光增强。这是所谓的重原子效应。改变了自旋轨道的相互作用，增加了由单重激发态向三重激发态转变的速度。④溶剂、温度、pH和取代基的影响：随着溶剂介电常数（极性）的增大，荧光峰的波长增长，荧光效率增大；大多数荧光物质都随其溶液的温度升高荧光效率降低。溶剂相对介电常数荧光峰/nm荧光效率乙腈38.84100.064丙酮21.54050.055氯仿5.23980.041四氯化碳2.243900.002巯基喹啉