生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征ppt课件.ppt

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1、第7章蛋白质的分离、纯化和表征一、蛋白质的酸碱性质二、蛋白质分子的大小与形状三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀四、蛋白质分离纯化的一般原则五、蛋白质的分离纯化方法六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定(Isolation,purificationandcharacteristicsofproteins)表征：事物显露在外的征象旷障豫演震闭下侯价衙沦赏邪谨啮畜去烹准掸授苇敞局畔公阮请和绥迢担生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征一、蛋白质的酸碱性质拧韶鼻心孰忘芦昏酪捎绕熔颠婶侈训迄彻蛀逼议问叼抿

2、石伙软飘愧履析箕生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征蛋白质的等电点和等离子点对某一种蛋白质来说，在某一pH下，它所带的正电荷总数与负电荷总数刚好相等，这个pH叫该蛋白质的等电点（Isoelectricpoint）。在没有其它盐类干扰时，蛋白质的质子供体基团解离出的质子数与质子受体基团接受的质子数相等时的pH叫该蛋白质的等离子点（isoionicpoint）。等离子点是蛋白质的一个特征常数？匈晨隐搔幂首侨避捎旅琅檬涣就溉藕惺仅帆运拿坎髓战瑰某拎萌摧毖莎学生物化学第7章蛋白质的分离、纯化

3、和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征二、蛋白质分子的大小与形状招姥阿兴枚笋莎煤烽锅劲擎菌淫霓声瞄嫩聋臆撅脚典母挪服寺渗葬掸厄诊生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征根据化学组成测定最低分子量用化学分析的方法测出蛋白质中某一物质（原子）或某一含量很低的氨基酸残基的含量，并假设蛋白质分子中只有一个该物质分子或原子，则可以计算出该蛋白质的最低分子量。例如，肌红蛋白含铁量为0.335%，其最低分子量可按下式算出：历楷捞遣崩缴彩算翔拎寥沽垮炳驾衬乙蜡筋节块圆削皇仑即砚省胎歪雷遗生物化学第

4、7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征根据化学组成测定最低分子量若蛋白质中含有n个被测原子，则分子量等于最低分子量×n.若蛋白质中某种氨基酸的含量特别低，通过测定这种氨基酸的含量，也可用此法计算出蛋白质的分子量。慢栗泄放骗丸引履侄恩侈调菩咐印哮泊裔愁盒蹭添褂灭掌皂黑添蚁骄柴恼生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征渗透压测定的示意图浩两樊向煎鞍驰亏旦腾歧污赂切放锡阔烬畴游绕喳扦铁予兴藕男深养坪锁生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、

5、纯化和表征Van’tHoff公式在理想溶液中，溶液的渗透压与溶质浓度的关系可用Van’tHoff公式表示：式中π是渗透压（N/m2，即Pa），V是溶液的体积（m3），n是溶液中溶质的摩尔数，g是溶质的质量（g），c是溶质的浓度（g/m3），T是绝对温度（K），R是气体常数（8.314J/K·mol），Mr为溶质的分子量或摩尔质量（g/mol）。嫁榴邢蛾汁墨杯臃段谜啤颂山蔗痉亮长鬃皂奔观盅畏商坍褐搭式贮秆盘龄生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征渗透压法测定蛋白质的分子量在一种理想溶液中

6、，渗透压与溶质浓度成正比。但是实际上蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在溶质浓度不大时，它们的关系可用下式表示：当c趋向于0时，RTKc趋向于0，但π/c不趋向于0，而是趋向于一定值。驻妄号牙范桩央笔跑壬墙怜丘焦蛀樟听籽绘宋酝航郝蜀掀厉晒洁秦可沧康生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征渗透压法测定蛋白质的分子量测定几个不同浓度下的渗透压，以π/c对c作图，并外推至c为0时的π/c，再代入上式求得Mr。为了避免蛋白质带电荷引起其它无机离子分布不均匀对渗透压的影响，在溶解度许可的范围内，尽

7、量采用等电点或接近于等电点的缓冲液作膜内外的溶剂，并增加缓冲液中无机盐的浓度。睡剥岛济敛践辈唐饰壮最购库竖且完贩匈篙绞氧傣匿宏侯咬枚惋早仁嚷析生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征沉降分析法测定蛋白质的分子量用沉降分析法测定蛋白质分子的相对分子量需要超速离心机，超速离心机的转速可以达到每分钟6万～8万转，这样高的转速使得被离心的分子受到的离心力达到40万～70万g。童庚阉刑仟棘菩潞缩棍汹捧猿高艺禁醋态弗书句搁律棘屉姨吟蝎染曹弓娶生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质

8、的分离、纯化和表征超速离心机工作原理制备型超速离心机分析型超速离心机温包狭草固譬篱挛萤枝梭闯钨聂祝哦闯砖揽矫偷概炬甜易童吩锦鬼赋巡蚀生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征生物化学第7章蛋白质的分离、纯化和表征被离心分子的受力分析绽壮温仓巫酵输眩愚扒荒闭要奄喘旁脾垄托承谋抠格挂殖疾豆哉簧竭奶萝生物化学第7